張振波，周健鵬

(1.天津市天和醫(yī)院，天津 300050； 2.天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070)

吲哚美辛又名消炎痛，為非甾體抗炎藥，是最強(qiáng)的COX抑制劑之一，有突出的消炎作用。吲哚美辛貼片在《中國(guó)藥典》2005版中有收載，但含量測(cè)定采用的是紫外-可見(jiàn)分光光度法，本制劑處方中的一些輔料及降解雜質(zhì)在該檢測(cè)波長(zhǎng)下可能有紫外吸收，不甚合理；國(guó)內(nèi)外關(guān)于吲哚美辛貼片含量測(cè)定的報(bào)道較少；本文參考國(guó)外多國(guó)藥典，建立HPLC法測(cè)定吲哚美辛貼片中吲哚美辛的含量，方法簡(jiǎn)便、易行、準(zhǔn)確度高。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(DAD檢測(cè)器)； METTLER AE 240天平。甲醇為色譜純，水為去離子水，乙醇、磷酸為分析純。吲哚美辛貼片(35 mg/片，14 cm×10 cm)和吲哚美辛對(duì)照品(日本A廠家提供，對(duì)照品及品質(zhì)報(bào)告書經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所復(fù)核)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)，以甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為228 nm，進(jìn)樣量10 μl。理論板數(shù)按吲哚美辛峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000，吲哚美辛峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液 精密稱取吲哚美辛對(duì)照品適量，加50%乙醇溶液溶解并稀釋制成每1 ml中含0.1 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液 取本品10片，小心除去覆蓋的塑料片，將粘貼面對(duì)折，用潔凈的剪刀剪成小塊，精密稱取適量(約相當(dāng)于吲哚美辛10 mg)，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇溶液100 ml，加塞，超聲1 h(超聲過(guò)程中保持水浴溫度不超過(guò)32 ℃)，取出，強(qiáng)烈振搖60 s，放置，再振搖60 s，取部分溶液，離心5 min(1 000 r/min)，取上清液作為供試品溶液。取對(duì)照品和供試品溶液各10 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，色譜圖，見(jiàn)圖1。

2.3線性關(guān)系考察 精密稱取吲哚美辛對(duì)照品適量，加50%乙醇溶液溶解并稀釋制成0.5 mg/ml的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精取適量，用50%乙醇溶液稀釋制成一系列濃度的線性溶液，分別精密量取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以濃度為橫坐標(biāo)(X)，以相對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸。吲哚美辛線性方程為Y=27.312X-0.032(n=6，r=1.000)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明主成分吲哚美辛在10～200 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4精密度與重復(fù)性試驗(yàn)

2.4.1系統(tǒng)精密度 取對(duì)照品溶液10 μl重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積來(lái)考察精密度，計(jì)算RSD為0.1%。

2.4.2方法精密度 取供試品6份制備供試品溶液，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果測(cè)得含量分別為98.1%、97.65%、98.83%、99.25%、98.13%和98.50%，RSD為0.6%。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液及供試品溶液分別在室溫放置不同時(shí)間(0、3、8、14和24 h)后依法測(cè)定，按吲哚美辛峰面積計(jì)算RSD分別為0.05%和1.23%。結(jié)果表明, 吲哚美辛溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6加樣回收率試驗(yàn) 取吲哚美辛對(duì)照品適量，加50%乙醇溶解并稀釋制成每1 ml中含1.0 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。精密稱取供試品適量(約相當(dāng)于主藥吲哚美辛2 mg)9份，置50 ml量瓶中，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液4、5和6 ml各3份，濃度分別為0.12、0.14和0.16 mg/ml，按上述方法分別測(cè)定，以測(cè)得藥量與加入藥量之比計(jì)算回收率。經(jīng)試驗(yàn)，本方法平均回收率為99.6%(n=9)，RSD為1.1%。見(jiàn)表1。

2.7含量測(cè)定 分別取3批樣品，制備供試品溶液，精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，按標(biāo)示量的百分含量計(jì)算，3批樣品中吲哚美辛含量分別為98.4%、97.1%和98.2%。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.8主峰純度測(cè)定 分別取吲哚美辛對(duì)照品和供試品進(jìn)行主峰純度分析，結(jié)果顯示，對(duì)照品純度因子為999.994，供試品純度因子為999.995。

3 討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 稱取吲哚美辛對(duì)照品適量，加50%乙醇溶液溶解并稀釋制成每1 ml中含0.1 mg的溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)下掃紫外圖譜。吲哚美辛在206、228和318 nm波長(zhǎng)下有最大吸收?？紤]流動(dòng)相及溶劑中甲醇、乙醇的末端吸收效應(yīng)，各雜質(zhì)在318 nm波長(zhǎng)下無(wú)紫外吸收，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為228 nm。

3.2流動(dòng)相的選擇 參考《中國(guó)藥典》2005年版二部、BP 2008、EP 5.0、USP 31、JP 15收載的吲哚美辛及其制劑，分別考察甲醇-水-磷酸(700∶300∶1)、甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)、甲醇-水(400∶600∶1)、乙腈-水(1∶1，其中含0.01 mol/L磷酸二氫鈉和0.01 mol/L磷酸氫二鈉)作為流動(dòng)相。在甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)系統(tǒng)下，供試液主峰、輔料峰、各降解雜質(zhì)峰之間的分離度良好，分析時(shí)間恰當(dāng)。故以甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)為流動(dòng)相，溶劑為50%乙醇。

3.3輔料的研究 由于提供樣品的國(guó)外廠家未提供空白貼片，因此未能提供空白輔料的色譜圖，但要求廠方提供了處方，對(duì)處方中有紫外吸收的輔料分別進(jìn)行了定位，供試品色譜圖中的色譜峰依次為克羅米通、麝香草酚藍(lán)、吲哚美辛，各成分之間分離度符合要求。

該項(xiàng)研究可為我國(guó)藥品檢驗(yàn)提供快速、準(zhǔn)確、靈敏的測(cè)定方法，研究結(jié)果可以為將來(lái)《中國(guó)藥典》提高貼劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供詳實(shí)的數(shù)據(jù)，完善貼劑質(zhì)量控制方法，在確保藥品安全性方面具有重要的社會(huì)意義。