曹立全
(天津市藥品檢驗所,天津 300070)
隨著《實驗室資質(zhì)認定評審準則》于2007年1月1日的實施,通過相關(guān)資質(zhì)認定的各級藥品檢驗機構(gòu)均建立了新的質(zhì)量體系。根據(jù)質(zhì)量體系運行的要求,各實驗室應建立有關(guān)測量不確定度的程序文件,以評價檢測結(jié)果的準確性和可靠性。根據(jù)JJF1059-1999《測量不確定度評定與表示》中的有關(guān)規(guī)定,參考相關(guān)文獻資料[1,2],結(jié)合日常的檢驗工作,對注射用頭孢地嗪鈉的含量測定結(jié)果進行測量不確定度評估,為評價檢測報告提供科學依據(jù)。
1.1儀器與試藥 島津LC-2010C高效液相色譜儀;shimadzu CLASS-VP工作站;色譜柱:Agilent C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);梅特勒AG-245電子天平(瑞士,十萬分之一)。頭孢地嗪對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,含量88.6%,批號130520-200501);注射用頭孢地嗪鈉(規(guī)格0.5 g,批號523240);乙腈為色譜純,水為純化水,其他試劑均為分析純。
1.2色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以磷酸鹽乙腈溶液(取磷酸二氫鉀0.8 g,無水磷酸氫二鈉0.2 g溶于水,加入80 ml乙腈,用水稀釋至1 000 ml)為流動相;檢測波長為254 nm;柱溫40 ℃;流速1.0 ml/min;進樣量10 μl。
1.3溶液的制備
1.3.1對照品溶液 精密稱取頭孢地嗪對照品28.31和28.92 mg,分別置50 ml量瓶中,加水適量使溶解并定容至刻度,搖勻。
1.3.2供試品溶液 精密稱取平均裝量項下注射用頭孢地嗪鈉27.62和27.37 mg,分別置50 ml量瓶中,加水適量使溶解并定容至刻度,搖勻。
2.1識別不確定度來源 主要有對照品與供試品溶液峰面積響應值、對照品與供試品的稱量與稀釋、對照品純度、供試品平均裝量等。
2.2建立數(shù)學模型
2.3分析并計算不確定度分量
2.3.1對照品引入的相對標準不確定度urel(S)
對照品稱樣2份,分別為28.31和28.92 mg,則對照品稱樣的相對標準不確定度
urel(Sm)
urel(ρ)
=0.029/88.6=3.3×10-4。
合并以上兩個分量,則
urel(Sm)
=7.2×10-4。
=5.4×10-4。
2.3.1.3對照品溶液峰面積引入的不確定度urel(SV) 該不確定度的產(chǎn)生主要由重復進樣所引起,由儀器給出的進樣峰面積標準偏差為隨機測量,屬于A類不確定度。2份對照品分別進樣5次和2次,用極差法分別計算其標準不確定度,重復測量的峰面積平均值為8 760 915和8 946 170,極差R1為23 077,R2為7 891,當n=5時極差系數(shù)C1=2.33,則標準不確定度u(SA1)=R1/C1=23 077/2.33=9 904;當n=2時極差系數(shù)C2=1.13,則標準不確定度u(SA2)=R2/C2=7 891/1.13=6 983;則相對標準不確定度
urel(SA)
=1.4×10-3。
2.3.1.4對照品的相對標準不確定度urel(S)
urel(S)
=1.7×10-3
2.3.2供試品引入的相對標準不確定度urel(T)
2.3.2.1供試品稱量引入的相對標準不確定度urel(Tm) 主要來源于供試品稱量和平均裝量。根據(jù)“2.3.1.1”項下所述u(m)=1.3×10-2。供試品稱樣2份,分別為27.62和27.37 mg,則供試品稱樣的相對標準不確定度
urel(Tm)
=6.7×10-4供試品平均裝量為0.541 2 g,其標準偏差為2.3×10-3,按A類評定中合并樣本標準差計算,則供試品平均裝量的相對標準不確定度為
urel(Tm)
=2.0×10-3。
2.3.2.2供試品稀釋引入的相對標準不確定度urel(TV) 同“2.3.1.2”項下,則urel(TV)=5.4×10-4。
2.3.2.3供試品溶液峰面積引入的不確定度urel(TA) 含量測定時,2份供試品溶液分別進樣2次,用極差法分別計算其標準不確定度,重復測量的峰面積平均值為9 013 947和8 941 016,極差R1為10 286,R2為3 080,當n=2時極差系數(shù)C=1.13,則標準不確定度
urel(TA1)=R1/C=10 286/1.13=9 103,
urel(TA2)=R2/C=3 080/1.13=2 726;則相對標準不確定度
urel(TA)
=1.1×10-3。
2.3.2.4供試品的相對標準不確定度urel(T)
urel(T)
=3.2×10-3。
2.3.3計算合成相對標準不確定度urel(X) 供試品含量測定結(jié)果P為101.20%,urel(X)是由對照品引入的相對標準不確定度urel(S)和供試品引入的相對標準不確定度urel(T)所構(gòu)成,故
urel(X)
=0.37%
2.3.4計算擴展不確定度 按95%置信概率,取包含因子k=2,則U95=0.37%×2=0.74%。
2.3.5測量不確定度報告 本次實驗注射用頭孢地嗪鈉的含量為(101.20±0.74)%。
3.1測量不確定度是定量說明檢測結(jié)果的質(zhì)量的一個參數(shù),檢測結(jié)果的可靠性很大程度上取決于其不確定度的大小,測量結(jié)果附有不確定度說明才是完整及有意義的。在本次實驗中,測量不確定度主要來源于供試品的稱量,供試品和對照品色譜峰面積次之,因此,在實驗中降低稱量步驟,加強對儀器的保養(yǎng)以及標準操作的訓練,采用合理的取樣方式,就可以減少人為因素對實驗結(jié)果的影響。
3.2在測量不確定度的實驗方案設(shè)計和評定過程中,要盡可能接近日常檢驗工作的實際情況,在本次評定注射用頭孢地嗪鈉含量測定的不確定度時,即采用了平行實驗的日常檢驗模式,測量結(jié)果為(101.20±0.74)%,測量結(jié)果的擴展不確定度U95=0.74%,真實地反映了實驗室日常檢驗結(jié)果的水平。
1 申安.HPLC法測定頭孢氨芐膠囊含量的測量不確定度評定.藥物分析雜志,2009,29(8):1384
2 倪育才.實用測量不確定度評定.北京:中國計量出版社,2004:25