孫忠學(xué) 董春梅

（黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司，黑龍江 哈爾濱 150078）

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品

Agilent 1100液相色譜儀（四元泵，二極管陣列檢測器）；電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特有限公司)；R2003KE旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申勝科技有限公司）；電子天平 (Mettler instrument Corp)；101-2型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海市試驗(yàn)儀器廠）；GT-350W型超聲波提取器(濟(jì)寧科特超聲電子有限公司）；硅膠G薄層板（中國海洋化工廠生產(chǎn)）

1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

1.1.2 藥品與試劑

柴胡皂苷a對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110777-200406）；黃芩苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所 715-200111）；黃芩素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所111595-200604）；漢黃芩素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所 1514-200202）；中性氧化鋁、三氯甲烷、正丁醇、氨試液、甲醇、乙醚、硫酸、乙醇均為分析純、水為蒸餾水。

1.2 含量測定

1.2.1 黃芩苷的含量測定

1.2.1.1 色譜條件

色譜柱：YMC-Pack ODS-A(150×4.6mm ID)；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸（47:53:0.2）；檢測波長：280nm

1.2.1.2 供試品溶液制備

稱取凍干粉末0.05g，加50%的甲醇于10ml容量瓶中，超聲30min，補(bǔ)充50%的甲醇于刻度，用0.45μl的濾膜過濾，作為供試品溶液。

1.2.1.3 對(duì)照品溶液制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品0.3mg加50ml甲醇溶解制成每1ml含0.06mg的溶液，即得。

1.2.1.4 空白試驗(yàn)

按處方比例及制劑工藝制備缺黃芩陰性對(duì)照藥，按“1.4.1.2供試品溶液制備”項(xiàng)下方法制備缺黃芩陰性對(duì)照品溶液。

精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液和缺黃芩陰性對(duì)照品溶液各10μl，進(jìn)樣測定，結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相同的保留時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)相對(duì)應(yīng)的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液則在相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間未見相對(duì)應(yīng)的吸收峰。有關(guān)對(duì)照品、供試品和缺黃芩陰性對(duì)照品的色譜圖和光譜圖見附圖1-5(a～c)。

1.2.1.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取本品，按上述制備方法制備供試品溶液，分別放置 0、2、4、6、8 小時(shí)，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定其含量，結(jié)果黃芩苷的平均峰面積為 2488.56，RSD為0.22%。結(jié)果表明，供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定，可滿足測定要求。

1.2.1.6 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定黃芩苷的峰面積，結(jié)果黃芩苷的平均峰面積為1888.2，RSD為0.58%，說明儀器精密度較好。

1.2.2 芍藥苷的含量測定

1.2.2.1 色譜條件

色譜柱：YMC-Pack ODS-A(150×4.6mm ID)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14:86）；檢測波長為230nm

1.2.2.2 供試品溶液制備

稱取凍干粉末0.1g，加5稀乙醇于10ml容量瓶中，超聲30min，補(bǔ)充稀乙醇于刻度，用0.45μl的濾膜濾過，作為供試品溶液。

1.2.2.3 對(duì)照品溶液制備

精密稱取芍藥苷對(duì)照品0.7mg加10ml甲醇溶解制成每1ml含0.07mg的溶液即得。

1.2.2.4 空白實(shí)驗(yàn)

陰性對(duì)照品溶液的制備：按處方比例及制劑工藝制備缺白芍的陰性對(duì)照藥，按“1.2.2.2供試品溶液制備”項(xiàng)下方法制備缺白芍陰性對(duì)照品溶液。

精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液和缺白芍陰性對(duì)照品溶液各10μl，進(jìn)樣測定，結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相同的保留時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)相對(duì)應(yīng)的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液則在相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間未見相對(duì)應(yīng)的吸收峰。有關(guān)對(duì)照品、供試品和缺白芍陰性對(duì)照品的色譜圖和光譜圖見附圖1-11（a～c）。

1.2.2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液（濃度為0.50mg/ml）0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分別置于10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，再分別精密吸取10μl，分別注入液相色譜儀，按上述條件測定白芍的吸收峰峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行回歸處理，結(jié)果黃芩苷在0.02～0.10mg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積積分值之間線性關(guān)系良好，回歸方程為 Y=12.269X-14.107，r=0.9999（n=6）。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1進(jìn)樣量-峰面積積分值見表 1。

表1 芍藥苷線性關(guān)系考察結(jié)果表

圖1 芍藥苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取本品，按上述制備方法制備供試品溶液，分別放置 0、2、4、6、8 小時(shí)，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定其含量，結(jié)果芍藥苷的平均峰面積為698.52，RSD為0.22%。結(jié)果表明，供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定，可滿足測定要求。穩(wěn)定性結(jié)果見表2

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2.2.7 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定芍藥苷的峰面積，結(jié)果平均峰面積為922.18，RSD為0.70%，說明精密度較好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見表3。

表3 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2.2.8 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品，制備 6份供試品溶液，按擬定的含量測定方法，重復(fù)平行測定，黃芩苷的平均含量為0.8256mg/g，RSD為0.18%。重復(fù)性結(jié)果見表3。

表3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2.2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量配制好的樣品溶液（58.5μg/ml）28ml，精密稱定，置 50ml容量瓶中，加入精密稱定好的黃芩苷對(duì)照品1.55mg，補(bǔ)足甲醇至刻度，稱定重量，以下按供試品溶液制備方法操作，制成加樣供試品溶液。吸取加樣供試品溶液 10μl，注入液相色譜儀，按上述方法測定加樣供試品溶液中黃芩苷的含量，分別計(jì)算回收率。

表4 柴胡桂枝固體湯劑中的黃芩苷的含量

1.2.2.10 芍藥苷的含量測定

按本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)“含量測定”項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液，測定三批樣品中黃芩苷的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見表4。結(jié)果表明芍藥苷的含量基本穩(wěn)定。

小結(jié)

本章對(duì)進(jìn)行了柴胡桂枝固體湯劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。采用薄層色譜對(duì)人參、柴胡、甘草及黃芩進(jìn)行了鑒別，并對(duì)凍干粉的水分測定、裝量差異、微生物限度的檢查，同時(shí)采用高效液相法測定了制劑中的黃芩苷及芍藥苷的含量。方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明，該測定方法準(zhǔn)確可靠，方便易行，可以作為柴胡桂枝固體湯劑的質(zhì)量控制方法。