崔子春

山東淄博礦業(yè)集團(tuán)中心醫(yī)院，山東 淄博 255000

1 材料與方法

1.1 臨床資料 我院1998年1月－2002年1月手術(shù)切除或經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切標(biāo)本65例 (原發(fā)癌)，經(jīng)病理學(xué)檢查診斷為膀胱移性細(xì)胞癌。男50例，女15例。年齡為34－75歲，平均年齡51歲。所有TCCB標(biāo)本根據(jù)TNM分為2組:淺表性腫瘤組 (Tis，T1期)20例，浸潤腫瘤組 (T2－T4期)45例;根據(jù) WHO病理分級分2組:低級組(G1)17例，高級組 (G2+G3)48例。正常膀胱粘膜15例，男10例，女5例。

1.2 方法 采用免疫組化SP法檢測S100A4及MMP－2表達(dá)。石蠟標(biāo)本4um厚連續(xù)切片4張 ，其中2張分別行S100A4及MMP－2免疫組化檢測，1張作HE染色復(fù)查診斷，一張不加一抗作陰性對照，已知陽性的大腸癌組織切片為陽性對照。15例正常膀胱粘膜切片作正常對照。S100A4及MMP－2均為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，鏡下觀察腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)黃色、棕黃色、棕褐色顆粒狀，染色明顯高于背景為陽性。在雙盲的情況下由兩位病理科主任醫(yī)師對每張切片進(jìn)行全面觀察，每例切片隨機(jī)選10個高倍視野 (400倍)。以陽性細(xì)胞百分率及染色強(qiáng)度為判定標(biāo)準(zhǔn)。陰性 (－):染色細(xì)胞數(shù)＜10%;弱陽性 (±):陽性細(xì)胞數(shù)10%～40% ，染色淺淡;陽性 (+):陽性細(xì)胞數(shù)在40%～80% ，染色強(qiáng)度中等;強(qiáng)陽性 (++):陽性數(shù)＞80% ，染色較深。

1.2.1 切除的標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，分別進(jìn)行 HE染色，免疫組化染色。

1.2.2 免疫組化 采用PV－9000試劑盒兩步法。

試劑:一抗為兔抗人基質(zhì)金屬蛋白酶MMP－9，多克隆 (1:50);兔抗人基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP－2，多克隆(1:100);兔抗人S100A4蛋白，多克隆 (1:200);鼠抗人P53蛋白，單克隆 (1:100);試劑盒以及DAB均購自北京中杉金橋有限公司。

染色步驟:(1)石蠟切片脫蠟水化后，用PBS(PH7.4)沖洗3次，每次3分鐘。

(2)抗原修復(fù)，用不休鋼壓力鍋，加人0.01M檸檬酸型緩沖液，PH值=6.6，放到電爐加熱，壓力閥噴氣時，持續(xù)加熱2分鐘，壓力鍋離開熱源后自然冷卻到室溫。取出切片PBS沖洗3×3。

(3)染色評分，S100A4蛋白為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核著色。高倍鏡下計數(shù)1000個細(xì)胞≥20%為陽性 (+)，20－50%(++)，50% (+++)。P53染色核著色，＜10%(+)，10－25%(++)，26—50(+++)， ＞50%(++++)。MMP－2及MMP－9染色細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞膜為棕黃色顆粒，陽性數(shù) ＜10%(－)，＞10－25(+)，26－50%(++)，50%為 (+++)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS 10.0行檢驗、spearson等級相關(guān)分析，P＜0.05被認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 S100A4，MMP－2在膀胱移性細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況

正常膀胱上皮S100A4和MMP－2均為未見表達(dá)或微量表達(dá)。S100A4在腫瘤上皮陽性表達(dá)細(xì)胞和表達(dá)強(qiáng)度分布不均勻，在間質(zhì)組織、血管臨近面以及腫瘤侵襲入膀胱深層組織前緣陽性表達(dá)細(xì)胞多，表達(dá)強(qiáng)度也較強(qiáng)。(圖1)。膀胱移性細(xì)胞癌組織中，浸潤腫瘤組S100A4表達(dá)顯著高于表淺腫瘤組 (P＜0.01)。高級組與低級組比較有顯著性差異。(P＜0.01)。MMP－2亦為胞漿表達(dá)，TCCB中的陽性表達(dá)率為48%，浸潤組MMP－2表達(dá)顯著高于表淺腫瘤組 (P＜0.01).高級組顯著高于低級組。(P＜0.01).

表1 S100A4及MMP－2在TCCB表淺腫瘤組和浸潤腫瘤組的表達(dá)比較

表2 S100A4及MMP－2在TCCB低級組和高級組的表達(dá)比較

2.2 S100A4與MMP－2關(guān)系在65例膀胱癌標(biāo)本中，二者共陽性 例，共陰性 例。S100A4和MMP－2表達(dá)經(jīng)spearman相關(guān)性檢驗，有相關(guān)關(guān)系 (r=0.66，P＜0.01)

表3 S100A4及MMP－2在膀胱移性細(xì)胞癌組織的表達(dá)關(guān)系

3 討論

本研究通過檢測正常膀胱組織和TCCB組織中S100A4的表達(dá)情況，顯示S100A4蛋白在正常膀胱粘膜微量或未見表達(dá)，在膀胱癌組織中的陽性表達(dá)率為58%，而在TCCB中則有不同程度的過表達(dá) (P＜0.05)，隨著TCCB臨床分期、病理分級的升高S100A4蛋白的水平呈現(xiàn)增高趨勢 (P＜0.05)。提示S100A4在膀胱癌的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中可能起著重要作用?；|(zhì)金屬蛋白酶 (matrix metalloproteinase，MMPs)是近年來倍受關(guān)注的一類與腫瘤侵襲性有關(guān)的蛋白，其通過對細(xì)胞外基質(zhì) (ECM)的降解而促進(jìn)癌細(xì)胞對周圍組織的浸潤，是降解ECM諸成分的關(guān)鍵酶［2～4］，對腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用。

4 結(jié)論

S100A4和MMP－2的表達(dá)水平與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系，可以作為評估膀胱移性細(xì)胞癌惡性程度及預(yù)后重要指標(biāo)，同時隨著S100A4作用進(jìn)一步闡明，為膀胱癌的防治提供新的思路和空間。

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