史兆章，闞 曉，曾兆清

(濟南市傳染病醫(yī)院，濟南250033)

去甲斑蝥酸鈉(SNCID)可抑制多種細胞的增殖，促進其凋亡［1，2］，但尚未見其對肝癌細胞影響的相關(guān)報道。HepG2細胞具有和人類肝細胞相似的代謝能力［3，4］。2010年 9 月 ～2011 年 2 月，我們觀察了SNCID對HepG2細胞增殖的影響?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 細胞培養(yǎng)及分組 人肝癌HepG2細胞系，用含10% 小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，長滿后用0.25%的胰酶消化傳代。取對數(shù)生長期的人肝癌細胞株HepG2，用0.25%的胰蛋白酶消化，加入含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液制備成濃度為1×105/ml的單細胞懸液，接種于24孔板上，每孔加入1 ml單細胞懸液，放入5%CO237℃的溫箱中孵育，24 h后取出培養(yǎng)板，棄去上清液，SNCID組分別添加含 5、2.5、1、0.5 μg/ml的注射用 SNCID 1 ml，對照組不添加任何藥物，各個濃度均設(shè)18個復(fù)孔。待藥物充分混勻后，將24孔板放入37℃、5%CO2的溫箱中孵育。

1.2 細胞增殖率和細胞周期測定 培養(yǎng)24、48、72 h后，采用流式細胞儀和流式細胞術(shù)檢測HepG2細胞的增殖周期，并計算增殖指數(shù)(PI)。操作按試劑盒說明書進行。PI=S+G2/M細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。結(jié)果以±s表示。組間比較采用單因素方差分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組 HepG2 細胞培養(yǎng) 24、48、72 h G0/G1、S 期細胞比例及PI見表1。由表1可見，SNCID組G0/G1期的細胞比例明顯增高(P均＜0.05)，而S期細胞比例、PI降低，此效果呈時間和濃度依賴性(P均＜0.05)。

表1 各組HepG2細胞培養(yǎng)24、48、72 h G0/G1、S期細胞比例及PI(%，±s)

表1 各組HepG2細胞培養(yǎng)24、48、72 h G0/G1、S期細胞比例及PI(%，±s)

G0/G1 S組別PI 24 h 48 h 72 h對照組 74.66±0.52 74.06±0.18 75.51±1.70 14.32±0.22 14.32±0.37 13.69±0.99 25.34±0.52 25.94±0.24 h 48 h 72 h 24 h 48 h 72 h 18 24.49±1.70 SNCID組0.5 μg/ml 74.19±1.29 75.26±1.18 74.73±0.51 14.88±0.94 14.38±1.21 13.39±1.13 25.81±1.29 24.74±1.18 25.27±0.51 1.0 μg/ml 74.08±0.79 75.86±0.51 78.54±0.54 14.50±0.49 12.38±0.53 12.02±1.00 25.92±0.79 24.14±0.51 21.46±0.54 2.5 μg/ml 76.84±0.33 78.42±0.87 81.31±0.60 14.00±0.33 10.55±0.49 9.26±0.46 23.16±0.33 21.58±0.87 18.69±0.60 5.0 μg/ml 77.76±1.23 81.77±1.42*80.50±1.21 12.91±0.92 9.46±0.84 10.01±0.9722.24±1.23 18.23±1.42 19.50±1.21

3 討論

細胞增殖周期分為 G1/G0期、S期、G2期、M期。S期為細胞的DNA合成期。一般認為腫瘤細胞S期比率高，增殖旺盛，細胞倍增時間短［5，6］。PI是反映腫瘤細胞增殖活性的指標。本研究結(jié)果顯示，用不同濃度的SNCID培養(yǎng)后的HepG2細胞中G1/G0期細胞比例明顯增加，而S期細胞比例和PI降低，且此效果呈劑量和時間依賴性，表明SNCID可阻滯HepG2細胞停滯于G1/G0期，從而抑制其增殖，發(fā)揮抗腫瘤活性。早期肝癌患者常缺乏典型的臨床表現(xiàn)，待出現(xiàn)典型的臨床表現(xiàn)時患者多處于Okuda分期［7］的第三期，大多已喪失施行傳統(tǒng)治療時機［8］。SNCID是一種新型抗腫瘤藥，本研究結(jié)果顯示SNCID可抑制HepG2細胞增殖，展示了SNCID在肝癌治療方面良好的應(yīng)用前景。

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