吳偉群 何小杰 李延輝 康舉齡 夏明汗 謝敏如

（1 東莞市石碣醫(yī)院內(nèi)科，廣東 東莞 523290 ；2 東莞市石碣醫(yī)院五官科，廣東 東莞 523290；3 東莞市石碣醫(yī)院病理科，廣東 東莞 523290；4 暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院華僑醫(yī)院病理科，廣東 廣州 510630）

甲狀腺腫瘤是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤之一，臨床往往表現(xiàn)為無(wú)痛性甲狀腺結(jié)節(jié)，其多起病隱匿，生物學(xué)特征多變，對(duì)其良、惡性腫瘤的鑒別診斷，就現(xiàn)有的影像學(xué)、細(xì)胞學(xué)甚至病理學(xué)診斷都存在一定誤差，因此研究甲狀腺良、惡性腫瘤在形成和演變過(guò)程中的分子機(jī)制，從微觀(guān)的角度尋找輔助鑒別甲狀腺良惡性腫瘤和判斷甲狀腺癌轉(zhuǎn)移潛力的分子診斷標(biāo)志物，以期指導(dǎo)臨床設(shè)計(jì)更為合理的治療方案，已成為甲狀腺腫瘤研究領(lǐng)域中的一熱點(diǎn)課題[1,2]。缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia indueible faetor-1，HIF-1）是1992年Semenza等在低氧的肝細(xì)胞癌細(xì)胞株Hep3B細(xì)胞的核提取物中發(fā)現(xiàn)的一種轉(zhuǎn)錄因子，能激活許多缺氧反應(yīng)性基因的表達(dá)，主要由HIF-1α和HIF-1β兩個(gè)亞單位組成。研究表明，在乳腺、胃腸、肺、頭頸，卵巢等多數(shù)惡性腫瘤組織內(nèi)，HIF-1α都有不同程度表達(dá)[3]，且HIF-1α的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移能力相關(guān)，其高表達(dá)常提示不良的預(yù)后。目前尚未見(jiàn)HIF-1α蛋白在甲狀腺腫瘤中表達(dá)的鑒別診斷價(jià)值及其與甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系報(bào)道。本研究采用免疫組織化學(xué)Envision法檢測(cè)HIF-1α蛋白在甲狀腺良、惡性腫瘤中的表達(dá)，旨在探討HIF-1α在甲狀腺良、惡性腫瘤形成、演變和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用機(jī)制，為早期鑒別診斷甲狀腺良惡性腫瘤和預(yù)測(cè)甲狀腺癌轉(zhuǎn)移潛力、預(yù)后提供新的分子標(biāo)志。

1 材料與方法

1.1 材 料

選擇2005年8月16日至2010年9月15日東莞石碣醫(yī)院和暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院的甲狀腺腫瘤石蠟組織標(biāo)本190例，男性46例，女性144例；年齡21～72歲，平均（46.5±4.6）歲。其中甲狀腺癌140例（包括乳頭狀癌45例，濾泡狀癌45例，髓樣癌25例，末分化癌25例）和甲狀腺腺瘤50例。另取腺瘤旁經(jīng)病理證實(shí)的正常甲狀腺組織30例為對(duì)照。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè)

全部蠟塊標(biāo)本連續(xù)4 μm切片，采用Elivsion兩步法HIF-1α蛋白的表達(dá)，Elivsion試劑盒和DAB顯色試劑盒均購(gòu)自廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司，HIF-1α鼠抗人多克隆抗體均購(gòu)自Bioworld Technology公司。操作程序按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。陰性對(duì)照以PBS替代一抗，用已知陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判斷：HIF-1α陽(yáng)性染色主要表現(xiàn)為細(xì)胞核或細(xì)胞核及部分細(xì)胞漿內(nèi)呈現(xiàn)棕色或淡棕色顆粒，采用半定量評(píng)分法，染色強(qiáng)度：1分，染色弱但明顯強(qiáng)于陰性對(duì)照；2分，染色清晰，中等程度；3分，染色程度強(qiáng)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：2分，陽(yáng)性細(xì)胞占11～50%；3分，陽(yáng)性細(xì)胞占51～80%；4分，陽(yáng)性細(xì)胞≥81%。上述兩項(xiàng)評(píng)分相加，不論染色強(qiáng)度，陽(yáng)性細(xì)胞≤10%為（-），3分為（+），4～5分為（++），6～7分為（+++）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)資料運(yùn)用卡方檢驗(yàn)法。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HIF-1α在各型甲狀腺腫瘤組織和正常甲狀腺組織中的表達(dá)

正常甲狀腺組織中無(wú)HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)；甲狀腺腺瘤HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率為12.0%（6/50）；甲狀腺癌HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)率為68.6%（96/140）。正常甲狀腺組織與甲狀腺腺瘤中HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），甲狀腺癌中HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)明顯高于正常甲狀腺組織和甲狀腺腺瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而不同類(lèi)型甲狀腺癌組織間HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 HIF-1α在各型甲狀腺腫瘤組織和正常甲狀腺組織中的表達(dá)比較

2.2 甲狀腺癌組織中HIF-1α與臨床病理特征的關(guān)系

HIF-1α在140例甲狀腺癌組織中的表達(dá)與是否有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、分化程度以及AJCC分期密切相關(guān)（P＜0.01），而與年齡、性別、腫瘤的大小無(wú)關(guān)（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 甲狀腺癌組織中HIF-1α與臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

甲狀腺腫瘤是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌腫瘤，由于病理類(lèi)型較多，甲狀腺良、惡性病變的臨床生物學(xué)行為不同，治療處理方法不同、預(yù)后也不同。盡管目前B超、X射線(xiàn)、同位素掃描等使甲狀腺腫瘤的鑒別診斷有所提高，但其良惡性鑒別仍然是臨床的一大難點(diǎn)。隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展，人們逐漸試圖從分子水平揭示甲狀腺良、惡性腫瘤在形成和演變過(guò)程中的分子機(jī)制。因此，確立能鑒別良、惡性甲狀腺腫瘤并估計(jì)預(yù)后的特異性腫瘤標(biāo)志物及運(yùn)用于臨床，對(duì)指導(dǎo)治療方案的制定提高臨床診治水平、避免病人接受不必要的治療具有重要意義[4,5]。

研究表明，實(shí)體腫瘤在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中內(nèi)部普遍存在低氧物理微環(huán)境特征，并對(duì)缺氧作出復(fù)雜的應(yīng)激反應(yīng)[6]。其中HIF-1α是細(xì)胞在缺氧條件下產(chǎn)生的一種核轉(zhuǎn)錄因子，缺氧誘導(dǎo)HIF-1α激活，進(jìn)而調(diào)節(jié)與腫瘤發(fā)生發(fā)展、血管生成以及腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的多種因子轉(zhuǎn)譯和翻譯，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞盡快適應(yīng)低氧微環(huán)境，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的潛能。隨著對(duì)缺氧反應(yīng)基因HIF-1α的深入研究，HIF-1α與腫瘤的關(guān)系日益受到重視，相信以HIF-1α為靶點(diǎn)治療腫瘤將可能成為腫瘤治療的新方法。

本研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌中HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)明顯高于正常甲狀腺組織和甲狀腺腺瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明隨著細(xì)胞異常增殖生長(zhǎng)、惡變，環(huán)境缺氧程度加重，細(xì)胞內(nèi)HIF-1α表達(dá)也隨之增高，以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧的環(huán)境，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞異常增殖。提示HIF-1α參與了甲狀腺癌的形成過(guò)程，可能在其中扮演重要轉(zhuǎn)錄和調(diào)節(jié)的角色，可以作為輔助甲狀腺癌早期鑒別診斷的參考指標(biāo)[7]。而不同類(lèi)型甲狀腺癌組織間HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明HIF-1α在不同病理類(lèi)型甲狀腺癌發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮的作用是相似的。

本研究結(jié)果進(jìn)一步證明，HIF-1α在140例甲狀腺癌組織中的表達(dá)與是否有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、分化程度以及AJCC分期密切相關(guān)（P＜0.01），而與年齡、性別、腫瘤的大小無(wú)關(guān)（P＞0.05）。提示HIF-1α基因的過(guò)度表達(dá)不僅可能是甲狀腺癌形成過(guò)程的早期事件，還可能在癌變后繼續(xù)發(fā)揮其功能，與甲狀腺癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，可作為反映甲狀腺癌惡性生物學(xué)行為的重要標(biāo)記物。但HIF-1α在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步探討，相信隨著研究的不斷深入，HIF-1α將為甲狀腺癌的早期診斷和靶向分子治療開(kāi)辟新的思路。

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