曲更寶，程 石，宋茂民

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院，北京100050)

多西紫杉醇(DTX)是近年研制的杉烷類抗癌藥，其單藥化療治療局部進(jìn)展期胰腺癌的客觀腫瘤反應(yīng)率為5% ～15%［1］。伊立替康(CPT-11)為特異性拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ(TopoⅠ)抑制劑，研究證實(shí)其對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株的抑制率較高，對(duì)很多實(shí)體腫瘤有肯定療效［2］。為探討DTX、CPT-11單用及聯(lián)用對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株Capan-2的體外抗腫瘤作用，2008～2009年，我們進(jìn)行了相關(guān)研究?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 藥物及細(xì)胞株 DTX(齊魯制藥公司)，CPT-1(江蘇恒瑞醫(yī)藥公司)。人胰腺癌細(xì)胞株Capan-2由北京天壇醫(yī)院神經(jīng)外科研究所提供。細(xì)胞株培養(yǎng)在10%小牛血清(杭州四季青公司)、RPMI-1640(美國(guó)GIBCO)培養(yǎng)液中，內(nèi)含0．1%青霉素、鏈霉素，置于37℃、5%CO2孵育箱內(nèi)備用。

1．2 方法

1．2．1 MTT法測(cè)定 DTX、CPT-1的中效濃度(IC50)將Capan-2細(xì)胞制成5×103/ml的細(xì)胞懸液，每孔200 μl，加入96孔培養(yǎng)板內(nèi)。在96孔中分別加入 10－4、10－3、10－2、10－1、1、10、100、1 000 mg/ml濃度的DTX和CPT-1，每孔加20 μl，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，測(cè)量3次取平均值，采用 MTT法、BIO-RAD 550自動(dòng)酶標(biāo)讀數(shù)儀測(cè)定DTX、CPT-1的IC50。作用48 h時(shí)測(cè)得 DTX 的 IC50為 2．27 mg/ml，CPT-1 的IC50為 23．48 mg/ml，DTX、CPT-1 聯(lián)用的 IC50為12．9 mg/ml。

1．2．2 兩藥單用及聯(lián)用時(shí)的濃度比例 單用時(shí)，DTX 分別設(shè) 0．227、2．270、22．700 mg/ml 3 個(gè)濃度，CPT-1 分別設(shè)23．50、2．35、235 mg/ml 3 個(gè)濃度，均作用48 h;每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)平行孔，重復(fù)3次取平均值，置于37℃、5%CO2孵育箱中培養(yǎng);用MTT法檢測(cè)兩藥單用時(shí)的腫瘤抑制情況。聯(lián)用時(shí)，將DTX的3個(gè)濃度分別與CPT-1的3個(gè)濃度聯(lián)合，其余方法同兩藥單用時(shí)。

1．2．3 兩藥聯(lián)用時(shí)的給藥時(shí)間 給藥時(shí)間設(shè)先用DTX、24 h后用 CPT-1 24 h，先用 CPT-1、24 h 后用DTX 24 h兩種，每種設(shè)3個(gè)平行孔，重復(fù)3次取平均值，置于37℃、5%CO2孵育箱中培養(yǎng)。用MTT法檢測(cè)兩藥不同時(shí)間給藥的腫瘤抑制情況。

1．2．4 結(jié)果判定 應(yīng)用聯(lián)合指數(shù)(CI)法測(cè)定兩藥聯(lián)用時(shí)對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株的抑制作用，CI＜1為有協(xié)同作用，CI＞1為有拮抗作用，CI=1為有相加作用［3］。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11．5統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 兩藥單用及聯(lián)用時(shí)不同濃度的CI比較 兩藥按1∶1配比聯(lián)用時(shí)的藥物作用效應(yīng)［即抑制率(fa)50%時(shí)的藥物濃度］為1．71 mg/ml。DTX單用濃度為0．227、2．270、22．700 mg/ml時(shí)，其 CI分別為0．346、0．440、0．629;CPT-1 濃度為 23．50、2．35、235．00 mg/ml時(shí)，其 CI 分別為 0．268、0．573、0．641;DTX、CPT-1 聯(lián)用濃度為 1．29、12．90、129．00 mg/ml時(shí)，其 CI分別為 0．387、0．657、0．777。不同用藥濃度的CI比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0．05)。

2．2 兩藥聯(lián)用時(shí)不同給藥時(shí)間的CI比較 見(jiàn)表1。

表1 兩藥聯(lián)用時(shí)不同給藥時(shí)間的CI比較(±s)

表1 兩藥聯(lián)用時(shí)不同給藥時(shí)間的CI比較(±s)

注:不同給藥時(shí)間的CI比較，P均＞0．05

DTX、CPT-1 的藥物濃度 兩藥聯(lián)用時(shí) 先用DTX，再用CPT-1先用CPT-1，再用DTX 1．29 mg/ml 0．387 ±0．025 0．415 ±0．116 0．366 ±0．049 12．90 mg/ml 0．657 ±0．018 0．615 ±0．084 0．447 ±0．057 129．00 mg/ml 0．777 ±0．036 0．636 ±0．092 0．608 ±0．064

2．3 兩藥聯(lián)用時(shí)不同 fa的 CI比較 DTX、CPT-1的 fa 為 0．95、0．80、0．70、0．50、0．40、0．30 時(shí)，其 CI分別為 0．000 29、0．014、0．084、0．933、2．840、8．820。

3 討論

目前，DTX廣泛用于肺癌、消化道腫瘤及前列腺癌的治療［4］。DTX的抗腫瘤作用機(jī)制是加強(qiáng)微管蛋白聚合，抑制微管解聚，破壞腫瘤細(xì)胞的有絲分裂。目前，國(guó)外已有將DTX作為進(jìn)展期胰腺腺癌一線化療藥物的二期臨床研究［5］。CPT-1為TopoⅠ抑制劑，其與Topo-Ⅰ-DNA形成復(fù)合物，通過(guò)特異性阻斷DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及重組發(fā)揮抗腫瘤作用;Topo-Ⅰ越高，說(shuō)明腫瘤對(duì)CPT-1越敏感，CPT-1作為二線化療藥物，其治療進(jìn)展期胰腺癌的有效率為48%［6］。

本研究顯示，DTX、CPT-1單用及聯(lián)用對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株Capan-2的體外抗腫瘤作用逐漸增強(qiáng);兩藥聯(lián)用有協(xié)同作用，其用藥順序不影響兩藥的抗腫瘤作用。

［1］Cullinan S，Moertel CG，Wieand HS，et al．A phaseⅢ trial on the therapy of advanced pancreatic carcinoma．Evaluations of the Mallinson regimen and combined 5-fuorouracil，doxorubicin，and cisplatin［J］．Cancer，1990，65(10):2207-2212．

［2］張頻．抗腫瘤新藥伊立替康臨床研究進(jìn)展［J］．國(guó)外醫(yī)學(xué):腫瘤分冊(cè)，1998，6(25):344-346．

［3］何松，沈薇，沈鼎明．利用中效原理觀察抗癌藥物的相互作用［J］．腫瘤防治雜志，2003，10(6):586-588．

［4］Han K，Cao W，Che J，et al．First line chemotherapy with weekly docetaxel and cisplatin in elderly patients with advanced non-small cell lung cancer:a multicenter phase II study［J］．J Thorac Oncol，2009，4(4):512-517．

［5］Rougier P，Adenis A，Ducreux M，et al．A phaseⅡ study:docetaxel as frst-line chemotherapy for advanced pancreatic adenocarcinoma［J］．European Journal of Cancer，2000，36(8):1016-1025．

［6］Seong YY，Young SP，Hyo SK，et al．Irinotecan monotherapy as second-line treatment in advanced pancreatic cancer［J］．Cancer Chemother Pharmacol，2008，10(5):280-284．