陳蘇娟 陳蘇蓉

江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院腫瘤治療中心，腫瘤內(nèi)科三病區(qū)，江蘇 鹽城 224000

VEGF-A在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

陳蘇娟 陳蘇蓉

江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院腫瘤治療中心，腫瘤內(nèi)科三病區(qū)，江蘇 鹽城 224000

非小細(xì)胞肺癌； 血管內(nèi)皮生長因子-A； 免疫組化

肺癌是目前最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率逐年上升。全世界每年新發(fā)病例約120萬，80%為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)［1］。雖然隨著腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和臨床診斷方法的進(jìn)步，可予以積極手術(shù)、化療和放療，但NSCLC的復(fù)發(fā)率及病死率仍然很高。本研究運(yùn)用免疫組化方法檢測NSCLC組織中的血管內(nèi)皮生長因子-A(VEGF-A)，探討其在NSCLC的發(fā)生、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用，以期指導(dǎo)臨床治療。

1 資料和方法

1.1 臨床及病理資料

60例標(biāo)本均來自江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院(2004—2008年)NSCLC手術(shù)切除患者，其中男性45例，女性15例；年齡36～73歲，平均60歲。術(shù)后病理均證實為NSCLC，其中34例為肺腺癌，26例肺鱗癌。根據(jù)組織學(xué)腫瘤分級，高分化9例，中分化25例，低分化26例；根據(jù)臨床病理分期(TNM)，Ⅰ期為19例，Ⅱ期18例，Ⅲ期17例，Ⅳ期6例；根據(jù)淋巴轉(zhuǎn)移情況，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例。另各取15例性別和年齡構(gòu)成與上述60例無顯著差異的良性病變組織手術(shù)標(biāo)本作對照組。

1.2 主要試劑及試驗材料

鼠抗人VEGF-A多克隆抗體、S-P試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，抗原修復(fù)液為檸檬酸鈉緩沖液(pH=6.0)，由邁新生物技術(shù)開發(fā)公司提供配方自行配制。

1.3 VEGF-A的檢測

VEGF-A表達(dá)的檢測均采用免疫組化SP法對石蠟切片行染色。陽性對照為福州邁新公司提供的陽性標(biāo)本染色片，陰性對照用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗。試驗組和對照組分別是NSCLC和正常組織，試驗組按腫瘤的分化級別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡、性別和臨床分期等項目分別進(jìn)行研究。

1.4 陽性結(jié)果的判定方法

所有切片均采取雙盲法由兩位病理醫(yī)師觀察診斷。VEGF-A表達(dá)結(jié)果判斷：兩位醫(yī)師均認(rèn)為細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕褐色為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)。低倍鏡(×10)下各選取5個有代表性區(qū)域，在高倍鏡(×40)下利用目鏡網(wǎng)格測微尺分成10個視野計數(shù)1 000個細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比例，取陽性細(xì)胞平均百分率(labeling index，LI)。LI=陽性細(xì)胞數(shù)/1 000×100%。LI≤9%為陰性，＞9%～25%為(+)，＞25%～50%為(++)，≥50%為(+++)。采用雙盲半定量計算法計算LI。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用Stata7.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行分析處理，分級資料用行×列表記錄，計數(shù)資料運(yùn)用χ2檢驗、Spearman等級相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 VEGF-A在NSCLC中的表達(dá)情況

VEGF-A陽性腫瘤細(xì)胞主要表達(dá)產(chǎn)物呈黃色、棕褐色陽性顆粒彌漫分布在胞質(zhì)中，60例患者中VEGF-A陽性表達(dá)共49例，陽性率為81.7%，其中(+)16例(26.7%)，(++)16例(26.7%)，(+++)6例(10%)。

2.2 VEGF-A表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

NSCLC組織中VEGF-A的表達(dá)與年齡、性別、組織類型無明顯相關(guān)性(P＞0.05)；但在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P=0.001)。VEGF-A在NSCLC的臨床TMN分期中，陽性表達(dá)率分別為Ⅰ期68.4%，Ⅱ期77.7%，Ⅲ期94.1%，Ⅳ期100%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.138)，但在Ⅲ、Ⅳ期中的陽性表達(dá)率較Ⅰ、Ⅱ期高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在分化差的腫瘤中陽性表達(dá)率高于分化好的腫瘤(P＜0.01，表1)。

表 1 NSCLC患者中VEGF陽性表達(dá)與臨床病理特征間的關(guān)系Tab. 1 The correlation between the positive expression of VEGF-A and the clinicopathological features in NSCLC

3 討 論

腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肺癌患者死亡最主要的原因，肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移常見有兩條途徑，一條是經(jīng)血管轉(zhuǎn)移，另一條是經(jīng)淋巴管轉(zhuǎn)移。腫瘤經(jīng)何種途徑轉(zhuǎn)移除與腫瘤的組織學(xué)起源、生長部位、惡性程度及大小關(guān)系密切外，新近的研究顯示還與腫瘤內(nèi)部血管或淋巴管生成有關(guān)。有文獻(xiàn)報道，VEGF-A表達(dá)水平與腫瘤血管轉(zhuǎn)移之間關(guān)系密切［1］。1971年，F(xiàn)olkman等［2］就提出腫瘤生長依賴血管生成的概念，即腫瘤細(xì)胞通過血管供應(yīng)方式獲得營養(yǎng)，同時血管也為腫瘤轉(zhuǎn)移提供通道。因此，抑制腫瘤血管生成，可以抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移［3］。當(dāng)腫瘤直徑超過2 mm時，直接由微血管提供營養(yǎng)已不能滿足其生長需求，此時腫瘤生長依靠新生血管運(yùn)送營養(yǎng)物質(zhì)。新生血管不僅提供原發(fā)腫瘤生長所需血供，還能提供腫瘤血行轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移所需通路。許多研究結(jié)果證實VEGF-A在腫瘤生長中起重要作用［4］。

VEGF-A是一種相對分子質(zhì)量為34～45×103的同源二聚體，通過兩對煉間二硫鍵或共價鍵連接，與受體結(jié)合后促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖，增加微血管的通透性，對腫瘤血管生成起重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)：VEGF-A在NSCLC的臨床TMN分期中的陽性表達(dá)率分別為Ⅰ期68.4%，Ⅱ期77.7%，Ⅲ期94.1%，Ⅳ期100%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.138)。提示不同分期NSCLC中血管生成因子表達(dá)無差異性，可解釋臨床上一部分病理早期NSCLC患者的早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。另外，VEGF-A在NSCLC陽性表達(dá)，總體上臨床Ⅲ、Ⅳ期患者顯著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(P＜0.05)，與臨床上中晚期患者易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相符。

VEGF-A是最強(qiáng)、最特異的內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂劑。它不但是內(nèi)皮細(xì)胞存活的因素之一，而且是將循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞運(yùn)達(dá)新生血管的關(guān)鍵因素［5］。VEGF不僅能促進(jìn)原發(fā)腫瘤的生長和血管生成，還在新轉(zhuǎn)移灶早期形成過程中起重要作用［6］。Koukourakis等［7］報道晚期NSCLC局部VEGF及其受體升高提示預(yù)后不良。江豐收等［8］報道VEGF在NSCLC的發(fā)生、生長和轉(zhuǎn)移中起著極其重要的作用，有可能成為一種新的腫瘤標(biāo)記物。王曉彬等［9］報道VEGF檢測有助于預(yù)測早期NSCLC患者預(yù)后，為術(shù)后輔助治療提供了參考依據(jù)。本研究結(jié)果提示VEGF-A通路與癌癥發(fā)生發(fā)展及血行轉(zhuǎn)移浸潤相關(guān)。

肺癌發(fā)病率及死亡率逐年提高，尤其是NSCLC對化療的療效尚不能令人滿意。以腫瘤血管為靶點抑制血管形成進(jìn)而控制腫瘤生長，對腫瘤的治療及防止其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有重要意義。ECOG-E4599研究采用重組人抗血管內(nèi)皮生長因子單克隆抗體(Avastin)針對VEGF靶點的單克隆抗體與化療聯(lián)合的隨機(jī)臨床試驗，該研究自2004年7月開始，共878例晚期NSCLC患者入選臨床試驗［10］。結(jié)果顯示化療加Avastin組(434例)與標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)合化療組(444例)，中位生存期(TTP)分別為12.5個月和10.2個月，臨床緩解率分別為6.4個月和4.5個月，1年和2年生存率Avastin組為51.9%和22.1%，標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)合化療組為43.7%和16.9%。2007年ASCO年會上，Magengade等［11］報告了由120個中心參加的、1 050例大樣本Ⅲ期隨機(jī)雙盲對照臨床研究的結(jié)果。對照組GP方案化療347例患者有效率為20%，TTP時間4.7個月，試驗組Avastin7.5 mg/kg+GP方案，有效率為34%，TTP時間6.1個月；試驗組Avastin15 mg/kg+GP方案，有效率30%，TTP時間為6.1個月。這些研究證明Avastin聯(lián)合化療在緩解率及TTP等方面均優(yōu)于單純化療，顯示了其在肺癌治療中的重要地位。

國內(nèi)自行研制的腫瘤血管生成抑制劑如恩度、參一膠囊等聯(lián)合化療進(jìn)行臨床試驗都取得了令人滿意的結(jié)果。如王金萬、孫燕等［12］負(fù)責(zé)的化療聯(lián)合恩度Ⅲ期臨床研究(NVB+DDP與NVB+DDP+恩度)，共有493例NSCLC患者入組，結(jié)果治療組緩解率為35.4%，對照組為19.5%(P＜0.001)；治療組TTP為6.3個月，對照組為3.6個月；治療組1年生存率為62.7%，對照組為31.5%(P＜0.001)。這些臨床試驗進(jìn)一步說明了NSCLC轉(zhuǎn)移及預(yù)后與血管生成相關(guān)。

總之，VEGF-A在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用。本研究通過檢測其在NSCLC組織中的表達(dá)，與腫瘤病理學(xué)特征的相關(guān)性，提示其可作為腫瘤生物學(xué)行為的評估及預(yù)后的指標(biāo)，并為多靶點靶向治療NSCLC提供了依據(jù)。

［1］王豐, 韋芳, 陳霞芳, 等. 血管及淋巴管生成相關(guān)基因表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移率和轉(zhuǎn)移途徑的比較分析［J］. 腫瘤, 2008,28(8): 635-639.

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10.3969/j.issn.1007-3969.2011.02.015

R734.2

A

1007-3639(2011)02-0153-03

陳蘇娟 E-mail:chensujuan77@163.com

2010-09-17

2010-11-23）