何 昱， 鐘 濤， 陳 龍， 何曉瑋

(1.浙江中醫(yī)藥大學，浙江杭州 310053;2.浙江大學醫(yī)學院附屬邵逸夫醫(yī)院，浙江杭州 310016;3.浙江東邦藥業(yè)有限公司，浙江臨海 317016)

中藥材超微粉碎曾經(jīng)一度是近年來研究的熱點，它從改變藥物的物理狀態(tài)著手，嘗試提高生物機體對藥物的吸收，增加藥物的生理效應(yīng)［1-3］。中藥經(jīng)超微粉碎后所得到的顆粒，粒徑可達到1～75 μm，表現(xiàn)出一般顆粒所不具有的一些特殊理化性質(zhì):如良好的溶解性、分散性、吸附性、化學反應(yīng)活性等，這使得超微粉碎在中藥制藥行業(yè)顯示出特有的優(yōu)勢［4］。

但是，隨著藥材粒度的減小，所含成分的溶解度和溶解速率并不會無限制的增大。在一定條件下，隨著比表面積的增大，表面能的因素不僅會使吸附作用加強，有效成分擴散速度受到影響;而且其表面更易吸附空氣和帶有電荷，影響有效成分的溶出［5］。

因此，對于中藥的超微粉化不能一概而論，應(yīng)根據(jù)特定中藥的性質(zhì)，以有效成分的溶出速度和溶出量最佳、不良反應(yīng)最小為前提，來決定適宜的藥材粉碎粒度。

本實驗選擇在臨床上廣泛使用的中藥材甘草，通過測定不同粒度甘草超微粉中甘草酸的溶出量來比較它們的溶出情況。溶出的介質(zhì)除了水之外，還以人工胃液和人工腸液來模擬體內(nèi)環(huán)境，為甘草藥材的粉碎提供更有說服力的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀;DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌機(河南鞏義市英峪予華儀器廠);萬分之一電子天平［梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司］;PHS-3C(001級)PH酸度計(上海精科);AnkeTGL-16B離心機(上海安亭科學儀器廠)。

1.2 對照品 甘草酸單銨鹽(中國藥品生物制品檢定所，批號110731-200614)。

1.3 試劑 色譜級甲醇(天津市四友精密化學品有限公司)，胃蛋白酶(上海伯奧生物科技有限公司)，胰蛋白酶(國藥集團化學試劑有限公司)，冰醋酸(杭州化學試劑有限公司)，水為實驗室自行制備的雙蒸水。

1.4 甘草樣品 均由上海中醫(yī)藥大學洪筱坤教授提供，包括寧夏甘草中粉，以及經(jīng)YSNM-1500-0005(臺式小型超細加工設(shè)備)處理所得到的1次處理粒徑(18.90±19.0)μm，用Y表示、5次處理粒徑(11.2±9.75)μm，用W表示、10次處理粒徑(9.51±7.98)μm，用S表示的寧夏甘草超微粉。

2 方法與結(jié)果

2.1 甘草酸測定的色譜條件 色譜柱:Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，流動相:甲醇-0.2 mol/L 醋酸銨溶液-冰醋酸(66 ∶33 ∶1)，流速:1.0 mL/min，檢測波長:250 nm，柱溫:25 ℃，進樣量 :10 μL［6］。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)干燥的甘草酸單銨鹽標準品5.3 mg，置于25 mL量瓶中，加入流動相溶解后定容，即得濃度為0.212 mg/mL的對照品溶液。

2.2.2 人工胃液、人工腸液的制備 按中國藥典2005版二部附錄項下進行。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取寧夏甘草中粉約20 g以及經(jīng)1次處理(Y)、5次處理(W)、10次處理(S)的超微粉樣品各約0.15 g，放入50 mL燒杯中，分別加雙蒸水、人工胃液和人工腸液25 mL，置于恒溫磁力攪拌器中(37±1)℃攪拌浸出，在 15、30、60、120、240 min 后取樣，所取樣品液5 000 r/min離心10 min，取上清液過0.45 μm微孔濾膜，即得各供試品溶液［7］。

2.3 各樣品液中甘草酸的測定 用2.1項下的色譜條件分析對照品溶液、空白人工胃液、空白人工腸液以及以上各時間點所取的供試品溶液，空白人工胃液和空白人工腸液在甘草酸色譜峰對應(yīng)的保留時間處無吸收，不干擾甘草酸的測定;且各樣品液中甘草酸色譜峰的分離度都在2.0以上，因而可以用此條件進行含量測定。S樣品在不同介質(zhì)中第一次取樣(15 min)分析所得的色譜圖見圖1、2。

2.4 用外標法計算各供試品溶液中甘草酸的含量，具體測定結(jié)果詳見表1～3。

圖1 對照品溶液色譜圖

圖2 S樣品在不同介質(zhì)中第一次取樣(15 min)分析時的色譜圖

表1 不同粒度甘草粉末在雙蒸水中的溶出量(n=2)

表2 不同粒度甘草粉末在人工腸液中的溶出量

表3 不同粒度甘草粉末在人工胃液中的溶出量

3 討論

3.1 中國藥典2005版收載的甘草藥材中甘草酸的含量測定是取甘草中粉加流動相超聲提取后進樣［6］。因本試驗中人工胃液、人工腸液均以水為介質(zhì)，所以分別用水和流動相對甘草中粉樣品進行了超聲提取，對比兩種溶劑對甘草酸的提取效果:結(jié)果用流動相提取的甘草酸含量為0.049 mg/mL/g，水提取的甘草酸含量為0.041 mg/mL/g，差別不明顯。

3.2 從表1、2、3可以看出:各粒度超微粉樣品的甘草酸溶出量均遠遠大于中粉，說明超微粉碎可有效增加藥材中成分的溶出。此外，3種介質(zhì)中，人工胃液中甘草酸的溶出量最低，而在水和人工腸液中溶出量較高，這與甘草酸結(jié)構(gòu)中具有羧基呈酸性，在酸性環(huán)境中溶出較小的特性是一致的。

3.3 由表1、2可見:雙蒸水和人工腸液中，甘草酸的溶出量以5次處理的W樣品最小，低于經(jīng)1次處理的Y樣品和經(jīng)10次處理的S樣品，提示可能此粒徑大小的藥材顆粒吸附性最強，導(dǎo)致甘草酸溶出量的降低，因此甘草在超微粉碎時應(yīng)避免相應(yīng)的(11.2±9.75)μm粒度范圍。同時這一實驗結(jié)果也再次證實了中藥材超微粉碎應(yīng)當選擇其適宜的粒徑。

3.4 本實驗僅對甘草超微粉中甘草酸單一成分的溶出情況進行了研究，而對于中藥材而言，藥效的發(fā)揮與其含有的眾多成分相關(guān)，今后可結(jié)合全面的成分分析如指紋圖譜和藥效學實驗對甘草的超微粉碎進行更深層次的探討。

致謝:實驗儀器和試劑均由浙江中醫(yī)藥大學東洲科技園提供。

［1］樓丹飛.中藥超微粉碎研究進展［J］.河南中醫(yī)，2008，28(8):102-105.

［2］關(guān)天增，雷敬衛(wèi)，鄭 艷.淺談超微粉碎［J］.中國中藥雜志，2002，27(7):499-500.

［3］黃一平，鞠建明，高美華，等.傳統(tǒng)中成藥超微粉碎前后粉末質(zhì)量比較研究［J］.中成藥，2007，29(1):135-137.

［4］陳開文，譚 涌.中藥超微粉碎應(yīng)用研究概況［J］.中國藥業(yè)，2005，15(2):75-76.

［5］李曉明，王躍生，閆 寒，等.超微粉碎決明子對其大黃酚溶出量的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2001，7(6):6-8.

［6］中國藥典一部［S］.2005:59.

［7］遲文俊，吳愛學.五苓散在人工胃液中微量元素溶出率［J］.中國中藥雜志，1990，15(11):31-33.