張 琦 付明哲 陳曉霖

（1.陜西出入境檢驗(yàn)檢疫局，西安 710068；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)，楊凌 712100）

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、綿羊脫纖鮮血瓊脂平板、普通肉湯、三糖鐵斜面、各種糖發(fā)酵管均按《獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo)》制備；藥敏紙片購自杭州某微生物試劑有限公司；新潔爾滅、84消毒液均購自市場(chǎng)；小白鼠由西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 細(xì)菌分離和培養(yǎng)

無菌采取病死豬的肺臟、肝臟、脾臟等病料涂片，革蘭染色鏡檢。然后用采集的病料無菌操作連續(xù)劃線接種普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、綿羊脫纖鮮血瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24 h，從中分離到1株可疑細(xì)菌，再接種到普通平板、麥康凱瓊脂平板，以進(jìn)一步純化細(xì)菌，經(jīng)過涂片和革蘭染色鏡檢后接種到普通斜面，37℃培養(yǎng)24 h，4℃保存菌株待用。

1.3 生化和生物學(xué)特性試驗(yàn)

生化試驗(yàn)和生物學(xué)特性的的測(cè)定按參考文獻(xiàn)［1，2，3］介紹的方法進(jìn)行。將普通斜面上的純細(xì)菌分別接種到各種生化試驗(yàn)管及普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、綿羊脫纖鮮血瓊脂平板、普通肉湯。

1.4 抗生素敏感性試驗(yàn)

將37 ℃，24 h肉湯培養(yǎng)物計(jì)數(shù)，其菌量（含3億個(gè)/ml）；鏡檢革蘭染色觀察純度，再用滅菌棉簽將普通肉湯培養(yǎng)物涂抹于普通瓊脂平板，將藥敏紙片壓貼于普通瓊脂平板上，4 ℃放置2 h，然后在37 ℃下培養(yǎng)24 h，最后通過測(cè)定抑菌圈的大小來判斷細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性。

1.5 動(dòng)物致病性試驗(yàn)

將37℃，24h肉湯培養(yǎng)物計(jì)數(shù)，其菌量（含3億個(gè)/毫升）；鏡檢革蘭染色觀察純度，用純菌給實(shí)驗(yàn)組小白鼠腹腔注射0.2ml/只；對(duì)照組小白鼠注射等量肉湯。

1.6 消毒劑滅活試驗(yàn)

分別將新潔爾滅和84消毒液配成1%、3%、5%濃度溶液，再將37 ℃，24 h肉湯培養(yǎng)物計(jì)數(shù)，其菌量（含3×108億個(gè)/ml）；鏡檢革蘭染色觀察純度，經(jīng)稀釋（含3×107個(gè)/ml），接0.1 ml肉湯培養(yǎng)物分別于不同濃度的消毒液溶液中，在25 ℃下作用3 min、5 min、10 min，最后將各濃度消毒劑溶液的細(xì)菌接種到普通瓊脂平板于37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 分離菌的生物學(xué)特性

革蘭陰性，小球桿菌，散在排列，無芽孢，無莢膜，周生鞭毛。普通瓊脂平板、麥康凱平板上生長(zhǎng)良好。普通瓊脂平板上菌落中等大小、圓形、邊緣整齊、微凸起、濕潤(rùn)、表面光滑、乳白色；麥康凱平板上菌落中等大小，無色透明，圓形、微凸起、濕潤(rùn)、表面光滑，邊緣整齊；綿羊脫纖鮮血瓊脂平板上菌落中等大小、白色凸起、不溶血、邊緣整齊；在普通肉湯中呈一致混濁性生長(zhǎng)；三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基斜面變紅，底層產(chǎn)酸產(chǎn)氣，沿穿刺線生長(zhǎng)，H2S陽性。

2.2 生化試驗(yàn)

詳見表1。

表1 分離菌生化試驗(yàn)

2.3 藥敏試驗(yàn)

詳見表2。從表2可以看出，分離菌對(duì)抗生素高度敏感（抑菌環(huán)直徑≥16 mm）：先鋒噻肟、菌必治、呋喃妥因、頭孢呋肟、復(fù)達(dá)欣、環(huán)丙沙星、先鋒必、阿米卡星、氧氟沙星、氟哌酸、妥布霉素；中度敏感（16 mm＞抑菌圈直徑≥3 mm）：頭孢拉定、利福平、氯霉素、頭孢唑林、卡那霉素、四環(huán)素；不敏感（沒有抑菌圈或抑菌圈直徑＜2 mm）：萬古霉素、青霉素G、鏈霉素、復(fù)方新諾明、紅霉素、氨芐青霉素、慶大霉素、苯唑青霉素。

表2 分離菌藥敏試驗(yàn)

2.4 動(dòng)物致病試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)組小白鼠注射后24 h后活動(dòng)減慢，呼吸變快，毛直立，36 h后死亡。從死鼠肝臟分離到感染菌，對(duì)照組無死亡。

2.5 消毒劑滅活試驗(yàn)

接0.1 ml稀釋肉湯培養(yǎng)物（3×107個(gè)/毫升）分別于不同濃度等量的消毒液溶液中，在25 ℃下作用3 min、5 min、10 min后，鼠傷寒沙門氏菌失去活性。

3 小結(jié)與討論

（1）經(jīng)生化試驗(yàn)、生物學(xué)特性觀察證實(shí)所分離的細(xì)菌為鼠傷寒沙門氏菌。先鋒噻肟、菌必治、呋喃妥因、頭孢呋肟等抗生素臨床首選對(duì)該菌所引起的豬病進(jìn)行治療。化學(xué)消毒劑可以在短時(shí)間內(nèi)可以殺死鼠傷寒沙門氏菌。

（2）從此病料還分離出表皮葡萄球菌和革蘭陽性芽孢桿菌，再未分離出其他細(xì)菌。本實(shí)驗(yàn)室未進(jìn)行厭氧菌的分離培養(yǎng)、病毒的分離培養(yǎng)及寄生蟲的檢驗(yàn)。是否有其他病原微生物及其他原因引起豬發(fā)病死亡，還有待進(jìn)一步研究。

（3）豬鼠傷寒沙門氏菌通常寄生在動(dòng)物消化道內(nèi)，形成健康動(dòng)物的帶菌現(xiàn)象，豬在生長(zhǎng)過程中受到其他不利因素的影響，造成抵抗力降低可以發(fā)病。沙門菌血清型有2020種以上[4]，用弱毒活苗預(yù)防存在著一定的難度且預(yù)防效果不理想。建議有條件的研究室用本場(chǎng)分離菌株制成“自家菌”滅活疫苗，如鋁膠佐劑滅活疫苗、油佐劑滅活疫苗和蜂膠佐劑滅活疫苗等來預(yù)防豬傷寒沙門氏菌病。

（4）豬鼠傷寒沙門氏菌病是人獸共患病，可以引起人類食物中毒[5]，該菌的檢出具有流行病學(xué)的重要意義。

[1]陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué).北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2009

[2]李六金，李健強(qiáng).獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)指導(dǎo).西安：陜西科技出版社，1999

[3]陶天申等.原核生物系統(tǒng)學(xué).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，生物·醫(yī)藥出版分社，2007

[4]張耀相等.豬傷寒沙門氏菌的分離與鑒定.黑龍江畜牧獸醫(yī).2003

[5]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué).北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2008