郝光啟，李進(jìn)啟，葛 梅，孫彥余，姜合田，李 偉，沈慶欽

(魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，臨沂 276006)

米格列醇(C8H17NO5)為去氧野尻霉素衍生物，是一種新型口服α-葡萄糖苷酶抑制劑。其降糖作用的機(jī)制是通過在小腸內(nèi)可逆性抑制α-葡萄糖苷酶，減少糖類分解為葡萄糖，并能延遲小腸中葡萄糖的吸收，從而降低飯后血糖升高的幅度[1]。但依據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(YBH00592010)檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)：米格列醇峰與其雜質(zhì)峰分不開、重復(fù)性試驗(yàn)差(主峰響應(yīng)值逐漸變小,連續(xù)進(jìn)樣分析時(shí)米格列醇峰面積的RSD大于20%。)且保留時(shí)間亦有變動(dòng)，導(dǎo)致無法正常檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)通過改變流動(dòng)相組成及pH值建立新方法，新方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度和重復(fù)性好、方法簡(jiǎn)便，可用于米格列醇片溶出度的定量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1100高效液相色譜系統(tǒng)：G1379A脫氣機(jī)、G1311A四元泵、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱、G1315B DAD檢測(cè)器、A.10.01化學(xué)工作站(美國(guó)安捷倫公司)，ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀(天津海益達(dá)科技有限公司)，YB系列真空恒溫干燥箱(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠)，TTL-10B超純水系統(tǒng)(北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司)，PHS-3C型精密pH計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，XS204型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2試藥 米格列醇對(duì)照品(本公司生產(chǎn)的原料藥，經(jīng)HPLC面積歸一化法測(cè)定純度為99.8%以上)，米格列醇片(本公司生產(chǎn)，批號(hào)081201、081202、081203)。乙腈為色譜純(山東禹王實(shí)業(yè)集團(tuán)化工分公司)，磷酸二氫銨、三乙胺均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為超純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性 色譜柱：Lichrospher氨丙基硅烷鍵合硅膠色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫銨溶液(三乙胺調(diào)pH至7.5)(65∶35)；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；流速1.0 ml/min；進(jìn)樣量20 μl；柱溫25 ℃；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器(DAD)。理論塔板數(shù)按米格列醇峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。

2.2溶液制備

2.2.1供試品溶液 取本品，照溶出度測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄Ⅹ C第一法)，以水500 ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作。經(jīng)20 min時(shí)，取溶液適量，濾過(濾膜孔徑不得大于0.45 μm)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.2對(duì)照品溶液 取經(jīng)60 ℃減壓干燥至恒重的米格列醇對(duì)照品適量，精密稱定102.7 mg，置50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。精密量取溶液5 ml置于100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3空白輔料溶液 依處方取不含米格列醇的空白輔料適量(約相當(dāng)于50 mg的米格列醇處方量)置于500 ml溶出杯中，照“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法配制。

2.3專屬性試驗(yàn) 分別依次取對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白輔料溶液依上述色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見圖1，可見空白輔料不會(huì)干擾米格列醇的測(cè)定。

1. 米格列醇

2.4線性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，分別精密量取溶液1.0、3.0、5.0、7.0和9.0 ml，分置于100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定。以米格列醇峰面積對(duì)其濃度(μg/ml)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=7.23X+1.97(r=0.999 9)。結(jié)果表明：米格列醇在20.54～184.86 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果米格列醇峰面積的RSD為0.082%(n=6)，說明進(jìn)樣精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下溶出度供試品溶液1份，依法分別于0、1、2、4、6和8 h后進(jìn)樣分析，結(jié)果米格列醇峰面積的RSD為0.13%(n=6)，表明米格列醇溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7回收率試驗(yàn) 稱取經(jīng)60 ℃減壓干燥至恒重的米格列醇對(duì)照品約30、40和50 mg，各6份，均精密稱定，分置于500 ml溶出杯中，并按處方比例分別加入輔料，分別依“2.2.1”和“2.2.2”項(xiàng)下方法制備回收率試驗(yàn)溶液和對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.4%，RSD為0.76%，見表1。

2.8定量限和檢測(cè)限試驗(yàn) 精密稱取米格列醇對(duì)照品適量，用水溶解并稀釋制成一系列不同濃度的溶液，依法測(cè)定。當(dāng)信噪比S/N=10±1時(shí)，米格列醇濃度為0.21 μg/ml，米格列醇的定量限為4.20 ng；當(dāng)信噪比S/N=3±1時(shí)，米格列醇濃度為0.066 μg/ml，米格列醇的檢測(cè)限為1.32 ng。

表1 溶出度回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品檢查結(jié)果 取3批米格列醇片(批號(hào)081201、081202、081203)依法測(cè)定，結(jié)果3批樣品溶出量(占標(biāo)示量)平均值分別為96.8%、95.6%和97.0%，均大于溶出限度75%，符合規(guī)定。

3 討論

經(jīng)相關(guān)文獻(xiàn)檢索，目前世界主要藥典如USP、EP、BP等均無米格列醇及其制劑的檢測(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，而依國(guó)家藥監(jiān)局批準(zhǔn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如前言所述情況無法正常檢測(cè)，原因可能是其流動(dòng)相配制過程中用磷酸調(diào)pH值至4.0，導(dǎo)致在酸性環(huán)境中流動(dòng)相中的酸與色譜柱固定相鍵合的氨丙基發(fā)生相互作用，使色譜柱柱效降低。同時(shí)，由于米格列醇結(jié)構(gòu)式中N原子有孤對(duì)電子，易與酸性流動(dòng)相中H+結(jié)合產(chǎn)生質(zhì)子化，降低其色譜分配系數(shù)(K),從而縮短米格列醇在色譜柱固定相的保留行為，導(dǎo)致其較快流出(保留時(shí)間短)和分離情況較差。試驗(yàn)曾應(yīng)用0.01%氨水溶液(含5%乙腈)對(duì)氨丙基色譜柱進(jìn)行再生，效果理想。由此聯(lián)想到在0.01 mol/L磷酸二氫銨溶液中滴加三乙胺調(diào)pH值至中性到弱堿性，試驗(yàn)曾考查在0.01 mol/L磷酸二氫銨溶液中用三乙胺調(diào)pH值至6.0、6.5、7.0、7.5等不同pH值時(shí)米格列醇重復(fù)性試驗(yàn)和分離度(R)情況,發(fā)現(xiàn)隨著pH值的不斷增加米格列醇重復(fù)性試驗(yàn)和分離度(R)越來越好。這主要是因?yàn)殡S著pH值的不斷增加，溶液逐漸由酸性變?yōu)槿鯄A性，抑制了米格列醇質(zhì)子化而增大其色譜分配系數(shù)(K)，從而增加米格列醇在色譜柱固定相上的保留行為，提高了其色譜分離性能。同時(shí)，流動(dòng)相的弱堿性亦阻止原標(biāo)準(zhǔn)流動(dòng)相中的酸與色譜柱固定相鍵合的氨丙基發(fā)生相互作用，從而提高了氨丙基色譜柱的柱效，增加其色譜行為的穩(wěn)定性。同時(shí)考慮到色譜柱pH的應(yīng)用范圍(pH 2～8)，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)、不斷優(yōu)化，最終確定本色譜條件。

新建立的本方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可用于米格列醇片的溶出度檢查方法。

1 黃雅琴,田成科.米格列醇片.中國(guó)新藥雜志,2005,14(5): 638