劉曉軍

(天津市南開醫(yī)院， 天津 300100)

復(fù)方甲硝唑西咪替丁乳膏為本院制劑，是由甲硝唑、西咪替丁、氯霉素和林可霉素等制成的乳膏劑，用于治療痤瘡酒渣樣皮炎等，本實(shí)驗采用高效液相色譜法同時測定該制劑的主藥甲硝唑和氯霉素的含量，為建立該制劑的質(zhì)量控制方法提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津SPD-10A紫外檢測器，LC-10AT壓力泵，AUTO SCIENCE AT-330 柱溫箱，島津 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；試劑均為色譜純，實(shí)驗用水為娃哈哈飲用純凈水。甲硝唑(批號100191-200305)和氯霉素(批號130555-200501)對照品均購自中國藥品生物制品檢定所。復(fù)方甲硝唑西咪替丁乳膏為本院制劑(批號20100411和20100520)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為島津 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動相：1%庚烷磺酸鈉的溶液(取1%庚烷磺酸鈉溶液500 ml與二甲基甲酰胺5 ml、冰醋酸0.5 ml，混勻)-乙腈(73∶27)；檢測波長為288 nm；流速1.0 ml/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μl。

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取甲硝唑?qū)φ掌放c氯霉素對照品各適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 ml中含甲硝唑100 μg、氯霉素25 μg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 精密稱取本品約0.5 g，置100 ml量瓶中，加甲醇適量，置水浴上加熱溶解，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，冰浴中冷卻2 h以上，取出，立刻濾過，取續(xù)濾液放置至室溫，即得。

2.2.3陰性溶液的制備 取基質(zhì)適量，不加甲硝唑和氯霉素，按本乳膏劑制法制備陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，可使供試品中大部分色譜峰得以充分分離，且峰形良好，色譜圖見圖1。

1.甲硝唑 2.氯霉素

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密稱取甲硝唑和氯霉素對照品適量，加甲醇配制成對照品系列溶液，其中甲硝唑質(zhì)量濃度分別為23、46、69、92和138 μg/ml；氯霉素質(zhì)量濃度分別為12、24、36、48和72 μg/ml。分別按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積(Y)對其相應(yīng)濃度(X)做線性回歸，得到甲硝唑回歸方程：Y=12 344X+105 885(r=0.999 0)，表明甲硝唑在23～138 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；得到氯霉素回歸方程Y=15 459X+ 61 475(r=0.999 5)，表明氯霉素在12～72 μg/ ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4進(jìn)樣重現(xiàn)性 取甲硝唑和氯霉素對照品混合溶液(甲硝唑100 μg/ml，氯霉素25 μg/ ml)，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積值，得甲硝唑峰面積RSD為1.12%；氯霉素峰面積RSD為1.05%。

2.5重復(fù)性試驗 取同一批樣品，精密稱取5份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，得甲硝唑含量RSD為1.41%；氯霉素含量RSD為1.25%，表明本法重復(fù)性良好。

2.6穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6和8 h按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，得甲硝唑峰面積RSD為1.37%；氯霉素峰面積RSD為1.42%，表明樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7回收率試驗 取已知含量的樣品5份，精密加入一定量的甲硝唑和氯霉素對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，計算回收率，結(jié)果甲硝唑平均回收率為99.18%，RSD為0.93%；氯霉素平均回收率為99.59%，RSD為1.30%。結(jié)果見表1和表2。

表1 甲硝唑回收率試驗(n=5)

表2 氯霉素回收率試驗(n=5)

2.8樣品含量測定 分別取2批樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定(n=2)

3 討論

根據(jù)2005版《中國藥典》[1]氯霉素的含量測定方法來進(jìn)行流動相與檢測波長的選擇，流動相確定為1%庚烷磺酸鈉的溶液(取1%庚烷磺酸鈉溶液500 ml與二甲基甲酰胺5 ml、冰醋酸0.5 ml，混勻)-乙腈(73∶27)，檢測波長確定為288 nm，結(jié)果表明，在該液相條件下，分離效果更佳，測定值準(zhǔn)確度高，適用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 中國藥典.一部.2005:776