吳春麗，雷 偉，李 幸，吳洪銀（鄭州大學(xué)藥學(xué)院，鄭州市 450001）

氟康唑（Fluconzole）化學(xué)名為2-（2，4-二氟苯基）-1，3-雙（1H-1，2，4-三唑-1-基）-2-丙醇，能強(qiáng)烈而持續(xù)地抑制真菌中的甾醇合成，由于其廣譜、高效的抗真菌活性，尤其是具有對深部真菌抑制作用較強(qiáng)并能透過血腦屏障的顯著特點，在治療曲霉菌、全身性念珠菌以及隱球菌感染方面應(yīng)用廣泛，是抗深部真菌感染的首選藥物[1]。由于氟康唑原料藥的生產(chǎn)過程中使用了丙酮、乙酸乙酯、甲苯等有機(jī)溶劑，為確保藥品的安全、有效和質(zhì)量可控，根據(jù)《中國藥典》殘留有機(jī)溶劑測定法[2]和人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）制定的藥品中有機(jī)溶劑殘留量檢測的指導(dǎo)原則[3]，本研究采用毛細(xì)管氣相色譜法[4～6]，定量檢測氟康唑原料藥中的有機(jī)溶劑殘留量，結(jié)果表明所建立的方法簡便、靈敏、準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N氣相色譜儀、HP6890化學(xué)工作站、氫火焰離子化（FID）檢測器（美國安捷倫科技有限公司）；AL104電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。

氟康唑原料藥（批號分別為20081201、20081202、20081203，含量分別為99.3%、99.2%、99.4%）均由河南普瑞制藥有限公司提供；丙酮、乙酸乙酯、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（Dimethyl formamide，DMF）均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:DB-17毛細(xì)管柱（固定相為50%苯基+50%甲基聚硅氧烷，30 m×0.25mm，0.25μm）；柱溫:初始溫度60℃，保持3min后，以70℃·min－1升溫至240℃再保持25min；進(jìn)樣口溫度:200 ℃；載氣:N2，流速:1.0mL·min－1；分流比:10∶1；FID檢測器溫度:270 ℃；H2流速:30mL·min－1，空氣流速:300mL·min－1；進(jìn)樣量:1μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 貯備液:分別精密稱定丙酮255.5mg、乙酸乙酯258.9mg、甲苯53.0mg，置于同一個50mL容量瓶中，加DMF稀釋制成每1mL中含丙酮5.110mg、乙酸乙酯5.178mg和甲苯1.060mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液:精密量取“2.2.1”項下貯備液5mL，置于50mL容量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 丙酮溶液:精密稱定丙酮54.9mg，置于100mL容量瓶中，加DMF稀釋制成每1mL中含丙酮0.549mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.4 乙酸乙酯溶液:精密稱定乙酸乙酯49.9mg，置于100mL容量瓶中，加DMF稀釋制成每1mL中含乙酸乙酯0.499mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.5 甲苯溶液:精密稱定甲苯21.3mg，置于100mL容量瓶中，加DMF稀釋制成每1mL中含甲苯0.213mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.6 供試品溶液:精密稱定氟康唑原料藥0.2 g，置于2mL容量瓶中，加DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗:分別取“2.2.2”、“2.2.6”項下的溶液及空白溶液（DMF）各1μL注入氣相色譜儀。結(jié)果，丙酮、乙酸乙酯、甲苯保留時間分別為4.949、5.514、7.471min，氣相色譜詳見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對照品溶液；B.空白溶液；C.供試品溶液Fig 1 GC chromatogramsA.reference substances solution；B.blank solution；C.test solution

2.3.2 線性考察試驗:精密量取“2.2.1”項下的貯備液5.0、2.5、1.0、0.5、0.25mL分別置于10mL容量瓶中，加DMF稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照溶液。照“2.1”項下的色譜條件，分別精密量取1μL注入氣相色譜儀，記錄色譜，各組分濃度溶液平行進(jìn)樣2次，測得平均峰面積。以各組分濃度（c，μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，各組分峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 線性范圍及回歸方程（n＝5）Tab 1 Linear ranges and regression equations（n＝5）

2.3.3 精密度試驗:精密量取對照品溶液1μL，注入氣相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜，測得峰面積，考察其精密度。結(jié)果丙酮、乙酸乙酯、甲苯的RSD分別為2.3%、1.3%、1.5%。

2.3.4 最低檢測限試驗:取“2.2.3”、“2.2.4”、“2.2.5”項下的溶液分別逐級稀釋，照“2.1”項下的色譜條件分別進(jìn)樣1μL，記錄色譜，以信噪比3∶1確定檢測限，以信噪比10∶1確定定量限。結(jié)果，丙酮、乙酸乙酯、甲苯檢測限分別為11、7.1、0.6 ng，定量限分別為27.5、33.3、2.7 ng。

2.3.5 重復(fù)性試驗:取同一批氟康唑原料藥（批號:20081202）0.5 g，精密稱定，共6份，分別置于5mL容量瓶中，加DMF溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取溶液各1μL，照“2.1”項下的色譜條件分別注入氣相色譜儀，記錄色譜。同時測定“2.2.2”項下對照品溶液1次。按外標(biāo)法以峰面積計算。結(jié)果，丙酮、乙酸乙酯和甲苯RSD均為0，表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗:精密稱取同一批氟康唑原料藥（批號:20081201）0.5 g，共6份，分別置于5mL容量瓶中，精密加入“2.2.1”項下貯備液0.5mL，加DMF稀釋至刻度，搖勻。精密量取溶液各1μL，照“2.1”項下的色譜條件分別注入氣相色譜儀，記錄色譜。同時測定“2.2.2”項下對照品溶液。根據(jù)峰面積計算加樣回收率。結(jié)果，丙酮、乙酸乙酯、甲苯的加樣回收率分別為98.1%、98.0%、97.5%，詳見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 2 Results of recovery tests（n＝6）

2.4 樣品中有機(jī)溶劑殘留量測定

分別稱取3批氟康唑原料藥0.2 g，精密稱量，按“2.2.6”項下方法制備成供試品溶液。分別取1μL按照“2.1”項下的色譜條件注入氣相色譜儀。同時取“2.2.2”項下對照品溶液1μL進(jìn)樣。結(jié)果，3批氟康唑原料藥樣品中均未檢出丙酮、乙酸乙酯、甲苯，符合《中國藥典》規(guī)定。

3 討論

《中國藥典》及《美國藥典》[7]均規(guī)定，丙酮、乙酸乙酯為第三類受控毒性溶劑，甲苯為第二類受控毒性溶劑，根據(jù)ICH制定的控制指標(biāo)[3]，結(jié)合實際測定結(jié)果，認(rèn)為原料藥中的丙酮不得超過0.5%，乙酸乙酯不得超過0.5%，甲苯不得超過0.089%。本研究檢測結(jié)果表明，3批樣品的有機(jī)溶劑殘留量均符合規(guī)定。

本品控制的丙酮、乙酸乙酯、甲苯3種有機(jī)溶劑的沸點和極性雖均有不同程度的差異，但采用DB-17毛細(xì)管色譜柱，方法的檢測限、定量限、精密度和準(zhǔn)確度試驗均能滿足分析要求，故該方法能夠有效分離和準(zhǔn)確檢測氟康唑原料藥中的有機(jī)溶劑殘留量。

[1]平素玲，沙 瑋.氟康唑治療深部真菌感染10例報告[J].蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1995，15（3）:551.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄Ⅷ.

[3]周海鈞.藥品注冊的國際技術(shù)要求·質(zhì)量部分[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:87.

[4]吳春麗，張俊霞，史云濤，等.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定來曲唑原料藥中有機(jī)溶劑殘留量[J].中國藥房，2010，21（17）:1601.

[5]吳春麗，張俊霞，史云濤，等.毛細(xì)管氣相色譜法測定扎托洛芬中有機(jī)溶劑的殘留量[J].鄭州大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2010，45（1）:134.

[6]李珂珂，譚豐蘋.毛細(xì)管氣相色譜法測定拉米夫定中有機(jī)溶劑的殘留量[J].中國藥房，2007，18（19）:1502.

[7]The United States Pharmacopeial Convention，Inc.The United States Pharmacopeia[S].30th edi.Rochville MD:the United States Pharmacopeial Convention，Inc.，2007:467.