張淑二 ，林 雪 ，劉 棟 ，胡洪杰 ，尹旭升

（1.山東省畜牧總站，濟(jì)南 250022；2.山東省種公牛站有限責(zé)任公司，濟(jì)南 250300；3.山東省畜牧業(yè)貿(mào)易服務(wù)中心）

口蹄疫（foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是由 FMD 病毒（FMDV）引起的牛、羊、豬等偶蹄動(dòng)物發(fā)生的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該疫病的平均致死率僅為1%，但其傳播力極高，且可以遠(yuǎn)距離傳播［1］。我國(guó)部分地區(qū)已先后發(fā)生亞洲Ⅰ型、A型和O型口蹄疫等多次疫情，給我國(guó)畜牧業(yè)帶來了巨大損失。當(dāng)前，許多國(guó)家是通過注射口蹄疫疫苗對(duì)該病毒流行進(jìn)行預(yù)防與控制，并取得了較好效果。種公牛站作為我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展的源頭行業(yè)，為我國(guó)的奶牛、肉牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展提供種源保障，這一特點(diǎn)決定了對(duì)種公牛進(jìn)行及時(shí)正確的口蹄疫疫苗免疫注射對(duì)預(yù)防該疫情傳播具有重要意義。目前，山東省種公牛站飼養(yǎng)利木贊種公牛、西門塔爾種公牛與魯西牛種公牛共計(jì)50余頭，在年度防疫工作中發(fā)現(xiàn)，各品種種公牛在注射口蹄疫疫苗后一段時(shí)間內(nèi)，其精液品質(zhì)產(chǎn)生了不同程度的下降?，F(xiàn)將本站2011年度1月份種公牛注射口蹄疫疫苗前后一段時(shí)間內(nèi)的各品種種公牛精液的生產(chǎn)及利用情況進(jìn)行總結(jié)與對(duì)比，找出其影響規(guī)律，為進(jìn)一步提高種公牛精液生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 精子密度測(cè)定儀（Accucell 1145），電子天平（HR-120），電視顯微可視系統(tǒng)（OPTIPHOT-2），低溫冷凍儀（GCS-300），磁力攪拌器（Jan-78），冷藏箱（BYY-190），恒溫水浴鍋（HH-2），細(xì)管精液分裝一體化機(jī)（UR.G10），超聲波洗滌器（SK8200H）。

1.2 動(dòng)物 選擇1.5～5歲的不同品種種公牛20頭，其中西門塔爾牛10頭、魯西牛5頭、利木贊牛5頭，根據(jù)其營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行統(tǒng)一分圈飼養(yǎng)，先粗后精，干草、精料補(bǔ)充料日喂量按照體重的1.2%與0.6%補(bǔ)給，青綠飼料每日3kg，自由飲水，適量運(yùn)動(dòng)。

1.3 材料 口蹄疫亞洲Ⅰ型與O型雙價(jià)滅活苗，新疆天康畜牧生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：2010024；口蹄疫A型滅活苗，中農(nóng)威特生物科技股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：1003022J。

采取頸部肌肉注射，使用4cm長(zhǎng)16號(hào)針頭，每頭牛一個(gè)針頭，頸部三角區(qū)深層肌肉注射，用量為成年牛每頭2mL。

1.4 采精情況 20頭種公牛，由專職采精員負(fù)責(zé)采精工作，成年牛采精頻率為每周2次，每次分早晚各采1次，青年公牛每周1次，每次于早晨采集。采精期間，臺(tái)?；竟潭ǎ?yán)格執(zhí)行采精操作規(guī)程。

1.5 精液制作方法 采集的原精送入檢測(cè)室，專人檢測(cè)原精的采精量、活力和精液密度，確定稀釋倍數(shù)。稀釋好的精液放入4℃冰箱中平衡3 h，鏡檢活力后用細(xì)管精液分裝機(jī)進(jìn)行分裝，利用冷凍儀按設(shè)定好的冷凍程序冷凍8 min，最后用附電視顯微攝像系統(tǒng)的生物顯微鏡進(jìn)行活力評(píng)定，鏡檢合格者方可進(jìn)行包裝［2］。

1.6 統(tǒng)計(jì)處理 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0 OnewayANOVA進(jìn)行方差分析，各組數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±S）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 注射口蹄疫疫苗對(duì)西門塔爾種公牛精液品質(zhì)的影響 由表1可以看出，注射口蹄疫苗前后西門塔爾種公牛的次均采精量差異并不顯著（P＞0.05），其精液平均密度在注射疫苗后出現(xiàn)增加且差異顯著（P＜0.05），注射疫苗后第3～4周精液平均密度比注射前提高，且差異極顯著（P＜0.01）；精液平均活力則在疫苗注射后出現(xiàn)下降趨勢(shì)，且于注射后的3～8周精液活力與注射前相比達(dá)到極顯著水平（P＜0.01），第9周精液活力開始逐步恢復(fù)正常；伴隨精液活力下降，精液廢棄率增加，注射后第1周精液廢棄率明顯高于疫苗注射前精液廢棄率（P＜0.05），第3～8周精液廢棄率與注射前相比差異極顯著（P＜0.01），第9周后精液利用率開始增加并達(dá)到注射前水平（P＞0.05）。其制凍數(shù)量在疫苗注射后第9～10周出現(xiàn)顯著增加（P＜0.05）。

2.2 注射口蹄疫疫苗對(duì)利木贊種公牛精液品質(zhì)的影響由表2可以得出，與疫苗注射前相比，疫苗注射后利木贊種公牛精液次均采精量無顯著增加（P＞0.05），而精液密度僅在疫苗注射后的第3～4周顯著高于其他時(shí)段（P＜0.05）；疫苗注射后的第3～6周種公牛精液平均活力出現(xiàn)降低且顯著低于疫苗注射前精液活力（P＜0.05）；注射疫苗后的種公牛精液廢棄率有增大趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）；其精液制凍數(shù)量也僅在疫苗注射后的第3～4周顯著高于疫苗注射前及其他時(shí)段（P＜0.05）。

2.3 注射口蹄疫疫苗對(duì)魯西牛種公牛精液品質(zhì)的影響 由表3可以看出，疫苗注射后魯西牛種公牛的次均采精量、平均密度、精液廢棄率及制凍數(shù)量與注射前相比差異均不顯著（P＞0.05）；精液平均活力在疫苗注射后的第5～6周與注射前相比差異顯著（P＜0.05），其它時(shí)段無明顯差異（P＞0.05）。

表1 口蹄疫疫苗對(duì)西門塔爾種公牛精液品質(zhì)的影響

表2 口蹄疫疫苗對(duì)利木贊種公牛精液品質(zhì)的影響

表3 口蹄疫疫苗對(duì)魯西牛種公牛精液品質(zhì)的影響

3 討論

近年來，我國(guó)多地發(fā)生各種類型的口蹄疫疫情，給我國(guó)畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來了重大損失。種公牛站作為牛冷凍精液供應(yīng)單位，對(duì)疫情的防控意義要遠(yuǎn)大于一般商品場(chǎng)，所以，利用口蹄疫疫苗對(duì)種公牛進(jìn)行多次免疫是各種公牛站年度防疫工作的重點(diǎn)。但在生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，種公牛注射口蹄疫疫苗后會(huì)出現(xiàn)精液活力下降、精子畸形率增加及死精現(xiàn)象，其原因可能與疫苗的注射應(yīng)激及疫苗中氫氧化鋁或雙相礦物油等佐劑對(duì)動(dòng)物細(xì)胞具有毒性作用有關(guān)［3］。這給凍精生產(chǎn)帶來了一定的不利影響，本試驗(yàn)通過分析口蹄疫疫苗對(duì)不同品種種公牛的精液生產(chǎn)的影響，為種公牛站減少因疫苗注射造成的精液生產(chǎn)損失提供數(shù)據(jù)參考。

采精量與精液密度均是評(píng)價(jià)種公牛精液品質(zhì)的重要指標(biāo)。由本試驗(yàn)的注射免疫情況可以看出，口蹄疫疫苗注射對(duì)3個(gè)品種種公牛的次均采精量影響不大，注射前后采精量表現(xiàn)平穩(wěn)，這說明注射該疫苗對(duì)種公牛采精量沒有影響。但對(duì)種公牛的精液密度有一定影響，西門塔爾種公牛在免疫后的第3～10周精液密度顯著增加，利木贊種公牛在疫苗注射后的第3～4周精液密度有大幅增加，但魯西牛種公牛精液密度變化不大。這有可能與精液密度隨著氣溫升高逐步提高有關(guān)［4］，1月底山東地區(qū)氣溫回升較快，在疫苗注射后的近兩個(gè)月試驗(yàn)期間，適宜的氣溫對(duì)提高精液密度也起到了積極作用。而魯西牛作為山東地方良種肉牛對(duì)山東地區(qū)環(huán)境氣候較為適應(yīng)，氣溫對(duì)其影響不大。

根據(jù)GB4143—2008《牛冷凍精液》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求，種公牛鮮精活力須≥65%，凍后活力≥35%，不符合該標(biāo)準(zhǔn)的精液均要廢棄，鮮精活力大小與精液廢棄率高低可以更好地說明口蹄疫疫苗對(duì)種公牛精液生產(chǎn)的影響。由本試驗(yàn)結(jié)果可以看出，各品種種公牛鮮精活力及精液廢棄率均有一定變化，但影響程度不一。其中西門塔爾牛與利木贊牛的精液出現(xiàn)變化的時(shí)間較早，且幅度明顯、影響期較長(zhǎng)。2個(gè)指標(biāo)相伴而行，影響期在4～6周不等。相比而言，疫苗對(duì)魯西牛精液活力的影響時(shí)間出現(xiàn)的較晚，幅度也比較小，影響期也僅有1周左右，且恢復(fù)較快。同時(shí)，魯西牛精液的廢棄率變化也不明顯，這在精液生產(chǎn)上具有重要意義，表現(xiàn)出我國(guó)地方品種牛比外來品種牛對(duì)疫苗應(yīng)激具有更好的抵抗與適應(yīng)能力，但其機(jī)理尚不明確，這可能與疫苗生產(chǎn)及動(dòng)物對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性有關(guān)。

精液的制凍數(shù)量是體現(xiàn)種公牛精液品質(zhì)的決定性指標(biāo)，在本試驗(yàn)中，口蹄疫疫苗注射前后3個(gè)品種種公牛精液的制凍數(shù)量變化較小。僅在疫苗注射后的第9周開始，西門塔爾牛精液制凍數(shù)量比之前顯著增加，疫苗注射后的第3～4周，利木贊牛精液制凍數(shù)量顯著高于其他時(shí)段，這都與其同時(shí)段精液密度升高有關(guān)。

就上述幾個(gè)指標(biāo)的影響情況來看，口蹄疫疫苗注射對(duì)種公牛精液的平均活力及廢棄率均起到負(fù)面影響，而對(duì)種公牛精液密度影響不顯著，精液密度的提高則與疫苗注射對(duì)精液生產(chǎn)的其他指標(biāo)造成的負(fù)面影響起到了良好的拮抗作用。

綜上所述，口蹄疫疫苗注射對(duì)種公牛產(chǎn)生較大應(yīng)激，對(duì)種公牛精液品質(zhì)有一定的負(fù)面影響。所以，合理安排種公牛的免疫時(shí)間可以較好地緩解因疫苗應(yīng)激引起的精液產(chǎn)量下降，比如采取在每年的停采期進(jìn)行疫苗注射或減少疫苗注射次數(shù)等措施，都可以減少種公牛站的生產(chǎn)損失。

［1］Mahy B W，Sobrino F，Domingo E.Overview of foot-and-mouth disease and its impact as a reemergent viral infection.In：Foot-and-Mouth Disease，Current Perspectives［J］.Horizon Bioscience，2004：437-446.

［2］楊庫，李聚才，張巧娥，等.不同品種種公牛采精量、精液密度及制凍數(shù)量的比較［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2003（12）：25-26.

［3］蔣文俊，李華春，李樂，等.口蹄疫疫苗研究進(jìn)展［J］.畜牧與獸醫(yī)，2004，36（5）：42-43.

［4］李杰，楊立峰，李恒帥，等.不同季節(jié)種公牛精液各項(xiàng)指標(biāo)分析［J］.中國(guó)畜牧雜志，2008，44（24）：61-64.