許靜洪，龐秋霞，王愛紅

(延安大學醫(yī)學院生物化學與分子生物學教研室，陜西延安716000)

婦科惡性腫瘤主要以子宮及卵巢多見，嚴重危害著婦女的身心健康。宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤半數(shù)以上。核受體作為轉錄因子的重要成員，在調節(jié)生物體的生長發(fā)育和保持體內穩(wěn)態(tài)等諸多方面有十分重要的作用。AIB1基因(amplified in breast cancer 1，AIB1)屬于細胞核激素受體共激活劑P160家族的成員，是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種原癌基因，其表達的蛋白是一種核激素受體的轉錄共激活因子，該基因異常已被證實與乳腺癌、肝癌、宮頸癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤的細胞增殖、轉移和預后密切相關，但其在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中機制的研究很少。本實驗擬使用已經(jīng)研制成功的生物素化的抗AIB1單克隆抗體，檢測33例宮頸癌組織中AIB1的表達水平，探討AIB1蛋白在不同分期宮頸癌中的表達情況，將為宮頸癌的診斷及治療提供一種新的思路。

1 材料與方法

1.1 標本取材

宮頸組織標本均來自延安大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院2007～2009年婦科手術病人，臨床資料完整，組織由病理科石蠟包埋，由我校病理教研室制作切片。宮頸癌組織共33例，經(jīng)病理學檢查診斷，其中宮頸鱗癌23例，宮頸腺癌10例，患者術前均未接受放化療治療。按照WHO組織分化標準:高、中、低分化組織各8、11、14例;同時選取同期因其他原因行宮頸切除的正常宮頸組織15例做為對照。選用乳腺癌細胞T47D制作細胞爬片，作為AIB1表達的陽性對照。

1.2 免疫組化檢測

采用免疫組化法分別檢測實驗組和對照組AIB1蛋白的表達情況。所有組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟，酒精脫水，3%過氧化氫封閉內源性過氧化物酶，微波煮沸法抗原修復，3%BSA封閉非特異性位點后，實驗組滴加生物素化抗AIB1單克隆抗體［1］(工作濃度1:100)，對照組滴加PBS代替一抗，濕盒內37℃1 h，PBS沖洗后，滴加 AVIDIN －HRP，37℃1h，PBS沖洗后，DAB顯色，顯微鏡下觀察并適時終止，蘇木素復染后，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 結果判定

陽性結果為胞漿或胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒即判斷為陽性細胞，無顯色則為陰性結果。以陽性信號所占的面積比例分級，＜5%為(－)，5% ～25%為(+)，25% ～50%為(++)，＞50%為(+++)。

1.4 統(tǒng)計學分析

實驗結果采用SPSS11.0及秩和檢驗分析

2 結果

2.1 正常宮頸組織和宮頸癌中AIB1蛋白的表達情況

AIB1蛋白染色以胞漿為主，少數(shù)出現(xiàn)核染色，呈彌漫性黃褐色分布(見圖1)。15例正常宮頸組織中，2例AIB1蛋白表達陽性，陽性率13.3%，33例宮頸癌組織中，11例AIB1蛋白陽性表達，陽性率33.3%，兩者比較，差異無統(tǒng)計學意義。

2.2 不同分化程度宮頸癌中AIB1蛋白表達情況

AIB1蛋白表達水平與腫瘤分化程度似乎有相關性。隨著分化程度的降低，AIB1蛋白的表達有升高趨勢。不同分化程度宮頸癌組織中AIB1蛋白表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。8例高分化宮頸癌中，1例表達陽性，表達水平(+)，11例中分化宮頸癌中2例陽性表達，表達水平為1例(+)、1例(++)，14例低分化宮頸癌中，8例陽性表達，其中2例(+)、4例(++)、2例(+++)(結果見表1)。

表1 不同分化程度宮頸癌中AIB1的表達情況Tab.1 AIB1 expression in cervical cancer with different differentiations

圖1 宮頸癌組織中AIB1表達的免疫組織化學檢測(×200)Fig 1 .Detection of AIB1 expression in cervical cancer by Immunohistochemistry

3 討論

AIB1是一種重要的核激素受體的轉錄共激活因子，定位于人類染色體20q12，最早是在尋找乳腺癌中頻繁擴增的基因時發(fā)現(xiàn)的。已經(jīng)證實AIB1可以通過增強靶基因的轉錄和表達而促進腫瘤的形成。研究表明AIB1過表達可能是促發(fā)組織癌變的因素之一［2，3］，其異常表達與激素依賴性腫瘤的發(fā)生有關，還與此類病人內分泌治療的敏感性和預后相關。體外轉染實驗顯示AIB1能增強細胞核受體(nuclear receptor，NR)的活性，通過補充組蛋白乙酰轉移酶和組蛋白甲基轉移酶發(fā)揮重要作用［4］。組蛋白的乙?；虳NA的甲基化及染色質高級結構中其他成分的修飾可以改變染色質構型，導致基因轉錄調節(jié)發(fā)生變化，基因轉錄失調可導致細胞增殖失常，從而致癌。

Glaeser［5］等在研究宮頸癌細胞株Hela(ER和PR陽性)中AIB1的表達時發(fā)現(xiàn)3倍的AIB1基因擴增和2倍的AIB1mRNA過表達。Hirai［6］等研究宮頸癌AIB1的表達時發(fā)現(xiàn):16例宮頸腺癌中，7例存在高頻率AIB1基因擴增，其中4例伴淋巴結轉移，故認為AIB1基因的擴增與宮頸癌淋巴結轉移密切相關。近年來的研究發(fā)現(xiàn)AIB1的作用已不僅僅局限于核激素受體途徑，在非激素依賴的腫瘤:如胃癌［7］、胰腺癌［8］、結直腸癌［9］中也發(fā)現(xiàn)了 AIB1蛋白或 AIB1mRNA 的過表達，提示AIB1可能也通過非激素依賴途徑引起細胞生長、增殖乃至惡變。

本實驗應用免疫組織化學法測定的AIB1基因在宮頸癌中的表達率為33.3%，明顯高于文獻報道的乳腺癌中AIB1的陽性表達率10.0%［10］，可能與樣本量太少及實驗條件不同有關，也可能AIB1基因的過表達在宮頸癌中有更重要的意義。實驗結果經(jīng)統(tǒng)計學方法檢驗，正常宮頸組織中AIB1蛋白表達(陽性率13.3%)與宮頸癌組織中AIB1蛋白表達(陽性率33.3%)，兩者之間差異無統(tǒng)計學意義;而在不同分化級別的宮頸癌組織中，差異有統(tǒng)計學意義，隨著腫瘤分化程度的逐漸降低，AIB1蛋白的表達有升高趨勢。通過AIB1蛋白免疫組化結果分析，AIB1蛋白表達強度和陽性率在低分化宮頸癌組織中明顯高于高分化宮頸癌，在正常組織中為陰性表達或弱表達。由此可以認為，AIB1的表達與宮頸癌的惡性度有一定聯(lián)系，AIB1表達的異?？赡茉诎┳儼l(fā)生過程中發(fā)揮促進作用。由于本實驗樣本較少，AIB1的表達與宮頸癌惡性度的相關性及其在宮頸癌發(fā)病中的作用，有待于大樣本實驗進一步證實。

［1］龐秋霞，屈藝，魏大鵬，等，生物素化抗AIB1單克隆抗體的制備及應用研究［J］.四川大學學報(醫(yī)學版)，2009;40(4):727－729.

［2］Hudelist G，Czerwenka K，Kubista E，et al.Expression of sex steroid receptor and their cofactors in normal and malignant breast tissue:AIB1 is a carcinoma specific coactivator［J］.Breast Cancer Res Treat，2003，78(2):193 －204.

［3］Anzick SL，Kononen J，Walker RL，et al.AIB1，a steroid receptor coactivator amplified in breast and ovarian cancer［J］.Science，1997，277(5328):965 －968.

［4］Chen D，Ma H，Hong H，et al.Regulation of transcription by a protein methyltransferase.Science 1999，284(5423):2174 －2177.

［5］Glaeser M，F(xiàn)loetotto T，Hanstein B，etal.Gene amplification and Expression of the steroid receptor coactivator SRC3(AIB1)in sporadic breast and endometrial carcinomas［J］.Horm Metab Res，2001，33(3):121－126.

［6］Hirai－ Y，Utsugi K，Takeshima N，etal.Putative gene lociassociated with carcinogenesis and metastasis of endocervical Adenocarcinom as of uterus determined by conventional and array－based CGH.Am J Obstet Gynecol，2004，191(4):1173 －1182.

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［10］Anzick SL，Kononen J，Walker RL，et al.AIB1，a steroid receptor coactivator amplified in breast and ovarian cancer［J］.Science，1997，277:965 －968