曲曉偉，張培海，單中杰，韓前河，胡建庭，張蜀武

(1鄭州人民醫(yī)院，鄭州450003;2成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院)

精索靜脈曲張(VC)是引起男性不育的主要原因之一，占19% ～41%［1］。關(guān)于VC的治療目前還存在許多爭議，手術(shù)療效并不確切［2］。在臨床工作中我們發(fā)現(xiàn)，益腎活血中藥強(qiáng)精膠囊對(duì)VC不育患者有較好療效，但尚缺乏實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。精子密度與活力是反映生育力的最直接指標(biāo)［3］?；诖耍?008～2009年我們通過觀察益腎活血中藥強(qiáng)精膠囊對(duì)VC大鼠附睪精子活力與密度的影響，探討其提高生育力的可能作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 藥物及主要設(shè)備 益腎活血方強(qiáng)精膠囊由四川省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥房提供(0.4 g/粒)，益腎方五子衍宗膠囊由河北紫薇山制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)(0.4 g/粒)，活血方少腹逐瘀膠囊由東阿澳東藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(0.45 g/粒)。WLJY-9000北京偉力彩色精子質(zhì)量檢測(cè)系統(tǒng)、中興202型電熱恒溫干燥箱、YP1201N電子天平、DK-600A型電熱恒溫水箱。

1.2 動(dòng)物模型建立及分組 選擇青春期(2月齡)SD雄性大鼠100只(成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，體質(zhì)量(200±20)g。常規(guī)飼養(yǎng)，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物自由攝食飲水，室溫控制在20～25℃，相對(duì)濕度為40%～60%。隨機(jī)抽取10只為假手術(shù)組(僅顯露左腎靜脈，但不結(jié)扎)，余90只參照文獻(xiàn)［4］以縮窄左腎靜脈法建立VC大鼠模型。于造模后4周，麻醉大鼠，剖腹觀察，用帶測(cè)微器的目鏡測(cè)量精索靜脈直徑，觀察其曲張程度。若大鼠左側(cè)精索內(nèi)靜脈直徑比假手術(shù)組擴(kuò)張約3倍及雙腎大小無明顯差異，則表明造模成功。造模成功者(72只)隨機(jī)分為益活組(36只)和益腎組、活血組、模型組，后三組各12只。益活組又分為高、中、低濃度組(各12只)。

1.3 藥物混懸液制備及用法 ①制備:按照人與大鼠體表面積比換算等效劑量，均在臨用前用生理鹽水配制。強(qiáng)精膠囊配制成濃度為 0.216、0.108、0.054 g/ml的強(qiáng)精膠囊混懸液，五子衍宗膠囊配制成0.130 g/ml的混懸液，少腹逐瘀膠囊配制成0.146 g/ml的混懸液。②用法:益活組的高、中、低濃度組分別給予濃度為 0.216、0.108、0.054 g/ml的強(qiáng)精膠囊混懸液，按10 ml/kg灌胃、1次/d、共4周;益腎組給予五子衍宗膠囊混懸液、活血組給予少腹逐瘀膠囊混懸液、模型組及假手術(shù)組給予生理鹽水灌胃，劑量、用藥時(shí)間均同益活組。

1.4 精子密度與活力檢測(cè)方法 于末次給藥后24 h，大鼠稱重，斷頸處死，無菌條件下摘除左側(cè)附睪組織，拭干，在附睪尾部剪一小口，收集精液。采用WLJY-9000北京偉力彩色精子質(zhì)量檢測(cè)系統(tǒng)分析精子密度與活力。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)以表示，組間比較采用單因素方差分析，其中方差齊者用LSD法，方差不齊者用Dunnett's T3檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察 造模后各組大鼠出現(xiàn)不同程度的攝食減少、精神萎靡、毛發(fā)枯黃、缺乏光澤，逐漸出現(xiàn)惡寒倦臥、反應(yīng)遲鈍、少動(dòng)、體毛干枯脫落、消瘦等表現(xiàn)，中藥灌胃后1周開始逐漸改善。實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物死亡10只，其中模型組3只，益活組的低、中濃度組和益腎組各1只，高濃度組、活血組各2只。死亡原因?yàn)樾g(shù)后感染、灌胃操作不當(dāng)及大鼠相互咬斗致死。

2.2 各組附睪精子活力及密度比較 見表1。

表1 各組附睪精子活力及密度比較(±s)

表1 各組附睪精子活力及密度比較(±s)

注:與假手術(shù)組比較，*P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.01;與高濃度組比較，★P ＜0.01

組別 n 精子活力(%) 精子密度(×106/ml)10 53.89±4.57 37.14±3.77模型組 9 26.26±5.89* 15.42±3.48*益活組高濃度組 10 47.64±4.60＊△ 32.73±4.33＊△中濃度組 11 35.51±4.30＊△★ 25.97±3.56＊△★低濃度組 11 27.62±4.71＊★ 18.92±3.03＊★益腎組 11 35.26±4.67＊△★ 24.50±3.41＊△★活血組 10 26.02±5.29＊★ 18.01±3.40假手術(shù)組＊★

3 討論

VC是男性不育癥的主要病因之一。雖然醫(yī)學(xué)家對(duì)VC性不育癥的病理機(jī)制作了大量的研究，如睪丸溫度增高、毒物反流、自由基損害等學(xué)說，但迄今為止，仍未能清楚解釋VC致生育力低下的確切病理機(jī)制。目前多采用精索靜脈高位結(jié)扎術(shù)治療VC。手術(shù)僅僅解決了精索靜脈血液反流的問題，未能解決睪丸生精功能障礙和附睪功能障礙，所以諸多學(xué)者對(duì)手術(shù)治療不育的療效提出了質(zhì)疑。另外，西醫(yī)目前尚無特效治療藥物，在臨床用藥多為經(jīng)驗(yàn)及非特異性藥物，如乙烯雌酚、左卡尼汀、維生素族等。因此，探討VC性不育癥的發(fā)病機(jī)制，探索更為確切有效的治療藥物，勢(shì)在必行，而中醫(yī)藥在此方面優(yōu)勢(shì)明顯。

祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，VC性不育屬筋瘤、筋疝、無子等范疇，其病因病機(jī)復(fù)雜，概括起來不外虛實(shí)二端，以腎虛為本，血瘀為標(biāo)，腎虛導(dǎo)致血瘀，血瘀加重腎虛，互為因果，相互影響，造成生殖之精化生障礙，從而導(dǎo)致不育。

精子密度與活力是反映生育力的最直接指標(biāo)。精子的運(yùn)動(dòng)能力是在附睪成熟過程中獲得并得到發(fā)展的，該能力包括超激活運(yùn)動(dòng)和前向運(yùn)動(dòng)(精子在附睪中是不活動(dòng)的，此處是指精子在體外稀釋介質(zhì)中的運(yùn)動(dòng));精子活力(運(yùn)動(dòng)速度)的發(fā)展是不平行的。大鼠附睪頭部和體部精子運(yùn)動(dòng)情況基本相似，但在附睪尾部，精子運(yùn)動(dòng)速度和運(yùn)動(dòng)的直線性均有明顯增加。在人類，精子運(yùn)動(dòng)速度和直線性在附睪體尾部明顯增加［5］。

本研究結(jié)果顯示，模型組附睪精子活力與密度明顯低于其他各組，與假手術(shù)組比較，除益活組的高濃度組外，余組大鼠附睪精子活力與密度均降低(P均＜0.01);益活組與益腎組均能明顯提高精子活力與密度，益活組的高濃度組提高最明顯(P＜0.01)，活血組改善不明顯。結(jié)果表明益腎活血方強(qiáng)精膠囊能一定程度提高VC大鼠附睪內(nèi)精子活力與密度。益腎活血中藥強(qiáng)精膠囊方劑由仙靈脾、仙茅、菟絲子、枸杞子、熟地、當(dāng)歸、川芎、紅花、丹參、雞血藤、生黃芪、川牛膝等組成。仙靈脾、仙茅、菟絲子、枸杞子、熟地補(bǔ)腎以生精，當(dāng)歸、川芎、紅花、丹參、雞血藤等活血以化瘀，標(biāo)本兼顧，使腎氣得以充，瘀血得以去，生精功能得以恢復(fù)，達(dá)到治療VC性不育的目的。

綜上，益腎活血中藥灌胃能夠提高VC性大鼠附睪內(nèi)精子活力與密度，促進(jìn)附睪精子成熟，其功效優(yōu)于單純益腎和單純活血中藥。此外，精漿約占精液的95%以上，含大量營養(yǎng)精子、激發(fā)精子活力的重要物質(zhì)，影響精子的成熟及運(yùn)動(dòng)［6］。益腎活血類中藥是否通過改善附睪精子能量系統(tǒng)、提高前向運(yùn)動(dòng)蛋白等附睪精子成熟相關(guān)蛋白表達(dá)，以改善精子密度與活力，促進(jìn)附睪精子成熟，從而提高生育力，有待進(jìn)一步研究。

［1］Daughton CK，Nangia AK，Agarwal A.Pathophysiology of varicoceles in male infertility［J］.Hum Reprod Update，2001，7(5):473-481.

［2］張永康.精索靜脈曲張的幾個(gè)相關(guān)問題［J］.中國男科學(xué)雜志，2004，18(3):3-4.

［3］Elzanaty S，Malm J.Effects of ejaculation to analysis delay on levels of markers of epididymal and accessory sex gland functions and sperm motility［J］.J Androl，2007，28(6):847-852.

［4］劉建軍，董強(qiáng)，楊宇如.實(shí)驗(yàn)性精索靜脈曲張大鼠血清及睪內(nèi)睪酮的變化［J］.中華男科學(xué)雜志，2007，13(4):335-337.

［5］陳文成，康熙雄，潘云，等.75例少精不育患者精細(xì)胞GSTM1基因檢測(cè)結(jié)果分析［J］.山東醫(yī)藥，2010，50(19):28-29.

［6］鄭賢紅，高元奇，錢聰，等.不育男性精漿中性α-糖苷酶活性與精子參數(shù)關(guān)系探討［J］.山東醫(yī)藥，2009，49(4):70-72.