郭學(xué)東,張麗娟,馮立國

(吉林省梨樹縣畜牧總站 136500)

添加維生素B12對西門塔爾牛冷凍精液品質(zhì)影響的初步觀察

郭學(xué)東,張麗娟,馮立國

(吉林省梨樹縣畜牧總站 136500)

為觀察稀釋液中添加VB12對西門塔爾牛精液品質(zhì)的影響，進(jìn)行了對比試驗。結(jié)果表明:添加VB12的試驗組凍精解凍后精子活力、頂體完整率比對照組有極顯著提高 ( P ＜ 0.01)，精子畸形率與GOT活性均明顯下降，精子存活時間延長。說明VB12在牛精液冷凍中對牛精子形態(tài)結(jié)構(gòu)具有一定保護(hù)作用。

牛精液；冷凍；維生素B12；精子質(zhì)量

自20世紀(jì)50年代初，牛精液冷凍技術(shù)由Smith和Polge研究成功后，已在全世界范圍內(nèi)應(yīng)用，并進(jìn)入了生產(chǎn)過程。據(jù)有關(guān)報道，VB12可以提高精子活力和受胎率[1]。本試驗在牛的精液冷凍稀釋液中添加VB12，觀察解凍后牛精子某些生理生化指標(biāo)的變化,以期為生產(chǎn)實踐提供參考。

1 材料和方法

1.1 稀釋液的配制

用天平稱取Tris(三羥甲基氨基甲烷)12.12 g、葡萄糖5.5 g、檸檬酸6.76 g，放入1000 mL的三角燒杯中，加入重蒸餾水344.12 g，待充分溶解后用濾紙(用酒精燈燒掉絨毛)過濾后，放入水浴鍋中煮沸消毒30 min，加入甘油32 mL，然后放入4～5℃的冰箱中。

在采精前取出稀釋液，每500 mL加入青霉素80萬單位、鏈霉素50萬單位，然后放入水浴鍋中加溫至32℃，加入卵黃100 mL充分振蕩，使卵黃充分溶解。然后加入河南潤弘生物制藥廠生產(chǎn)的VB12注射液2.5 mL(1 ml含VB120.5 mg,其化學(xué)成份含有微量元素鈷)為試驗稀釋液。

對照組稀釋液除不含VB12外,其他成分及劑量均與試驗組稀釋液相同。

1.2 精液的冷凍

試驗所用公牛為四平市興牛牧業(yè)服務(wù)有限公司種公牛站中挑選的相近年齡和體重的4頭西門塔爾種公牛(XM09297、XM09223、XM09315、XM09139)。用假陰道采精，原精活力都在0.6以上。本實驗用20個采精日完成。

將1次采精取得的精液分為2等份，1份用試驗組稀釋液稀釋，另一份用對照組稀釋液稀釋，稀釋劑量兩組相同。經(jīng)2 h緩慢降溫至5℃后，放入5℃平衡柜中平衡2 h，然后在冷凍儀中冷凍。

1.3 冷凍精液的解凍

預(yù)先把水浴鍋水溫加熱至38～40℃，細(xì)管凍精用鑷子分別取出迅速放入盛有38℃水的容器中解凍，解凍時間為10～15 s，待溶解后立即取出，用吸水紙或紗布擦干水滴，再用細(xì)管剪剪去超聲波封口端1 cm，滴一小滴精液于顯微鏡載玻片上鏡檢即可。

1.4 精液品質(zhì)測定

精子活力測定：采用常規(guī)方法, 按百分制評定精子活力。每個樣品重復(fù)2次，取其平均數(shù)。

精子頂體完整率和畸形率的測定：每個樣品用姬姆薩染色法涂片2張，每張在油鏡下分別數(shù)500個精子，計算頂體完整率和畸形率。

GOT 活性的測定：精液的樣品經(jīng)1500 r/min離心5 min，取其精清按常規(guī)方法[2]測定GOT(谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶)活性。

精子存活時間測定：解凍后的精液放在39℃恒溫箱中，定時檢查精子活力，直至精子全部死亡為止。

2 結(jié)果與分析

由表1可以看出，試驗組比對照組精子活力有極顯著提高(P＜0.01)，頂體完整率有極顯著提高(P＜0.01)；精子畸形率和GOT活性均明顯下降，精子存活時間延長。試驗結(jié)果表明，在牛的精液冷凍中添加維生素稀釋液對精子具有一定保護(hù)作用。

試驗組凍精解凍后的精子形態(tài)結(jié)構(gòu)損傷程度較對照組小，GOT外滲量少，精子活力高。因為精子前進(jìn)運(yùn)動主要動力來自尾部，GOT是精子尾部線粒體上的主要酶之一，當(dāng)精子尾部受到損傷時，線粒體上GOT向精清中釋放，而使精清中酶的活性增強(qiáng)，但精子活力卻減弱。目前只知道VB12是一種輔酶，含有微量元素鈷，具有促進(jìn)血細(xì)胞成熟，參與機(jī)體代謝作用，是否與它含的微量元素鈷有關(guān)，還需要進(jìn)一步探索。

試驗所用公牛頭數(shù)較少，只是初步結(jié)果，其它一些影響因素還有待進(jìn)一步深入探討。

表1 添加VB12對解凍后精液品質(zhì)的影響

[1] 董偉.家畜繁殖學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1990,51,79,147-149.

[2] 北京農(nóng)業(yè)大學(xué). 動物生化學(xué)實驗指導(dǎo)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社, 1986.

S823.3

A

1005-2739（2011）06-0050-02

2011-09-13

郭學(xué)東(1975-)，男，?？疲竽翈?。E-mail: jlls5222016@126.com