夏 蕾，王麗霞，牟稷征（中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院藥劑科，北京市 100053）

由于皮膚科很多疾病均為慢性病程，因此皮膚科長療程用藥的蓄積中毒問題值得關(guān)注。制何首烏和白蒺藜是治療白癜風(fēng)經(jīng)常配伍使用的中藥。目前已有不少學(xué)者在臨床病例和動物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)制何首烏能引起肝功能損害[1，2]，但尚未見關(guān)于白蒺藜肝臟毒性的報(bào)道。筆者前期的實(shí)驗(yàn)表明，制何首烏和白蒺藜對小鼠無急性毒性，兩藥按中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院皮膚科的臨床常用劑量ig 2周后，亦未發(fā)現(xiàn)肝臟毒性[3]，但對這兩種藥物的臨床安全使用劑量范圍及療程并未深入研究。因此，本課題組通過對不同劑量下單用制何首烏和制何首烏伍用白蒺藜對小鼠肝臟毒性的比較研究，旨在系統(tǒng)評價(jià)白蒺藜是否具有肝臟毒性以及制何首烏與白蒺藜伍用的合理性，并為確定這兩種中藥的安全使用劑量范圍及療程提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

AU640型全自動生化分析儀、BX50型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；YFDL20型十功能自動煎藥機(jī)（北京東華原醫(yī)療設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

制何首烏藥材（產(chǎn)自浙江，中國藥材集團(tuán)華邈中藥工程技術(shù)開發(fā)中心，批號：080401）、白蒺藜藥材（產(chǎn)自內(nèi)蒙古，北京晨益藥業(yè)有限公司，批號：080701），均經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院中藥質(zhì)檢室王建升副主任藥師鑒定為真品；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷脂酶（ALP）檢測試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 動物

昆明種小鼠192只，♀♂兼半，體重（20±2）g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供（動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2004-0001）。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)劑量確定

筆者前期的最大安全限度實(shí)驗(yàn)表明，小鼠對制何首烏和白蒺藜的最大耐受倍數(shù)均＞100，提示兩藥毒性甚小[3]。因此，本研究以中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院臨床常用劑量作為實(shí)驗(yàn)的低劑量，此劑量的5倍作為高劑量。從皮膚科處方可見，制何首烏常用劑量為15 g·d-1，白蒺藜為9 g·d-1。折合成小鼠的實(shí)驗(yàn)劑量為制何首烏2.27 g·kg-1，白蒺藜1.36 g·kg-1（按生藥量計(jì)算）。

2.2 實(shí)驗(yàn)藥物制備

按臨床煎煮水煎劑的流程制備制何首烏藥液，并濃縮至含生藥量1 g·mL-1；同法制備白蒺藜藥液，并濃縮至含生藥量1 g·mL-1；制何首烏與白蒺藜按5∶3比例配伍的合煎藥液，濃縮至含制何首烏生藥量1 g·mL-1，含白蒺藜生藥量0.6 g·mL-1。

2.3 分組和給藥

設(shè)高、低劑量組，將每個(gè)劑量組的小鼠均隨機(jī)分成4組，分別為空白對照、制何首烏、白蒺藜和制何首烏伍用白蒺藜（以下簡稱“制+白”）組，每組24只，♀♂各半，分籠飼養(yǎng)。低劑量組ig劑量為：空白對照組予等體積的蒸餾水，制何首烏組給藥劑量為2.27 g·kg-1，白蒺藜組給藥劑量為1.36 g·kg-1，制+白組給藥劑量為2.27 g·kg-1（按制何首烏生藥量計(jì)算，合煎藥液中按比例白蒺藜的給藥劑量為1.36 g·kg-1）；高劑量組ig劑量為各低劑量的5倍。各組小鼠每日禁食禁水6 h后ig，每天1次，連續(xù)8周。

2.4 指標(biāo)測定

觀察小鼠給藥后的一般情況，并記錄體重，根據(jù)體重調(diào)整給藥量。各組小鼠于6周末處死8只，處死前取眼眶血進(jìn)行肝功能檢測，包括ALT、AST、ALP、總膽汁酸（TBA），并留取肝臟；剩余小鼠1/3停藥觀察2周，1/3按原給藥劑量繼續(xù)ig2周，于8周末處死全部剩余小鼠，處死前取眼眶血進(jìn)行肝功能檢測，并留取肝臟計(jì)算肝臟指數(shù)[肝臟指數(shù)＝肝臟重量（mg）/小鼠體重（g）]。

2.5 病理學(xué)指標(biāo)測定

全部小鼠肝臟組織經(jīng)固定、包埋、染色后行病理學(xué)觀察。光鏡下炎癥改變病理分級為：－，正常；±，低倍鏡下見炎性細(xì)胞浸潤灶＜3個(gè)，炎性細(xì)胞數(shù)＜30個(gè)；+，低倍鏡下見炎性細(xì)胞浸潤灶＜5個(gè)，炎性細(xì)胞數(shù)＜50個(gè)；++，低倍鏡下見炎性細(xì)胞浸潤灶＞5個(gè)，炎性細(xì)胞數(shù)＞50個(gè)?？张葑儾±矸旨墳椋海?，正常；±，小葉間可見散在小空泡；+，肝板結(jié)構(gòu)紊亂，可見較多灶狀空泡改變；++，肝板紊亂明顯，肝索不連續(xù)，存在片狀空泡改變。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 小鼠的一般情況觀察[4]

高、低劑量組在給藥6周、8周后，各組小鼠的攝食量、毛發(fā)、糞便、呼吸頻率和幅度以及活動狀態(tài)均無差別，體重變化無顯著性差異。高、低劑量組小鼠體重測量結(jié)果見表1。

表1 高、低劑量組小鼠體重測量結(jié)果（±s，n＝8）Tab 1 Body weight of mice in high-dose and low-dose groups（±s，n＝8）

表1 高、低劑量組小鼠體重測量結(jié)果（±s，n＝8）Tab 1 Body weight of mice in high-dose and low-dose groups（±s，n＝8）

3.2 肝功能測定

高、低劑量組在給藥6周、停藥恢復(fù)2周和給藥8周后小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA無顯著性差異，提示在此劑量范圍內(nèi)使用制何首烏和白蒺藜8周后對小鼠肝酶系統(tǒng)基本無影響，而且制何首烏單用或伍用白蒺藜對小鼠肝酶系統(tǒng)的影響亦無顯著性差異。高、低劑量組6周末小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA測定結(jié)果見表2；低劑量組8周末小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA測定結(jié)果見表3；高劑量組8周末小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA測定結(jié)果見表4。

3.3 小鼠肝臟觀察

表2 高、低劑量組6周末小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 2 Levels ofALT，AST，ALPand TBAin mice serum in high-dose and low-dose groups after 6 weeks（±s，n＝8）

表2 高、低劑量組6周末小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 2 Levels ofALT，AST，ALPand TBAin mice serum in high-dose and low-dose groups after 6 weeks（±s，n＝8）

表3 低劑量組8周末小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 3 Levels ofALT，AST，ALPand TBAin mice serum in low-dose groups after 8 weeks（±s，n＝8）

表3 低劑量組8周末小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 3 Levels ofALT，AST，ALPand TBAin mice serum in low-dose groups after 8 weeks（±s，n＝8）

表4 高劑量組8周末小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 4 Levels ofALT，AST，ALPand TBAin mice serum in high-dose groups after 8 weeks（±s，n＝8）

表4 高劑量組8周末小鼠血清ALT、AST、ALP和TBA測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 4 Levels ofALT，AST，ALPand TBAin mice serum in high-dose groups after 8 weeks（±s，n＝8）

肉眼觀察各組小鼠肝臟，大體形態(tài)正常，質(zhì)地柔軟，多呈 紅褐色，未見結(jié)節(jié)、包塊及囊腫等。高、低劑量組各期小鼠肝臟指數(shù)無顯著性差異。病理分析結(jié)果表明，單用制何首烏會對小鼠肝臟造成炎癥改變，與空白對照組比較差異顯著（P＜0.05），高、低劑量組比較也有顯著性差異（P＜0.05）；盡管單用白蒺藜對小鼠肝臟僅表現(xiàn)輕微炎癥反應(yīng)（與空白對照組比較無顯著性差異），但是制何首烏伍用白蒺藜后小鼠肝臟主要以肝板排列紊亂以及空泡變?yōu)橹鳎ㄅc空白對照組比較差異顯著），炎癥反應(yīng)反而減輕，高、低劑量組病變比較亦差異顯著（P＜0.05）。小鼠肝臟指數(shù)測定結(jié)果見表5；小鼠肝臟病理分析結(jié)果見表6；小鼠肝臟病理形態(tài)觀察見圖1。

表5 小鼠肝臟指數(shù)測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 5 Liver index of mice（±s，n＝8）

表5 小鼠肝臟指數(shù)測定結(jié)果（±s，n＝8）Tab 5 Liver index of mice（±s，n＝8）

組別空白對照組制何首烏組白蒺藜組制＋白組低劑量組肝臟指數(shù)給藥6周42.95±2.5944.34±3.4443.25±4.8042.75±1.88停藥2周44.18±7.1749.50±5.8845.24±6.4248.03±5.48給藥8周45.27±3.8545.13±4.9647.13±2.5649.26±6.41高劑量組肝臟指數(shù)給藥6周42.55±4.2439.97±3.7742.78±2.2639.38±4.13停藥2周45.48±5.5544.50±3.1841.62±4.8945.72±3.45給藥8周41.53±3.1140.73±2.1244.95±5.9741.82±2.95

4 討論

表6 小鼠肝臟病理分析結(jié)果（n＝24）Tab 6 Pathomorphological analysis of mice livers（n＝24）

圖1 小鼠肝臟病理形態(tài)觀察A.制何首烏組（低劑量，6周）；B.制何首烏組（低劑量，8周）；C.制何首烏組（高劑量，6周）；D.制何首烏組（高劑量，8周）；E.白蒺藜組（高劑量、8周）；F.制何首烏+白蒺藜組（低劑量，6周）；G.制何首烏+白蒺藜組（低劑量，8周）；H.制何首烏+白蒺藜組（高劑量，6周）；I.制何首烏+白蒺藜組（高劑量，8周）Fig 1 Pathomorphological change of livers in different groupsA.Polygoni Multiflori Radix Praeparata group（low-dose，6 weeks）；B.Polygoni Multiflori Radix Praeparata group（low-dose，8 weeks）；C.Polygoni Multiflori Radix Praeparata group（high-dose，6 weeks）；D.Polygoni Multiflori Radix Praeparata group（high-dose，8 weeks）；E.T-ructus terrestris group（high-dose，8 weeks）；F.Polygoni Multiflori Radix Praeparata+T.terrestris group（low-dose，6 weeks）；G.Polygoni Multiflori Praeparata Radix+T.terrestris group（low-dose，8 weeks）；H.Polygoni Multiflori Radix Praeparata+T.terrestris group（high-dose，6 we-eks）；I.Polygoni Multiflori Radix Praeparata+T.terrestris group（high-dose，8 weeks）

自從龍膽瀉肝丸事件以來，中藥的安全性問題已經(jīng)日益成為關(guān)注和研究的熱點(diǎn)，特別是慢性疾病長期用藥后的蓄積毒性問題。我院近期也出現(xiàn)了數(shù)例白癜風(fēng)患者服用含制何首烏和白蒺藜的中藥煎劑后出現(xiàn)肝功能損害的不良反應(yīng)。因此，本研究通過比較不同劑量下單用制何首烏和制何首烏伍用白蒺藜對小鼠肝臟的毒性作用，提示按臨床常用劑量和5倍的高劑量使用8周后，單用制何首烏和白蒺藜以及兩藥伍用后對小鼠肝酶系統(tǒng)以及肝臟指數(shù)均無明顯影響。不過，肝臟病理分析的結(jié)果卻顯示，白蒺藜對小鼠肝臟無明顯毒性作用，但是長期單用制何首烏會對小鼠肝臟造成炎癥改變，而且制何首烏伍用白蒺藜后對小鼠肝臟主要表現(xiàn)為肝板排列紊亂以及空泡變，而炎癥反應(yīng)明顯減輕。因此，白蒺藜是否能減輕制何首烏對小鼠肝臟的炎癥反應(yīng)，以及兩藥伍用后對小鼠肝臟的損傷機(jī)制都值得進(jìn)一步探討?？紤]這兩種藥物是臨床上經(jīng)常配伍使用的中藥，而本研究觀察到的病理改變可能與用藥劑量和用藥療程均呈正相關(guān)，再結(jié)合筆者前期的研究工作[3，4]，建議對慢性疾病長期用藥患者可以采用短療程持續(xù)療法，即用藥2周后停藥評價(jià)其肝腎及相關(guān)系統(tǒng)功能情況，然后再根據(jù)患者實(shí)際情況繼續(xù)治療；另外在用藥劑量選擇上，應(yīng)盡可能參照藥典標(biāo)準(zhǔn)，除非個(gè)別特殊情況，不建議長期大劑量用藥。

[1]胡錫琴，楊紅蓮，張曉琴，等.制何首烏對大鼠肝臟毒理的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，29（3）：40.

[2]黃建平，黃文豪.何首烏致肝功能損害1例報(bào)道[J].中華醫(yī)學(xué)實(shí)踐雜志，2006，5（6）：693.

[3]夏 蕾，王麗霞，牟稷征.制何首烏和白蒺藜對小鼠毒性作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)院用藥分析與評價(jià)，2010，10（1）：34.

[4]付書婕，黃建春，王乃平，等.玉郎傘多糖對小鼠急性酒精性肝損傷保護(hù)作用的研究[J].中國藥房，2009，20（6）：406.