韓 琴，趙玉霞

(天津市海河醫(yī)院，天津 300350)

隨著社會人口老齡化，老年癡呆越來越引起人們的關注。其中老年性癡呆(Alzheimer’s disease， AD)是最常見的一種類型。AD的主要特征性病理學改變是大腦萎縮、腦組織內(nèi)大量老年斑(senile plaque，SP)形成、大腦皮層和皮層下結(jié)構細胞內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles，NFTs)及腦實質(zhì)血管淀粉樣變性[1，2]。已有實驗結(jié)果證實，滋腎中藥對老年性癡呆模型大鼠神經(jīng)細胞具有保護作用[3-6]。推測可能與該組方抑制細胞凋亡有關。本實驗通過建立D-半乳糖所致亞急性衰老合并鵝膏蕈氨酸化學損毀Meynert核(邁耐特核)所致接近老年癡呆癥的癡呆復合動物模型，并觀察滋腎方對癡呆大鼠行為學和學習記憶的影響，為抗老年癡呆新藥滋腎方的開發(fā)以及進入臨床試驗階段提供實驗資料和科學依據(jù)。

1 試藥與動物

滋腎方：由天門冬、山萸肉、熟地、龜板、黃精等中藥組成，中藥飲片由天津市海河醫(yī)院中藥房提供。健康Wistar雄性大鼠，鼠齡9～10周，體重300～350 g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生學環(huán)境醫(yī)學研究所動物試驗中心提供。鵝膏蕈氨酸(ibotenic acid，IA)，SIGMA公司生產(chǎn)。氨基甲酸乙酯(urethane)，中國醫(yī)藥公司上海化學試劑公司生產(chǎn)。D-半乳糖(D-galactose)，F(xiàn)ARCO CHEMICAL SUPPLIES。MG-2型迷宮，江蘇省張家港市生物醫(yī)學儀器廠制造。江灣Ⅰ型立體定位儀，上海花木農(nóng)機廠制造。

2 方法與結(jié)果

2.1分組及模型的制備 將Wistar大鼠30只隨機分為空白對照組、癡呆模型組和癡呆模型滋腎方組，每組10只。予癡呆模型組和癡呆模型滋腎方組大鼠腹腔注射10%D-半乳糖，50 mg/kg·d-1，予空白對照組大鼠腹腔注射等劑量的生理鹽水，連續(xù)給藥4周。將5 μg的鵝膏蕈氨酸溶于1 μl的0.2 mol/L 、pH 7.4磷酸緩沖液(NaH2PO4·2H2O，Na2HPO4·12H2O)中待用。將癡呆模型組、癡呆模型滋腎方組大鼠進行化學損毀Meynert基底核手術。方法為將上述兩組大鼠經(jīng)25%氨基甲酸乙酯(4 ml/kg)腹腔麻醉后，固定于江灣Ⅰ型立體定位儀上，剪去頭部鼠毛，以碘酊和75%酒精常規(guī)消毒手術區(qū)皮膚，沿顱中線縱向切開約2～3 cm，剝開皮下筋膜暴露顱骨，用棉球分離骨膜，暴露出十字縫和人字縫。移動立體定位儀上下標尺，調(diào)整大鼠頭部平面，使十字縫比人字縫寬1.5 mm。參照大鼠腦立體定位圖譜[4]，按定位坐標AP 1.4 mm，ML 2.4 mm，DV 7.4 mm，鉆開顱骨。用微量進樣器在鉆孔處垂直進針，然后以0.2 μl/min 的給藥速度緩慢注入配好的IA溶液，持續(xù)給藥5 min，留針5 min，以利于藥液吸收，并防止擴散[8、9]。同樣方法損毀另一側(cè)Meynert核。術后用牙托粉封固顱骨孔，縫合皮膚。

2.2滋腎方的煎制及給藥方法 將中藥滋腎方各藥材置于藥鍋內(nèi)，加相當于藥材質(zhì)量7倍的冷蒸餾水，浸泡2 h，煮沸30 min，過濾。藥渣加5倍量蒸餾水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成1 g/ml生藥藥液[7，8]。造模后7 d給予大鼠藥物治療，癡呆模型滋腎方組按生藥5.2 g/kg·d-1，灌胃，連續(xù)給藥20 d；空白對照組和癡呆模型組的大鼠給予等劑量的生理鹽水。

2.3電迷路法測試大鼠學習記憶能力 大鼠學習記憶測定在Y型迷宮(Maze)箱中進行。該裝置分成三等分，分別稱之為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ臂。每臂長為30 cm、高為15 cm、寬為12 cm。箱底鋪設直徑為3 mm的銅柵，銅柵間距為7 mm，可通以脈沖電流，電壓60 V，延遲時間為5 s，每臂頂端裝有15 W信號燈，燈光示為安全區(qū)，不通電。如以Ⅰ臂為起步區(qū)，則Ⅱ臂為安全區(qū)，Ⅲ臂為電擊區(qū)。訓練時在安靜的暗室中，讓大鼠在暗室中適應30 min后開始訓練[9]。將大鼠放入起步區(qū)適應3 min，操縱迷宮刺激器，按順時針方向改變安全區(qū)方向給予燈光信號。在大鼠受電擊后從起步區(qū)直接逃避至安全區(qū)為正確反應，否則為錯誤反應。燈光持續(xù)亮15s后熄燈，結(jié)束一次訓練，休息60 s。此時該安全區(qū)作為下一次訓練的起步點，順時針給予燈光刺激，待其逃避至安全區(qū)[10]。學習48 h后進行記憶測試。大鼠的學習記憶成績以滿分100分計算，每錯一次減2.5分[11]。

2.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS 11.0進行數(shù)據(jù)分析。藥物治療前后學習記憶成績的比較采用配對t檢驗法。α=0.05，雙側(cè)檢驗。

2.5結(jié)果

造模后大鼠的學習成績與記憶成績均低于造模前，給予滋腎方后學習記憶成績明顯高于給藥前，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 滋腎方對癡呆模型大鼠學習和記憶成績影響 分

3 討論

AD作為老年人癡呆的一種特殊類型越來越受到人們的關注。祖國醫(yī)學認為，腎與腦緊密相關，腎虛是衰老的基礎，是許多老年性疾病發(fā)生的主要原因，若腎虧髓枯，腦失所養(yǎng)，則出現(xiàn)記憶、智能、精神等方面的障礙，進而影響全身的生理功能。針對AD腎精不足，氣血虧虛，痰凝血瘀的病機，根據(jù)中醫(yī)基本理論，經(jīng)科學組方，提出了滋腎方。

本實驗采用D-半乳糖所致亞急性衰老合并鵝膏蕈氨酸化學損毀Meynert核所致復合癡呆動物模型，觀察和分析滋腎方對大鼠學習記憶能力的影響。

結(jié)果表明：造模后大鼠的學習成績與記憶成績均低于造模前，給予滋腎方煎劑灌胃治療20 d后，行為學測試數(shù)據(jù)表明，中藥滋腎方可明顯改善癡呆大鼠的學習和記憶障礙，學習和記憶成績明顯提高，與治療前比較差別有顯著性，具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

中藥滋腎方作為一種新的治療手段，其具有更為廣闊的發(fā)展前景。

1 David M A Mann,田金洲,時晶,等.阿爾茨海默病患者腦淀粉樣血管病變.中華老年醫(yī)學雜志,2003,22(11):708

2 Cacabelos R. The application of functional genomics to Alzheimer’s disease. Pharmcaogenomics，2003,4(5):597

3 何明大,劉運林.腦靈湯對阿爾茨海默病模型鼠調(diào)亡調(diào)控基因的影響.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2005,15(22):3398

4 Paxinos G, Watson C. The rat brain in stereotaxic coordinates. Sydney: Academic Press, 1988：17

5 馬滌輝,劉曉亮,張昱,等.實驗性Alzheimer模型鼠腦組織5-羥色胺含量改變的研究.中風與神經(jīng)疾病雜志,1996,13(3):150

6 李亞明,張春燕,林水淼.調(diào)心方對D-半乳糖合鵝膏蕈氨酸致癡呆大鼠學習記憶、腦磷酸化tau蛋白水平的影響.黑龍江中醫(yī)藥,2000,3:52.

7 李儀奎主編.中藥藥理實驗.上海:上?？茖W技術出版社,1991:36,171

8 皮明鈞,劉鶯,陳力,等.加味溫膽湯對亞急性衰老大鼠血GSH-Px及肝、腦MAO、LPF的影響.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,1999,5(2):14

9 尹兆寶,王健,楊新平,等.D-半乳糖誘導擬衰老動物模型的記憶行為改變.中國老年學雜志,2000,20(1),33

10 徐叔云,卞如濂,陳修主編.藥理實驗方法學.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:179-181,202-204,769-772,826

11 任汝靜,陳生弟.阿爾茨海默病的治療現(xiàn)狀和展望.中國現(xiàn)代神經(jīng)病學雜志,2005,5(3): 147