于 和，林 宏，林 瀾

(1．天津市兒童醫(yī)院，天津 300074； 2.天津新豐制藥有限公司,天津 300457)

頭孢替唑鈉(ceftizoxime sodium)是第一代頭孢菌素抗生素，作用機制為抑制細菌細胞壁的合成而發(fā)揮其抗菌活性。對革蘭陽性菌，包括產(chǎn)青霉素酶和不產(chǎn)生青霉素酶的金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌等皆比較敏感，對某些革蘭陰性菌呈中度敏感，如大腸桿菌、克雷白菌屬等。本文介紹HPLC法對注射用頭孢替唑鈉的含量測定及其方法學的系統(tǒng)研究。

1 儀器與試藥

Waters液相色譜系統(tǒng)(Waters515型高效液相色譜儀，Waters 2487紫外檢測器)。注射用頭孢替唑鈉(規(guī)格0.5 g，批號080901、080902、080903)和對照品均由天津新豐制藥有限公司提供。乙腈為色譜純；枸櫞酸為化學純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為YMC Pack ODS-A C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相為枸櫞酸溶液(取枸櫞酸3 g，加水溶解并稀釋至900 ml)-乙腈(9∶1)；流速1 ml/min；柱溫40 ℃；檢測波長為254 nm；進樣量20 μl。

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液制備 精密稱取頭孢替唑?qū)φ掌?0 mg，置200 ml量瓶中，以磷酸鹽緩沖液(pH 7.0，0.1 mol/L)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液；精密量取對照品儲備液10 ml至100 ml量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2樣品溶液制備 精密稱取注射用頭孢替唑鈉適量，按“2.2.1”項下方法，制得250 μg/ml樣品儲備液及25 μg/ml的樣品溶液。

2.3線性試驗 分別精密量取對照品儲備液8、9、10、11及12 ml，各置于100 ml量瓶中，用磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)稀釋至刻度，制得濃度為20、22.5、25、27.5及30 μg/ml的 對照品溶液，分別依法進樣，記錄峰面積。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，線性方程為Y=4.18×104X+1.51×104(r=0.999 6)，結(jié)果表明，頭孢替唑鈉在20～30 μg/ml范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4準確度試驗 采用加樣回收試驗方法，精密量取樣品儲備液(250 μg/ml)5 ml置100 ml量瓶中，共9份。分別精密加入對照品(88.7%)儲備液(250 μg/ml) 4、5、6 ml各3份，用磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)稀釋至刻度，搖勻，依法進樣測定。計算回收率，平均加樣回收率100.6%，RSD為0.7%。見表1。

2.5精密度試驗 取同一份樣品依法測定頭孢替唑鈉含量，平行測定6次，計算保留時間、峰面積，峰高的相對標準偏差(RSD%)分別為0.75%、0.56%和0.31%，均小于1.0%。

2.6穩(wěn)定性試驗 取樣品溶液常溫下放置，分別于0、1、2、3、4、5、6、8、10及12 h進樣測定，計算峰面積的相對標準偏差(RSD%)為0.66%，故樣品溶液在12 h內(nèi)測定含量結(jié)果穩(wěn)定。

表1 注射用頭孢替唑鈉加樣回收率試驗結(jié)果

2.7檢測限和定量限

2.7.1檢測限 按照信噪比為3∶1，比較已知濃度樣品測出的信號與空白樣品測出的信號，計算能被可靠檢出的最低濃度是0.05 μg/ml，故定量檢測限為1 ng。

2.7.2定量限 按照信噪比為10∶1，比較已知濃度樣品測出的信號與空白樣品測出的信號，計算能被可靠檢出的最低濃度是0.20 μg/ml，故定量限為4 ng。

2.8含量測定 在上述色譜條件下，精密稱取3批樣品適量，用磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)溶解并稀釋制成每1 ml中含頭孢替唑25 μg的溶液，精密量取20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取頭孢替唑?qū)φ掌愤m量，同法測定。按外標法以峰面積計算出供試品中頭孢替唑的含量，見表2。

表2 樣品中頭孢替唑含量測定結(jié)果

3 討論

3.1色譜柱的影響 選擇4個廠家、4種填料、2種柱長的色譜柱按照含量測定方法對樣品進行檢測，結(jié)果表明：不同色譜柱對含量測定結(jié)果無明顯影響。

3.2溶劑的影響 選擇3種不同牌號的國產(chǎn)乙腈和進口Fisher乙腈，配制流動相，測定樣品含量、溶劑變化對含量測定的影響，結(jié)果表明：乙腈溶劑的變化對含量測定結(jié)果無明顯影響。

3.3流動相的影響 不同流動相比例[枸櫞酸緩沖液(枸櫞酸3 g，加水900 ml溶解)-乙腈的比例為60∶40、70∶30、80∶20、85∶15及90∶10]，結(jié)果表明流動相比例為90∶10得到的主成分峰與溶劑峰能良好分離，理論塔板數(shù)最高，峰型最優(yōu)。

3.4柱溫和流速的影響 柱溫變化(30、35、40 ℃)、選擇不同流速(0.5、1.0和1.5 ml/min)對色譜分離的影響。結(jié)果表明柱溫在40℃、流速為1.0 ml/min的條件下得到的色譜峰保留時間適中、峰型最好。

研究表明，建立的HPLC法測定注射用頭孢替唑鈉含量，省時、準確、靈敏度高，回收率好，可用于產(chǎn)品質(zhì)量控制。

1 中國藥典.二部.2005：附錄172

2 胡昌勤.分離分析方法對抗生素產(chǎn)品質(zhì)量的影響.中國抗生素雜志，2005，30(1)：20