劉云華，王宏碧，王紹蘭，鄧 萍

(1、宜春市中心血站，江西 宜春 336000；2、宜春市人民醫(yī)院，江西 宜春 336000)

目前血小板在臨床的應(yīng)用越來越廣，主要應(yīng)用于治療血小板生成障礙，引起的血小板減少，血小板功能異常、稀釋性血小板減少，預(yù)防性輸注等。而制備高品質(zhì)的濃縮血小板，滿足臨床應(yīng)用的需要，對制備濃縮血小板技術(shù)、設(shè)備等提出了更高要求。目前血小板制備方法分兩種，一種是手工法，另一種是用血細(xì)胞分離機(jī)采集法[1，2]。我們應(yīng)用具有離心積分功能的Thermo-KR4i大容量冷凍離心機(jī)，離心制備濃縮血小板，大大提高了血小板回收率?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

400 ml四聯(lián)袋 (山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品有限公司，CPD方)，血小板保存袋具有良好的透氣性[3]。 大容量冷凍離心機(jī)(德國，Thermo-KR4I)、大容量冷凍離心機(jī)(德國，Cryofuge-6000i)、熱合機(jī)(費(fèi)森尤斯)。

1.2 原料血

1.2.1 采血過程中要注意影響濃縮血小板制備的因素，采血時(shí)需求一針見血，盡量減少組織損傷，采400mL全血在6min內(nèi)完成。采血過程中要不間斷地輕搖血袋，使血液和抗凝劑充分混勻，以防血液凝固，影響血小板回收率[3]。

1.2.2 血液的保存和運(yùn)輸環(huán)境對濃縮血小板制備的影響，從采血到制備過整個(gè)過程均需求在22℃±2℃環(huán)境中。若保存不當(dāng)，受損血小板可達(dá)95%[4]；血小板保存5d后，PF3活性可增加12倍，血小板出現(xiàn)廣泛聚集。

1.3 分組 對照組：隨機(jī)抽取2010年2月至2011年 6月采用方案 3（2600×g離心 8min)，以 Cryofuge-6000i普通離心機(jī)離心制備血小板制品50份。實(shí)驗(yàn)組：隨機(jī)抽取2010年2月至2011年6月采用方案3(2600×g離心8min)，以具有離心積分功能的Thermo-KR4i離心制備血小板50份。對照組和實(shí)驗(yàn)組的全血與血小板制品均采用AC970血球計(jì)數(shù)儀檢測血小板含量。

1.4 制備方法

1.4.1 400ml全血的四聯(lián)袋置于22℃±2℃溫度離心2600×g離心8min，離心后主袋置于分漿夾內(nèi)，先將大部分血漿分入第二袋，然后將白膜層（血小板、白細(xì)胞和少量紅細(xì)胞層）擠入第三袋，再從第二袋分出適量血漿至第三袋。

1.4.2 夾住第二、三袋間的塑料管，將第四袋內(nèi)的紅細(xì)胞保存液加入主袋內(nèi)，使之與主袋內(nèi)紅細(xì)胞混勻，熱合主袋與第四袋間的塑料管。

1.4.3 將第三、四袋置于22℃±2℃ 280×g輕度離心10min，將第三袋上層懸液分入第四袋即得血小板濃縮液。

2 結(jié)果

對照組和實(shí)驗(yàn)組的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，描述性統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1，獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)結(jié)果顯示全血血小板總體均數(shù)無顯著性差異的情況下，通過采用具有離心積分功能的德國Thermo-KR4i大容量冷凍離心機(jī)制備血小板，回收率(81.56±0.17)%顯著高于對照組(60.00±0.18)%，P<0.05。

表1 100例血小板制備的效果

3 討論

離心效果影響對濃縮血小板制備的質(zhì)量，離心力和離心時(shí)間是決定離心效果的關(guān)鍵因素[4]，但無法僅用這兩個(gè)參數(shù)來準(zhǔn)確衡量離心效果，因?yàn)殡x心提速是個(gè)加速度過程，離心樣品量增加、電壓驟變、環(huán)境溫度和濕度改變、離心機(jī)轉(zhuǎn)子老化等因素都會減緩提速，從而影響最終的離心效果。離心積分(HRF)是國際公認(rèn)衡量離心效果的科學(xué)標(biāo)尺。HRF=RCF(相對離心力)與離心時(shí)間的積分，它是離心效果重復(fù)性的保證。Thermo-KR4i大容量冷凍離心機(jī)具備離心積分的功能，充分考慮了離心過程中各種影響因素對離心加速的影響，保證施加于樣品的離心力總量的一致，從而保證一致的離心效果。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，利用具有離心積分功能的德國Thermo-KR4i大容量冷凍離心機(jī)離心制備的濃縮血小板含量比普通冷凍離心機(jī)的更高，回收率更穩(wěn)定。

[1]秦艷蘭,劉景春,劉仁強(qiáng).自動和手工制備濃縮血小板的質(zhì)量評價(jià)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009,27(01):33-34.

[2]袁小玲,李文斌,熊春梅,等.優(yōu)化手工制備濃縮血小板方法的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(05):493-494.

[3]劉海田.血液血液制品采集檢測技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)量控制實(shí)務(wù)全書[M].北京中軟電子出版社,2003:409.

[4]習(xí) 燕,雷 宇,付雪梅,等.手工分離濃縮血小板制備方法的質(zhì)量分析[J].中國輸血雜志,2010,23（3）:213-214.