鄒自英，朱 冰，吳麗娟，陳雪芹

(成都軍區(qū)總醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610083)

臨床感染性疾病中最主要的感染類型是細(xì)菌感染,伴隨抗生素的廣泛應(yīng)用,各種多重耐藥菌株得以產(chǎn)生和傳播[1-2]，給臨床病原確定和疾病治療帶來困擾。致病菌入侵后，在建立感染的同時(shí)，能激發(fā)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生一系列免疫應(yīng)答與之對抗，淋巴細(xì)胞是機(jī)體執(zhí)行免疫防御的主要細(xì)胞，淋巴細(xì)胞及其亞群的改變在很大程度上反映了機(jī)體的免疫功能狀況，在抗細(xì)菌感染中發(fā)揮極其重要的作用。為了探討不同細(xì)菌感染患者的免疫功能狀態(tài)，對2009年5月至2011年4月期間我院53例細(xì)菌感染患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測情況進(jìn)行了回顧性調(diào)查，期望獲得不同細(xì)菌感染患者淋巴細(xì)胞亞群變化的一些規(guī)律，使流式細(xì)胞檢查技術(shù)和細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)有效的結(jié)合，給臨床提供更有意義的檢測信息，更好的服務(wù)于臨床和患者。

1 材料與方法

1.1 一般資料 研究對象選擇2009年5月至2011年4月我院已明確病原菌感染的患者53例，其中，男42例，女11例。年齡1～85歲，平均39.28歲±22.19歲。對照組為同期本院459例健康體檢者，其中，男341例，女118例。年齡36～60歲，平均44.59歲。病例分組方法：所有53例患者均已采用細(xì)菌培養(yǎng)方法明確病原菌，歸類總感染組；其中，采用PCR方法檢測出病毒感染的患者，歸類細(xì)菌病毒混合感染組；僅檢測出病原菌而未檢測出病毒的患者，歸類單純細(xì)菌感染組。

1.2 主要試劑 革蘭陰性菌鑒定卡GN及革蘭陽性菌鑒定卡GP均為法國梅里埃公司產(chǎn)品；各類病毒DNA及RNA測定試劑盒均為中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司產(chǎn)品；同型對照抗體IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PC5，測定抗體CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5、CD3-FITC/CD19-PE 和 CD3-FITC/CD16/56-PC5，F(xiàn)low-Count標(biāo)準(zhǔn)熒光微球，標(biāo)本預(yù)處理試劑(包括溶液A、溶液B和溶液C)等均為美國BECKMAN-COULTER公司產(chǎn)品。

1.3 主要儀器 法國梅里埃公司的VETEK 2 COMPACT型全自動(dòng)微生物鑒定儀，美國BECKMANCOULTER公司XL4-MCL型流式細(xì)胞儀。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 取細(xì)菌感染患者靜脈血2mL，EDTA-K2抗凝。具體操作參見文獻(xiàn)[3]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示。多組樣本均數(shù)的兩兩比較采用方差分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌感染患者初次診斷淋巴細(xì)胞亞群測定結(jié)果，設(shè)健康對照組為A；總感染組為B；單純細(xì)菌感染組為C；細(xì)菌病毒混合感染組為D。(1)總感染組T4細(xì)胞、DN-T細(xì)胞、T4/T8比值顯著低于健康對照組 (P＜0.05)，T8細(xì)胞顯著高于健康對照組且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而總T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞與健康對照組比較(P＞0.05)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)單純細(xì)菌感染組T4細(xì)胞、DN-T細(xì)胞、DP-T細(xì)胞顯著低于健康對照組 (P＜0.05)，T8細(xì)胞顯著高于健康對照組且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而總T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、T4/T8比值與健康對照組比較 (P＞0.05)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)細(xì)菌病毒混合感染組T4細(xì)胞、T4/T8比值、NK細(xì)胞顯著低于健康對照組(P＜0.05)，B細(xì)胞和T8細(xì)胞顯著高于健康對照組且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)，而總T細(xì)胞、DN-T細(xì)胞、DP-T細(xì)胞與健康對照組比較(P＞0.05)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)單純細(xì)菌感染組DN-T細(xì)胞、DP-T細(xì)胞、B細(xì)胞顯著低于細(xì)菌病毒混合感染組 (P＜0.05)，NK細(xì)胞顯著高于細(xì)菌病毒感染組(P＜0.01)，而總T細(xì)胞、T4細(xì)胞、T8細(xì)胞、T4/T8比值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)果見表1。

表1 淋巴細(xì)胞亞群測定結(jié)果(s，%)

表1 淋巴細(xì)胞亞群測定結(jié)果(s，%)

注 aP：A與B比較；bP:A與C比較；cP：A與D比較；dP：C與D比較

分組 n 總T細(xì)胞 T4細(xì)胞 T8細(xì)胞 T4/T8值 DN-T細(xì)胞 DP-T細(xì)胞 B細(xì)胞 NK細(xì)胞A B C D a 459 53 40 13 P bP cP dP 69.98±5.79 66.48±13.91 66.83±11.84 66.26±19.93＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05 35.25±5.16 28.46±12.26 29.61±12.24 25.25±12.21＜0.01＜0.01＜0.01＞0.05 25.08±4.34 32.17±14.10 31.64±13.10 34.44±17.74＜0.01＜0.01＜0.01＞0.05 1.45±0.28 1.15±0.83 1.18±0.86 1.04±0.77＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05 6.17±3.08 4.89±3.94 4.28±2.44 6.51±6.52＜0.05＜0.01＞0.05＜0.01 0.71±0.36 0.59±0.57 0.54±0.46 0.72±0.82＞0.05＜0.05＞0.05＜0.05 10.74±3.00 13.48±15.52 10.218.19 25.75±27.88＞0.05＞0.05＜0.01＜0.01 11.56±2.54 11.25±7.19 12.28±7.39 7.24±4.34＞0.05＞0.05＜0.05＜0.01

2.2 不同種屬細(xì)菌感染患者淋巴細(xì)胞亞群測定結(jié)果

設(shè)對照組為A，葡萄球菌感染組為B，鏈球菌感染組為C，銅綠假單胞菌感染組為D，不動(dòng)桿菌感染組為E，克雷伯菌感染組為F，腸桿菌感染組為G，結(jié)核菌感染組為H。銅綠假單胞菌感染組T4細(xì)胞和T4/T8比值顯著低于對照組，而T8細(xì)胞和B細(xì)胞顯著高于對照組(P＜0.05)；不動(dòng)桿菌感染組T8細(xì)胞顯著高于對照組，而T4/T8比值、DN-T細(xì)胞、DPT細(xì)胞和NK細(xì)胞顯著低于對照組(P＜0.05)；克雷伯菌感染組和腸桿菌感染組T4細(xì)胞和T4/T8比值顯著低于對照組，而T8細(xì)胞顯著高于對照組(P＜0.05)；結(jié)核桿菌感染組T4細(xì)胞和T4/T8比值顯著低于對照組，NK細(xì)胞顯著高于對照組(P＜0.05)；葡萄球菌和鏈球菌感染組與對照組比較，各種淋巴細(xì)胞的變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，結(jié)果見表2。

3 討論

表2 不同種屬細(xì)菌感染患者淋巴細(xì)胞亞群測定結(jié)果(s，%)

表2 不同種屬細(xì)菌感染患者淋巴細(xì)胞亞群測定結(jié)果(s，%)

注 aP：A與B比較；bP A與C比較；cP A與D比較；dP A與E比較；eP A與F比較；fP A與G比較；gP A與H比較

分組 n 總T細(xì)胞 T4細(xì)胞 T8細(xì)胞 T4/T8值 DN-T細(xì)胞 DP-T細(xì)胞 B細(xì)胞 NK細(xì)胞A B C D E F G H a 459 6 5 7 5 1 2 8 1 0 P bP cP dP eP fP gP 69.98±5.79 69.00±10.17 67.75±13.03 66.49±2.56 70.74±5.81 68.01±12.71 69.56±10.81 65.97±14.09＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05 35.25±5.16 35.49±11.68 32.86±12.14 24.30±7.68 33.06±9.30 25.22±4.85 24.51±12.17 20.33±14.80＞0.05＞0.05＜0.01＞0.05＜0.01＜0.01＜0.01 25.08±4.34 28.70±10.85 26.55±6.05 31.06±3.58 33.90±7.81 35.08±7.88 39.02±16.14 21.13±6.05＞0.05＞0.05＜0.05＜0.05＜0.01＜0.01＞0.05 1.45±0.28 1.41±0.68 1.55±0.64 1.00±0.66 1.16±0.72 0.86±0.64 0.81±0.55 0.86±0.64＞0.05＞0.05＜0.05＜0.05＜0.01＜0.01＜0.01 6.17±3.08 4.10±2.94 4.40±2.09 7.22±1.55 3.64±1.26 4.90±2.93 5.36±1.77 4.90±0.54＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＞0.05 0.71±0.36 0.63±0.42 0.59±0.26 0.92±0.16 0.16±0.10 0.55±0.21 0.63±0.37 0.56±0.26＞0.05＞0.05＞0.05＜0.01＞0.05＞0.05＞0.05 10.74±3.00 11.37±7.77 10.26±9.06 38.78±5.96 8.40±3.26 12.66±7.96 8.12±3.25 13.93±11.42＞0.05＞0.05＜0.01＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05 11.56±2.54 9.23±3.66 14.67±7.76 8.85±3.94 4.75±2.00 13.14±6.41 10.07±4.17 18.40±9.58＞0.05＞0.05＞0.05＜0.01＞0.05＞0.05＜0.05

淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)功能最重要的細(xì)胞群。在機(jī)體正常情況下，各種淋巴細(xì)胞亞群保持一定的數(shù)量和比例，相互作用，穩(wěn)定調(diào)節(jié)，維持著機(jī)體正常的免疫功能。當(dāng)不同的淋巴細(xì)胞亞群的量及功能發(fā)生異常改變時(shí)，機(jī)體就會(huì)產(chǎn)生一系列的病理變化及免疫功能失調(diào)，使細(xì)菌、病毒等病原物質(zhì)容易侵入機(jī)體引起疾病。

各感染組T4細(xì)胞比健康對照組均顯著下降，而T8細(xì)胞均顯著升高，表示細(xì)菌感染患者輔助B細(xì)胞產(chǎn)生的免疫球蛋白減少及細(xì)胞免疫減弱。CD8+是抑制性細(xì)胞(Ts)/細(xì)胞毒性細(xì)胞(Tc)亞群，能抑制TH細(xì)胞產(chǎn)生IL-2，又有抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能，也是細(xì)胞毒性T細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞。CD8+細(xì)胞被認(rèn)為是免疫調(diào)控的關(guān)鍵。一般認(rèn)為，其增多表示免疫抑制。CD4+/CD8+細(xì)胞比值，表示Th與Ts之間功能平衡狀態(tài)，是人體免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定最重要的指標(biāo)。如比值降低，則提示機(jī)體免疫功能降低。細(xì)胞免疫功能改變往往敏感地表現(xiàn)在Th/Ts比值改變上，Th/Ts比值的下降被認(rèn)為是疾病嚴(yán)重和預(yù)后不良的重要指標(biāo)之一[4]。表1中各感染組T4/T8細(xì)胞與健康對照組比均下降，表示機(jī)體免疫功能降低。DN-T細(xì)胞和DP-T細(xì)胞的改變表示細(xì)菌感染引起T細(xì)胞分化發(fā)育紊亂及細(xì)胞功能障礙。B細(xì)胞產(chǎn)生抗體介導(dǎo)體液免疫，為抗胞外細(xì)菌感染比較有效的應(yīng)答，提呈抗原以及分泌細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)。表1中各感染組B細(xì)胞比健康對照組均有所升高表示機(jī)體體液免疫功能有所增強(qiáng)。NK細(xì)胞屬于固有免疫細(xì)胞,是抗腫瘤免疫的第一道防線[5]，是人體非特異性免疫的組成部分，是機(jī)體抗多種微生物病原體感染的重要免疫因素[6]，NK細(xì)胞異常在病毒感染時(shí)尤其突出[3]。表1中總感染組和細(xì)菌病毒混合感染組NK細(xì)胞均下降，單純細(xì)菌感染組NK細(xì)胞增加，可能是病毒感染時(shí)NK細(xì)胞殺滅病毒本身消耗增加，說明NK細(xì)胞抗病毒感染比抗細(xì)菌感染作用更突出。有研究提示菌血癥患者感染不同類型病原菌后，淋巴細(xì)胞亞群的變化呈現(xiàn)不同的表型[7]。表2結(jié)果提示，銅綠假單胞菌感染、不動(dòng)桿菌感染、克雷伯菌感染、腸桿菌感染和結(jié)核菌感染患者T4和T4/T8降低，提示感染者細(xì)胞免疫功能均受到抑制，患者免疫功能降低。而不動(dòng)桿菌感染DN-T細(xì)胞、DP-T細(xì)胞降低提示T細(xì)胞分化發(fā)育紊亂和細(xì)胞功能障礙突出。銅綠假單胞菌感染、不動(dòng)桿菌感染、克雷伯菌感染和腸桿菌感染T8細(xì)胞升高，抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體從而使得患者體液免疫功能受到抑制。而銅綠假單胞菌感染B細(xì)胞升高提示患者機(jī)體調(diào)動(dòng)體液免疫的功能有所增強(qiáng)。不動(dòng)桿菌感染NK細(xì)胞降低提示感染者非特異性免疫功能也有所降低。結(jié)核桿菌感染患者淋巴細(xì)胞亞群的變化呈現(xiàn)T4、T8[8]、iNK 細(xì)胞[9]降低，而 NK 細(xì)胞升高的特點(diǎn)[8]，與我們的結(jié)果一致，可能與結(jié)核桿菌為胞內(nèi)寄生菌，細(xì)胞免疫和體液免疫功能均有所降低，而非特異性免疫功能相對增強(qiáng)。葡萄球菌和鏈球菌感染組與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示需要增加樣本統(tǒng)計(jì)量從而獲得感染者機(jī)體免疫功能變化的一些規(guī)律性的信息，我們在今后的工作中會(huì)注意相關(guān)數(shù)據(jù)的收集。

總之，淋巴細(xì)胞是機(jī)體執(zhí)行免疫防御的主要細(xì)胞，淋巴細(xì)胞亞群的改變在很大程度上反映了機(jī)體的免疫功能狀況，因此淋巴細(xì)胞亞群的測定對細(xì)菌感染的診斷及臨床治療有一定指導(dǎo)意義。

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