周衛(wèi)東，吳 繼，王菊勇，王立芳，蔡霄月，徐振曄※

（1．上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院腫瘤二科，上海 200032;2．上海中醫(yī)藥大學中醫(yī)腫瘤研究所，上海 200032）

現(xiàn)代醫(yī)學早就注意到，腫瘤的生成和發(fā)展與人體免疫功能低下、失調有著十分重要的關系。中藥增強機體免疫功能是其抗腫瘤的主要機制之一［1］?，F(xiàn)代免疫學認為，人體的免疫系統(tǒng)具有免疫監(jiān)視功能，能監(jiān)督機體內環(huán)境出現(xiàn)的突變細胞及早期腫瘤，并予以清除。因此，腫瘤與機體免疫系統(tǒng)的狀態(tài)密切相關［2］。隨著“治未病，既病防變”思想的不斷深入，膏方在腫瘤治療中的價值也日益受到關注。應用中醫(yī)膏方治療腫瘤，是有針對性地將名貴的補益中藥與具有抗瘤作用的中藥復方相結合，通過提高機體的免疫功能扶正抗癌，起到防復發(fā)轉移的作用。肺巖寧方為龍華醫(yī)院腫瘤科徐振曄教授的經驗方，主要由生黃芪、白術、蜂房、干蟾皮、黃精、山茱萸、淫羊藿等組成。一方面，研究顯示肺巖寧具有明確的抗腫瘤作用［3］;另一方面，研究顯示肺巖寧對腫瘤患者有明確的免疫調節(jié)功能［4，5］。為進一步探討其機制，該實驗通過建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型，觀察以肺巖寧方為基礎的膏方制劑對荷瘤鼠抗腫瘤活性及免疫功能的影響。

1 材料與方法

1．1 實驗動物與瘤株 C57BL/6小鼠，SPF級，雄性，6～8周齡，體質量18～22 g，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，合格證:SCXK（滬）2007-0005。Lewis肺癌種鼠由上海醫(yī)學工程院藥理研究室惠贈。

1．2 藥物和試劑 膏方由肺巖寧方加輔料方（鱉甲膠、龜板膠、鹿角膠等組成）按一定比例組成復方，水煎，濃縮，制成膏劑，生藥濃度3 g/mL。輔料方水煎，濃縮，制成膏劑，生藥濃度2 g/mL。Bouin's液由飽和苦味酸+40%甲醛+冰醋酸配制而成。

1．3 方法

1．3．1 Lewis肺癌自發(fā)性肺轉移造模 取傳代14 d左右的C57BL小鼠，無菌操作，從腋部皮下剝取腫瘤組織，剔除纖維包膜和壞死部分，置組織研磨器中剪碎，加4℃生理鹽水輕輕研磨、過濾，制成瘤細胞懸液，調整細胞濃度為1×107/mL。取上述細胞懸液0．2 mL，含細胞數(shù)2×106個，接種于 C57BL小鼠右腋部皮下。

1．3．2 分組和給藥 造模后隨機分為3組，每組11只，分別予膏方、輔料方、生理鹽水連續(xù)灌胃10 d。

1．3．3 抑瘤率檢測 末次給藥后24 h，脫頸椎處死小鼠，剝離瘤塊，電子天平稱重，計算抑瘤率。腫瘤生長抑制率=（1－實驗組平均瘤重/模型組平均瘤重）×100%。

1．3．4 肺轉移灶檢測動物處理同前，取出小鼠完整的肺用Bruin液固定24 h，然后放入無水乙醇漂洗至黃色退出，轉移灶呈白色小點，用顯微鏡觀察轉移灶數(shù)，計數(shù)轉移率。

1．3．5 對免疫器官的影響 動物處理同前，動物處死后取動物脾臟及胸腺，稱重計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。臟器指數(shù)=臟器重量/體質量。

1．4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13．0統(tǒng)計軟件，對于正態(tài)分布且方差齊同的采用單因素方差分析（onefactor ANOVA）的單向分類的方差分析（one-way classification ANOVA）進行組間比較。對多個樣本均數(shù)間的兩兩比較采用LSD-t檢驗，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1 膏方對Lewis肺癌皮下移植瘤的影響 各組間瘤重無統(tǒng)計學差異（F=0．227，P ＞0．05），膏方組、輔料組對Lewis皮下移植瘤的抑瘤率比較無統(tǒng)計學差異（F=0．227，P ＞0．05）（表 1）。

表1 膏方對Lewis肺癌皮下移植瘤的影響

2．2 膏方對Lewis肺癌轉移灶的影響 膏方組與空白組比較，膏方組與輔料組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P ＜0．05）。膏方組影響Lewis肺癌轉移灶的作用最強，大于輔料組和空白組（表2）。

表2 膏方對Lew is肺癌轉移灶的影響

2．3 膏方對Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影響膏方組和輔料組的體質量分別與空白組體質量比較均有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），膏方組體質量與輔料組體質量比較無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。膏方組脾指數(shù)分別與空白組和輔料組脾指數(shù)比較均有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），輔料組脾指數(shù)與空白組脾指數(shù)比較無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。膏方組胸腺指數(shù)分別與空白組和輔料組胸腺指數(shù)比較均有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），輔料組胸腺指數(shù)與空白組胸腺指數(shù)比較無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）（表3）。

表3 膏方對Lew is肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影響

3 討論

膏方在腫瘤治療中的價值逐漸受到重視。中醫(yī)膏方個體性強，是根據(jù)每一個腫瘤患者的具體情況，針對性、選擇性地將一些名貴中藥和復方中藥組合在一起，再加入辨證與辨病相結合的中藥，可以起到相互協(xié)調、相得益彰的特殊作用和良好效果。中醫(yī)認為，腫瘤的形成與“虛”有密切關系，即腫瘤是由于人體正氣不足，臟腑功能失調，以致邪毒乘虛而入，蘊聚于經絡、臟腑，進而引起機體氣血失調、陰陽失衡，導致氣滯、血瘀、痰凝、毒聚的病理變化，日久即成腫瘤，是一種全身屬虛局部屬實的全身疾病。正氣虛損，陰陽失調是發(fā)生腫瘤的基礎。正氣不足是腫瘤發(fā)生的內在依據(jù)，邪毒侵凌是腫瘤發(fā)生的外在條件。因此，中醫(yī)治療腫瘤可歸納為扶正與祛邪兩大方面。膏方具有補中寓治、治中寓補、補治結合的特點。正確應用膏方，不僅能提高機體的免疫功能，糾正和修復手術、放化療對機體的損壞，而且在體內貯存豐富的營養(yǎng)物質，有助于防復發(fā)，抗轉移，對防止癌癥卷土重來大有裨益。需要一提的是，對腫瘤患者開膏滋藥，有別于其他一些由于體質虛弱而行冬令進補的人群，因為腫瘤患者在人體內還存在著不同程度的“邪毒”，所以還應適度加入清熱解毒、軟堅化痰、理氣散結的中藥，起到扶正祛邪、祛邪扶正的獨特作用。

現(xiàn)代醫(yī)學認為，腫瘤的生成和發(fā)展與人體免疫功能低下、失調關系密切。人體的免疫系統(tǒng)能監(jiān)督并清除機體內環(huán)境出現(xiàn)的突變細胞及早期腫瘤。因此，提高免疫是腫瘤防復發(fā)轉移的重要環(huán)節(jié)。這正與中醫(yī)提倡的“治未病”，通過益氣養(yǎng)精，以達到“正氣存內，邪不可干”的指導思想相符。

多項研究已顯示，本膏方的基礎方肺巖寧可以提高晚期非小細胞肺癌患者CD3、CD4及自然殺傷細胞水平，降低調節(jié)性T細胞水平，明顯改善患者細胞免疫功能，具有明確的抗腫瘤作用［4］。加之輔料中鱉甲、人參等均具有提高機體免疫力的功效，因此，膏方組、輔料組均有不同程度的提高荷瘤小鼠免疫功能的作用。膏方組肺轉移發(fā)生率的明顯下降可能與之通過激活免疫機制，對抗腫瘤的侵襲轉移有關。

但該實驗中，空白組、輔料組、膏方組各組的瘤重以及抑瘤率沒有明顯的差異，其原因主要有以下幾點:①輔料中的補益藥可能降低了組方抗癌的效率，影響了抑瘤作用;②臨床服用膏方有一定的指征和禁忌證，一般適用于正虛邪不甚的患者;而C57BL/6小鼠Lewis肺癌的荷瘤模型往往表現(xiàn)為邪甚正不甚虛的證候，小鼠服藥后體質量明顯增加，活動度較空白組明顯增大，毛色較有光澤，可見模型尚無法達到病證結合的要求。綜上所述，肺巖寧膏方能夠明顯提高Lewis肺癌荷瘤小鼠的免疫功能，對Lewis肺癌轉移有一定抑制作用，但對Lewis肺癌皮下移植瘤無明顯抑制作用。關于中藥膏方抗腫瘤治療的實驗研究動物模型的制備，組方結構和量效關系等尚需進一步探討。

［1］張孜，張瑾峰．中藥抗腫瘤作用機制研究進展［J］．中國現(xiàn)代實用醫(yī)學雜志，2006，5（2）:28-32．

［2］趙峰，劉培勛．中藥抗腫瘤及其轉移機制研究進展［J］．中國中西醫(yī)結合雜志，2007，27（2）:178-181．

［3］徐振曄，王中奇，朱晏偉，等．肺巖寧對晚期非小細胞肺癌生長轉移和血清VEGF的影響［J］．上海中醫(yī)藥大學學報，2003，17（3）:18-22．

［4］張銘，徐振曄，姜唯潔．肺巖寧方對晚期非小細胞肺癌患者血清調節(jié)性T細胞的影響［J］．遼寧中醫(yī)雜志，2006，33（8）:916-917．

［5］張暉，徐振曄，王中奇，等．肺巖寧方對晚期非小細胞肺癌血清TSGF和免疫功能的影響［J］．遼寧中醫(yī)雜志，2004，31（6）:518-519．