郎軼詠， 王 強(qiáng)， 梅麗娜， 朱曉紅， 姜同英

(1.中國(guó)人民解放軍第202醫(yī)院，遼寧沈陽 110003;2.沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧沈陽 110016)

玫瑰膠囊為中國(guó)人民解放軍第二〇二醫(yī)院院內(nèi)制劑，由當(dāng)歸、夏枯草、杜仲、天麻、紅花幾味中藥經(jīng)過提取加工制成，具有化瘀止痙、養(yǎng)血安神的功效，主要用于各種昡暈，心腦缺血性疾病以及高血壓的治療。玫瑰膠囊成分復(fù)雜，吸濕性較強(qiáng)，原標(biāo)準(zhǔn)采用薄層色譜法分別對(duì)夏枯草、杜仲進(jìn)行鑒別，操作涉及提取、萃取、過柱分離、濃縮、干燥等過程，程序復(fù)雜且重現(xiàn)性差。為簡(jiǎn)化鑒別方法，以含微乳液展開劑作為流動(dòng)相，聚酰胺薄膜為固定相，研究了玫瑰膠囊的微乳薄層色譜行為，對(duì)玫瑰膠囊的有效成分(夏枯草、杜仲、紅花)進(jìn)行了分離和鑒定，取得了較好的效果［1-3］。為提高藥物的穩(wěn)定性，本實(shí)驗(yàn)以玫瑰膠囊內(nèi)容物吸濕時(shí)間曲線、吸濕等溫線、平衡吸濕量和臨界相對(duì)濕度作為判斷指標(biāo)，采用二項(xiàng)式回歸的方法［4］，直觀表征了內(nèi)容物吸濕特性，歸納了內(nèi)容物吸濕性的規(guī)律，為尋找適宜的防潮方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及理論支持。

1 儀器與試劑

2F-1三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司);FA2004電子分析天平(上海天平儀器廠);電熱恒溫培養(yǎng)干燥用箱(廈門醫(yī)療電子儀器廠);玫瑰膠囊(中國(guó)人民解放軍第202醫(yī)院制劑室，批號(hào):20081103);對(duì)照藥材:當(dāng)歸、夏枯草、杜仲、天麻、紅花由202制劑室提供;十二烷基硫酸鈉(SDS)(湖南爾康制藥有限公司);司盤(SP)80(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑限公司);其它試劑均為分析純;

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 溶液的制備

2.1.1 微乳層析液制備［2-3］取SDS，精密稱定，溶解于適量水中，分別加入表面活性劑、油相，加水至足量，磁力恒溫?cái)嚢杵鲾嚢杌靹?，放?4 h即得澄清透明的微乳液。將各種改性劑加至組成不同的微乳液中，即得組成不同的微乳層析液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取玫瑰膠囊內(nèi)容物3 g，加甲醇10 mL，超聲振蕩30 min，備用。

2.1.3 對(duì)照藥材溶液的制備 分別取夏枯草、杜仲、紅花對(duì)照藥材5 g，加甲醇10 mL，超聲提取30 min過濾，濾液為對(duì)照藥材溶液。

2.1.4 陰性對(duì)照溶液的配制 按處方比例，分別制備夏枯草、杜仲、紅花四味藥材的陰性對(duì)照溶液。

2.2 薄層色譜 分別吸取夏枯草、杜仲、紅花的對(duì)照藥材溶液、陰性對(duì)照溶液及玫瑰膠囊供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各2 μL，點(diǎn)于聚酰胺薄膜，直徑為1～2 mm。以微乳層析液為展開劑，室溫下飽和30 min，上行法展開，展程約6 cm，取出晾干后，立即置紫外光(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上夏枯草顯藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，杜仲顯藍(lán)色熒光斑點(diǎn);紅花顯綠色熒光斑點(diǎn)。

2.3 吸濕性實(shí)驗(yàn) 精密稱取玫瑰膠囊內(nèi)容物1.0 g，平攤于恒重的稱量瓶中。開蓋置于干燥器中7 d使其脫濕平衡。取脫濕后的內(nèi)容物顆粒，精密稱重后置于不同濕度恒溫干燥器(25℃)，每隔一定時(shí)間精密稱重至吸濕重量不再增加，計(jì)算吸濕增重百分率及繪制吸濕曲線。

吸濕增重百分率%=(吸濕后樣品重量－吸濕前樣品重量)/吸濕前樣品重量×100%

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 微乳展開體系的選擇

3.1.1 SDS對(duì)展開效果的影響 分別取不同量的SDS與15.8 g正丁醇、2.5 g正辛烷及77.0 g重蒸餾水配制系列微乳液，以微乳液-甲酸(9∶1)為展開劑，對(duì)夏枯草、杜仲、紅花的對(duì)照藥材溶液薄層展開，SDS量對(duì)對(duì)照藥材主斑點(diǎn)Rf影響情況見圖1。夏枯草對(duì)照藥材溶液的Rf值隨十二烷基硫酸鈉(SDS)量的增加變化不明顯;紅花對(duì)照藥材溶液的Rf值與杜仲對(duì)照藥材溶液的Rf值隨十二烷基硫酸鈉(SDS)量的增加先降低后增大(見圖1)。

在W/O型微乳中，表面活性劑極性端位于其內(nèi)部，隨著SDS量的增加，表面活性劑膠團(tuán)量增加，對(duì)極性物質(zhì)(紅花、杜仲)的吸附性增加，Rf值隨SDS量的增加而減小;在O/W型微乳中則相反。當(dāng)SDS量為6.7 g時(shí)微乳由W/O型向O/W型轉(zhuǎn)變［5］，表現(xiàn)為極性物質(zhì)(紅花、杜仲)的增溶作用隨表面活性劑(SDS)量的逐漸增加而增強(qiáng)，其Rf值則隨表面活性劑(SDS)量的逐漸增加而增加;夏枯草Rf值較小，則變化不大。當(dāng)SDS量為4.7 g，相鄰組分間的分離度較大，分理效果理想。

圖1 玫瑰膠囊主要成分的Rf值與SDS量的關(guān)系圖Fig.1 The relationship between Rfand the amount of SDS

3.1.2 油相對(duì)展開效果的影響 以微乳液(SDS-正丁醇-油相-水 =4.7 ∶15.8 ∶2.5 ∶77 g/g)-甲酸(9∶1)為展開劑，對(duì)夏枯草、杜仲、紅花的對(duì)照藥材溶液薄層展開，結(jié)果見圖2。

圖2 玫瑰膠囊各主要成分Rf值與油相種類的關(guān)系圖Fig.2 The relationship between Rfand the oil phase

微乳中所使用的油相應(yīng)與界面膜上表面活性劑分子之間保持滲透和聯(lián)系，并易于與表面活性劑形成界面膜，這就意味著油相分子的大小對(duì)微乳的形成較為重要。一定范圍內(nèi)，油相分子體積越小，對(duì)藥物的溶解力越強(qiáng)，油相分子體積過大則不能形成微乳，所以一般選擇短鏈油相。正己烷、正庚烷、正辛烷為油相的微乳中，選擇正辛烷作為油相，相鄰組分間的分離度較大，分理效果理想，固選其作為油相。

3.1.3 改良劑對(duì)層析效果的影響 在保證(SDS-正丁醇-正辛烷-水 =4.7∶15.8 ∶2.5 ∶77 g/g)微乳液組分不變的情況下，考察了多種改性劑，如甲酸，乙酸，乙酸乙酯，氯仿，氨水等對(duì)夏枯草、杜仲、紅花的對(duì)照藥材分離情況的影響。結(jié)果表明乙酸乙酯，氯仿加入后不能形成微乳。選擇甲酸做為改良劑相鄰組分間的分離度較大，分離效果理想;乙酸的加入不能改善層析結(jié)果中的拖尾現(xiàn)象。固選擇甲酸作為改良劑。甲酸加入量對(duì)各組分的Rf值的影響結(jié)果見圖3。甲酸的含量大于10%時(shí)，相鄰組分間的分離度較大，分離效果理想，固選其微乳與甲酸配比為9∶2。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)丙酮的加入可明顯縮短展開時(shí)間且不影響展開效果，因此，選擇甲酸、丙酮同時(shí)作為改性劑，以獲得最佳層析效果。丙酮加入量對(duì)展開效果的影響見圖4。微乳-甲酸-丙酮比例達(dá)到9∶2∶1時(shí)，相鄰組分間的分離度較大，分離效果理想。

圖3 甲酸量對(duì)各主要成分Rf值的影響Fig.3 The effect of formic acid on the Rf

圖4 丙酮對(duì)玫瑰膠囊主要成分Rf值的影響Fig.4 The effect of acetone on the Rf

3.2 層析結(jié)果 以含水量77%微乳液-乙酸-丙酮(9∶2∶1)為展開系統(tǒng)，玫瑰膠囊的薄層色譜見圖5。玫瑰膠囊色譜中，供試品色譜所呈對(duì)照藥材溶液主斑點(diǎn)的位置和熒光顏色與對(duì)照品相同，各陰性對(duì)照液無此斑點(diǎn)。玫瑰膠囊中夏枯草、杜仲及紅花3種主要成分在所選擇的展開系統(tǒng)中分離效果較佳，此展開系統(tǒng)可用于玫瑰膠囊中夏枯草、杜仲及紅花3種主要成分。

圖5 玫瑰膠囊主要成分鑒別微乳薄層色譜圖Fig.5 TCL chromatograms of Meigui Capsule

3.3 吸濕時(shí)間曲線的數(shù)據(jù)化處理及結(jié)果 對(duì)玫瑰膠囊內(nèi)容物吸濕-時(shí)間曲線進(jìn)行一元二次方程擬和得方程:

式中w為吸濕量，t為時(shí)間，a，b，c分別為常數(shù)。對(duì)方程(1)進(jìn)行一階求導(dǎo)得到吸濕速率(r)方程:

由方程(2)可知當(dāng)t=0時(shí)，吸濕的初始速度為r0=b;當(dāng)達(dá)吸濕平衡時(shí)，吸濕速度為0，則達(dá)到吸濕平衡時(shí)間為t′=－b/2a，樣品的吸濕平衡時(shí)量為w′=at′2+bt′+c［6］。數(shù)據(jù)分析結(jié)果見表 1。玫瑰膠囊內(nèi)容物初始吸濕速率隨環(huán)境相對(duì)濕度的增加而加快，相對(duì)濕度達(dá)到62%，初始吸濕速率增大明顯，提示我們生產(chǎn)過程中相對(duì)濕度應(yīng)控制在60%以下。玫瑰膠囊內(nèi)容物吸濕平衡時(shí)間與吸濕增重百分率計(jì)算值與實(shí)測(cè)值相一致。

表1各濕度吸濕數(shù)據(jù)結(jié)果Tab.1 The data of moisture absorption

3.3 相對(duì)濕度的測(cè)定 以平衡吸濕百分率對(duì)相對(duì)濕度作圖，分別對(duì)曲線兩端作切線，切線交點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)即為玫瑰膠囊內(nèi)容物的臨界相對(duì)濕度為65%(見圖6)，與計(jì)算值相符。

圖6 25℃條件下吸濕平衡曲線Fig.6 Critical relative humidity curve

4 討論

中成藥的成分非常復(fù)雜，有效成分的鑒定比較困難。本課題研究了微乳薄層色譜法對(duì)玫瑰膠囊有效成分的分離鑒定。以微乳液作為展開劑與常用展開劑相比，被測(cè)組分與其它組分的分離度顯著提高，樣品中檢出的斑點(diǎn)明顯增多。微乳薄層色譜的原理與膠束色譜理論大致相同［7］，當(dāng)以微乳為流動(dòng)相時(shí)，溶質(zhì)的分配可能是在固定相、微乳液的水連續(xù)相及油核和界面膜數(shù)相之間進(jìn)行。由于微乳液的富集增溶，降低界面張力作用，極性大的分子分配于微乳水連續(xù)相中，極性小的分子分配于微乳油核或穿插排列于表面活性劑與助表面活性劑組成的膜柵欄中。并且由于分配、吸附、靜電、疏水、立體等效應(yīng)，使待測(cè)藥品中各組分在微乳液中展開是遷移速度不同，使其具有獨(dú)特的選擇性，可同時(shí)分離親水物質(zhì)和疏水物質(zhì)，對(duì)帶電成分和非帶電成分亦有較好的分離選擇，適用于分離結(jié)構(gòu)和性質(zhì)差別細(xì)微的復(fù)雜組分的物質(zhì)，且更有利于提高色譜效率。本研究同時(shí)對(duì)同一藥物中幾種有效成分在微乳中的色譜行為進(jìn)行探討［8-10］。實(shí)驗(yàn)表明，性質(zhì)差別較大的各類組分和性質(zhì)結(jié)構(gòu)差別細(xì)微的同系物可同時(shí)進(jìn)行分離鑒定，克服了常用層析方法一次只能鑒定某單一成分的缺憾，為中成藥有效成分的分離鑒定提供了一種高效簡(jiǎn)捷的新方法。

玫瑰膠囊為鋁塑包裝，具有一定的防潮性能，基本能滿足產(chǎn)品的需求，但生產(chǎn)環(huán)節(jié)中涉及到整粒結(jié)束到成品包裝前半成品儲(chǔ)存條件，膠囊內(nèi)容物吸濕曲線可以直觀地比較不同提取物吸濕程度的強(qiáng)弱，而對(duì)吸濕過程的數(shù)據(jù)處理可以為比較不同吸濕性提取物提供豐富的理論數(shù)據(jù)。新的吸濕特性參數(shù)可以比較準(zhǔn)確的直接表征中藥提取物的吸濕能力，對(duì)指導(dǎo)優(yōu)化生產(chǎn)過程中防潮工藝的選擇，優(yōu)選產(chǎn)品包裝材料，優(yōu)化半成品儲(chǔ)存條件有重要的意義。

［1］李干佐，郭 榮.微乳液理論及其應(yīng)用［M］.北京:石油工業(yè)出版，1995:159.

［2］曾常青，譚泉基.止咳枇杷顆粒的微乳薄層鑒別［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，22(3):261-262.

［3］康 純，聞璃毓，丁仲伯.微乳薄層色譜用于黃酮類藥物分離鑒定的研究［J］.藥物分析雜志，2000，20(2):121.

［4］丁志平，喬延江.不同粒徑黃連粉體的吸濕性實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2004，10(3):5-7.

［5］康 純，聞利毓，丁仲伯，等.微乳薄層色譜用于黃連類藥物分離鑒定的研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2000，25(5):262-263.

［6］杜若飛，馮 怡，劉 怡.中藥提取物吸濕特性的數(shù)據(jù)分析與特征［J］.中成藥，2008，30(12):1767-1771.

［7］戈早川，林輝概，李志良.膠束色譜與包合色譜的概況與進(jìn)展［J］.分析化學(xué)，1991，19(9):1092.

［8］鐘精芬.表面活性劑在藥劑學(xué)中的應(yīng)用［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:543.

［9］崔正剛.微乳化技術(shù)與應(yīng)用［M］.北京:中國(guó)輕工業(yè)出版社，1999:15-16.

［10］張正全，陸 彬.微乳給藥系統(tǒng)研究概況［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2001，32(3):139.