甄紅霞 伊靈慧 王秀文 薄愛(ài)華 (河北省易縣縣醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 易縣 074200)

有報(bào)告認(rèn)為〔1〕金屬硫蛋白(MT)表達(dá)的下降將導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)氧化物的堆積，從而引起某些原癌基因的激活或抑癌基因的失活;然而MT異常增多時(shí)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及耐藥有明顯的相關(guān)性。然而MT與各類(lèi)癌瘤組織的生物學(xué)特性的關(guān)系，看法不一〔2，3〕。本文旨在闡明MT表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性的關(guān)系，并為臨床制定化學(xué)治療方案提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 病例資料 選擇2006年1月至2008年10月收集易縣兩個(gè)縣級(jí)醫(yī)院、河北北方學(xué)院附屬第一、三醫(yī)院和解放軍251醫(yī)院，宮頸癌鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本70例，膀胱移行細(xì)胞癌標(biāo)本74例，共計(jì)144例，其中宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者，年齡37～79歲，平均60歲，中位年齡54.5歲。膀胱移行細(xì)胞癌年齡35～74歲，平均57歲，中位年齡51.5歲。

1.2 免疫組織化學(xué)染色 Ⅰ抗為鼠抗人金屬硫蛋白單克隆抗體，由美國(guó)Santa Cruz公司生產(chǎn)。SP免疫組織化學(xué)試劑盒和DAB顯色劑，均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)公司。將新鮮癌標(biāo)本固定于10%中性甲醛內(nèi)，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度5μm，HE染色進(jìn)行病理診斷和病理組織分類(lèi)。免疫組化染色程序嚴(yán)格按照試劑盒規(guī)程進(jìn)行操作。首先切片脫蠟至水，微波修復(fù)抗原;Ⅰ抗孵育室溫過(guò)夜;Ⅱ、Ⅲ抗體孵育為37℃，各40 min。陰性對(duì)照以PBS代替Ⅰ抗;陽(yáng)性對(duì)照為公司提供的已知MT陽(yáng)性切片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用SPSS10.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

MT陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色，分布在癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)。陽(yáng)性病例的癌細(xì)胞胞質(zhì)呈棕黃色，陰性病例癌細(xì)胞胞質(zhì)不著色。MT在各種癌瘤中的陽(yáng)性率及其與分化程度、浸潤(rùn)深度的相關(guān)性見(jiàn)表1。

表1 MT在宮頸癌及膀胱癌中的陽(yáng)性表達(dá)〔n(%)〕

3 討論

據(jù)研究MT基因廣泛存在于人的實(shí)質(zhì)性臟器中，其編碼蛋白與金屬離子有很強(qiáng)的離子螯合性，尤其是對(duì)鋅(Zn)、銅(Cu)離子結(jié)合能力更強(qiáng)，因此MT與許多微量元素的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝有密切關(guān)系。據(jù)報(bào)告MT對(duì)自由基的清除能力是谷胱甘肽的38.5倍，尤其是鋅結(jié)合MT的能力最強(qiáng)〔3〕。另外MT也參與應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用〔4〕。由于致癌因子或某些刺激因子(如腫瘤壞死因子、干擾素)的作用，可以誘導(dǎo)(或激活)MT基因從而編碼，產(chǎn)生大量MT，因此有報(bào)告MT高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和分化有相關(guān)性，在消化管及膀胱正常組織則檢測(cè)不到MT表達(dá)，良性腫瘤中MT的表達(dá)很低，復(fù)發(fā)癌瘤中MT陽(yáng)性率明顯升高，因此，認(rèn)為MT過(guò)表達(dá)是患者預(yù)后不良的指標(biāo)之一〔5，6〕。

目前尤其引人關(guān)注的是關(guān)于MT參與腫瘤耐藥機(jī)制的問(wèn)題。有人將MT基因乳頭狀病毒轉(zhuǎn)染小鼠C127型細(xì)胞，使其MT含量為原來(lái)的10倍，這種細(xì)胞對(duì)卡鉑、苯丁酸氮芥、左旋苯丙氨酸氮芥等耐藥性增加4.4倍〔7〕;凡MT增高者，均顯示對(duì)順胺氯鉑和烷化劑耐藥;MT低表達(dá)的細(xì)胞，對(duì)上述抗癌藥物敏感。如果用氯化鎘(CdCl2)誘導(dǎo)小鼠胚胎性纖維細(xì)胞，使其無(wú)MT基因表達(dá)，此時(shí)該細(xì)胞對(duì)烷化類(lèi)抗癌藥敏感性提高。有實(shí)驗(yàn)表明，MT能隔離藥物與靶DNA的作用。當(dāng)MT與烷化劑等作用時(shí)，產(chǎn)生物理和結(jié)構(gòu)上的改變，進(jìn)而影響細(xì)胞內(nèi)金屬離子的分布狀況，從而啟動(dòng)多重化學(xué)反應(yīng)，削弱烷化劑的細(xì)胞毒性作用。有實(shí)驗(yàn)證明，MT含量增高的腫瘤對(duì)烷化劑(卡鉑、順鉑和亞硝基脲烷化劑等)和環(huán)磷酰胺產(chǎn)生耐藥，而對(duì)5-氟尿嘧啶和長(zhǎng)春新堿敏感，其機(jī)制有進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)顯示，宮頸癌和膀胱癌中均有高表達(dá)現(xiàn)象(即MT含量高)，尤其MT在BTC中的陽(yáng)性率很高(75.00%)，而且，癌組細(xì)胞分化低和浸潤(rùn)深者陽(yáng)性率更高，尤其是宮頸癌組，表現(xiàn)更為明顯，組間有高度差異。有報(bào)告〔8，9〕MT在消化管癌、前列腺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等，陽(yáng)性率50% ～75%，說(shuō)明MT在許多實(shí)體瘤中呈高表達(dá)現(xiàn)象，而且MT高表達(dá)是癌組織惡性度高和預(yù)后不良的指標(biāo)之一。

目前我國(guó)中小型醫(yī)院由于化驗(yàn)條件的限制，很少檢測(cè)MT在癌瘤中的表達(dá)狀況，而在消化管癌、宮頸癌或膀胱癌輔助化療中采用的復(fù)合方案中(如VPB或BOMP方案)都含有鉑類(lèi)藥物(卡鉑、草酸鉑或順鉑等)〔10〕。如果患者癌組織中MT呈高表達(dá)狀態(tài)，對(duì)此類(lèi)藥物敏感性下降;對(duì)MT陰性患者利用這些藥物則能夠增加敏感性。本實(shí)驗(yàn)提示，如果臨床病理能夠廣泛開(kāi)展耐藥基因蛋白的檢測(cè)(其中包括MT)，將對(duì)提高化療效果有很大幫助，尤其是對(duì)多藥耐藥基因蛋白的檢測(cè)，將對(duì)提高患者生存率和生活質(zhì)量有重要意義。

1 張曉麗，薄愛(ài)華.金屬硫蛋白與腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展〔J〕.河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2009;26(2):78-80.

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6 Alessendro S，Giacomo LS，Vincenxe A，et al.Metallothionein-1 and metallothionein-2 gene expression and localization in apoptotic cell in Zntreated LEC rat liver〔J〕.Histochem Cell Biol，2003;119(4):301-8.

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