鄭慕雄，王建中，郭義龍，陳玉興

痤瘡是臨床的常見病、多發(fā)病。中藥復(fù)方清肺飲是以枇杷清肺飲為基礎(chǔ)方，用于治療痤瘡，臨床應(yīng)用表明其療效確切。為進一步研究其治療痤瘡的相關(guān)機理，我們進行了清肺飲顆粒對煤焦油所致家兔耳痤瘡影響的實驗性研究，以期闡明清肺飲顆粒治療痤瘡的藥理效應(yīng)及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 家兔，體重2.0～2.5 kg，雌雄兼用，雌性未孕[(廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，許可證號為SCXK（粵）2008-0002、粵監(jiān)證字2008A049)]。本實驗設(shè)施使用許可證號：動物實驗室SYXK（粵）2005-0059。

1.1.2 藥物與試劑 清肺飲顆粒[(桑白皮、枇杷葉、生地、赤芍、黃芩、公英、連翹、浙貝、夏枯草、天花粉、桔梗等），汕頭市皮膚性病防治院，批號Y081120]；解毒痤瘡?fù)瑁ń鲄R仁藥業(yè)有限公司，批號0804001），煤焦油（江門市恒健藥業(yè)有限公司，批號081101）。

1.2 試驗方法

1.2.1 痤瘡模型建立 取成年未孕家兔36只，單籠飼養(yǎng)。參照文獻方法[1,2]，家兔均于左耳內(nèi)側(cè)面耳管開口處3.0cm×3.0 cm范圍內(nèi)，涂濃煤焦油溶液0.5 ml 1次/d，連續(xù)2周，對照組家兔于同一位置處涂抹等劑量的橄欖油。

1.2.2 分組灌藥 成年未孕家兔36只隨機均分成對照組、模型實驗組、解毒痤瘡?fù)杞M[3]，清肺飲顆粒高、中、低劑量組，每組6只，家兔按解毒痤瘡?fù)鑋4,5]0.84g/kg，清肺飲顆粒高劑量1.12 g/kg、中劑量0.56 g/kg、低劑量0.28 g/kg（分別相當(dāng)于4倍、2倍、1倍臨床等效劑量[4,5]）灌胃給藥，給藥容積為10 ml/kg，正常對照組、模型實驗組同法灌胃等容積的蒸餾水，1次/d，連續(xù)2周。

1.2.3 取材及觀察 痤瘡模型建立及灌藥2周末次給藥1h后肉眼觀察耳廓皮膚變化，包括耳厚度、硬度、粗燥程度、毛囊口有無黑色角栓等。用直徑12.0 mm打孔器取家兔左右耳內(nèi)側(cè)面耳管開口處同一位置耳片（左耳片處涂有濃煤焦油），稱重，計算左右耳片重量差值[6]；取涂有濃煤焦油的左耳組織，中性甲醛固定后，常規(guī)石蠟切片、HE染色，光鏡下觀察耳廓組織炎性病變。

1.2.4 病理組織學(xué)判定標(biāo)準(zhǔn) 病理組織學(xué)判定標(biāo)準(zhǔn)：（-）為無痤瘡；（+）為毛囊輕度角化，皮脂腺輕度增生或無明顯增生；（++）毛囊面積輕度擴大，漏斗部可見中等量的角化物質(zhì)，皮脂腺輕度增生；（+++）毛囊面積明顯擴大，內(nèi)有大量的角化物質(zhì)，皮脂腺直徑明顯增大。

1.2.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSSl5.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，所有計量（定量）資料以均值加減標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差析（One-Way ANOVA），等級資料采用秩和檢驗，α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 肉眼觀察

正常家兔耳朵菲薄、柔軟，毛細血管清晰可見，耳管開口處毛囊口排列整齊（圖1）。模型實驗組涂煤焦油部位的兔耳皮膚在1周后即干燥、粗糙且增厚、變硬；毛囊口有黑色角栓，部分毛囊口隆起呈丘疹狀；表面可見煤焦油厚痂，結(jié)痂粘連著表皮，難以揭去（圖2）。各給藥組灌胃治療后，兔耳黑色角栓、丘疹狀隆起等癥狀明顯減少（圖3-6）。

2.2 組織病理觀察

正常家兔耳表皮較薄，只有1層顆粒層，2～4層棘細胞層，毛囊、真皮、表皮交界清楚可見（圖7）；模型實驗組可見表皮角化過度，表皮和毛囊上皮的顆粒層增厚，棘層肥厚，部分相鄰擴張的毛囊互相融合，毛囊口及漏斗部充滿角化物質(zhì)，并向皮脂腺延仲，毛囊口被角質(zhì)栓堵塞，毛囊漏斗部充滿角化物質(zhì)并擴大呈壺狀，真皮上皮毛細血管擴張，毛囊周圍散在炎細胞浸潤（圖8）；用藥后各組可見表皮增厚減輕明顯，毛囊口擴張程度減輕，其內(nèi)角化物質(zhì)疏松、減少，部分已接近正常組織（圖9-12）。清肺飲顆粒對家兔實驗性痤瘡組織病理學(xué)分級比較見表1。

表1 清肺飲顆粒各劑量組對家兔實驗性耳痤瘡組織病理學(xué)的影響

2.3 家兔左右耳片重量差觀察

方差分析顯示，各組家兔左右耳片重量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。進一步比較，解毒痤瘡?fù)杞M、清肺飲顆粒各劑量組與正常對照組及模型實驗組之間存在差異，但清肺飲各劑量組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（表2）。

表2 清肺飲顆粒對家兔左右耳片重量差值的影響(±s，n=6)

表2 清肺飲顆粒對家兔左右耳片重量差值的影響(±s，n=6)

組別 劑量(g/kg)耳片重量(mg)正常對照組 - 8.28±7.42模型實驗組 - 116.23±9.85清肺飲顆粒組 1.12 62.88±13.24 0.56 51.12±9.87 0.28 57.20±34.55解毒痤瘡?fù)杞M 0.84 61.48±17.32

3 討論

圖1 正常兔耳外觀

圖2 實驗?zāi)Ｐ徒M兔耳外觀

圖3 解毒痤瘡?fù)杞M兔耳外觀

圖4 清肺飲高劑量組兔耳外觀

圖5 清肺飲中劑量組兔耳外觀

圖6 清肺飲低劑量組兔耳外觀

痤瘡是一種以粉刺、丘疹、膿皰、結(jié)節(jié)、囊腫為特征的疾病，是青春期和成人期一種常見、多發(fā)的皮膚疾患。痤瘡的發(fā)生與毛囊皮脂腺雄激素受體升高、皮脂腺細胞雄激素敏感性增加，大量脂質(zhì)分泌[7]和毛囊皮脂腺導(dǎo)管角化栓塞，皮脂淤積在毛囊口有關(guān)[8]。因此，痤瘡藥物治療的原則是減少皮脂分泌、溶解毛囊角栓和減輕炎癥[9]。

兔耳痤瘡模型的應(yīng)用己經(jīng)超過了半個世紀(jì)，故重復(fù)性強，是經(jīng)典的痤瘡動物模型。本實驗中模型組家兔耳廓肉眼下有黑色角栓、丘疹狀隆起、表皮和毛囊上皮增厚、相鄰擴張毛囊融合、毛囊口角質(zhì)栓形成、毛囊漏斗部角化物擴張及毛囊周圍炎細胞浸潤、耳廓增厚、增重等痤瘡特征性病變，與文獻一致[10]，提示痤瘡動物模型建立成功。給予清肺飲顆粒治療的兔耳，用藥后毛囊角化異常得到明顯改善或消失，其組織病理學(xué)分級與模型實驗組比較，差異有顯著意義（P＜0.01），表明清肺飲顆?？赏ㄟ^糾正毛囊導(dǎo)管的角化異常治療尋常痤瘡，這可能是其治療痤瘡的藥理機制之一，但清肺飲顆粒各劑量組之間組織病理學(xué)分級比較，差異無顯著意義（P＞0.05），說明在臨床劑量增加的情況下，其治療效果并未能提高。

此外，模型實驗組動物左右耳耳廓重量差較正常組顯著增加，提示在煤焦油刺激下，家兔兔耳毛囊及毛囊周圍炎癥細胞浸潤，產(chǎn)生痤瘡的損害，耳廓發(fā)生增生性病變；經(jīng)清肺飲顆粒各劑量組治療后的家兔左右耳耳廓重量差與模型實驗組相比，其差異有顯著意義（P＜0.01），提示清肺飲顆粒可以減輕由煤焦油刺激引起的家兔兔耳的炎癥性損害，這可能也是其治療痤瘡的藥理機制。

圖7 正常組兔耳組織學(xué)（HE染色×200)

圖8 實驗?zāi)Ｐ徒M兔耳組織病理（HE染色×200)

圖9 解毒痤瘡?fù)杞M兔耳組織病理（HE染色×200)

圖10 清肺飲高劑量組兔耳組織病理（HE染色×200)

圖11 清肺飲中劑量組兔耳組織病理（HE染色×200)

圖12 清肺飲低劑量組兔耳組織病理（HE染色×200)

中醫(yī)認為痤瘡是肺胃有熱所致，治宜以清熱瀉火、涼血解毒為主。清肺飲是由經(jīng)典方“枇杷清肺飲”為加減而成的協(xié)定方，其中桑白皮、枇杷葉清熱宣肺瀉火為君藥；生地、赤芍涼血解毒，黃芩、公英、連翹清瀉肺胃，共為臣藥；佐以浙貝母、夏枯草、天花粉以清熱軟堅散結(jié)；桔梗排膿并載藥上行為使藥。諸藥合用，共奏清熱瀉火、涼血解毒的功效。由結(jié)果可知，清肺飲顆粒可顯著抑制家兔痤瘡耳片重量、改善耳廓組織病變，推測糾正毛囊導(dǎo)管角化異常與抗炎作用可能是清肺飲顆粒治療痤瘡的藥理機制，但其詳細機制尚有待進一步研究。

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