彭 濤 ，彭 聰 ，沈 丹 ，梁卓粵 ，彭南秀 ，胡永輝 ，張海明 ，張海冰 ，朱光劍 ，原麗紅 ，陳金平

（1.廣東省昆蟲研究所，廣東 廣州 510260；2.廣州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東 廣州 510260）

動物源性疫病感染賽馬經(jīng)常被報道，除了家禽、家畜外，主要還有蝙蝠、嚙齒類、鳥類和野豬等動物攜帶的疫病可以感染賽馬。2010年第16屆廣州亞運會的馬術(shù)比賽在廣州從化市舉行。因此，為確保進駐從化賽馬場的賽馬健康，調(diào)查對馬屬動物健康具有潛在威脅的疫源疫病對這一次馬術(shù)比賽順利進行有著重要的意義。本次調(diào)查主要針對與馬屬動物有共患疫病的動物，包括鳥類、蝙蝠和野豬。一方面調(diào)查他們的季節(jié)分布情況，另一方面檢測他們對馬疫病原的攜帶情況。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查采樣點的選擇

設(shè)置核心區(qū)和緩沖區(qū)調(diào)查 核心區(qū):廣州亞運馬術(shù)比賽場（位于從化市良口鎮(zhèn)熱水村）為中心周圍半徑五千米的區(qū)域；緩沖區(qū):廣州市白云區(qū)、蘿崗區(qū)、花都區(qū)、增城市，以及清遠市清城區(qū)、佛岡縣，韶關(guān)市新豐縣和惠州市龍門縣等8個與從化市相鄰的縣級行政區(qū)域。

1.2 調(diào)查時間

在核心區(qū)，按照春、夏、秋、冬不同的季節(jié)進行調(diào)查，在不同的季節(jié)進行4次調(diào)查。在緩沖區(qū)，在2009年9月份和2010年1月份進行大面積調(diào)查取樣。

1.3 采集方法

根據(jù)不同的區(qū)域類型，如林區(qū)、農(nóng)田灌溉區(qū)、城市區(qū)和河口水域區(qū)，選擇樣地調(diào)查。具體采集方法根據(jù)采集動物的不同生活習(xí)性進行設(shè)計。

1.4 病毒樣品的分離與檢測

采樣內(nèi)容包括取動物的咽拭子和肛拭子，每只動物每種標本各取2份進行病原檢測，取靜脈血制備血清檢測病毒抗體。用RT-PCR，熒光定量PCR和抗體ELISA方法檢測病毒，陽性對照采用相應(yīng)病毒片斷質(zhì)粒[1-7]。見表1和表2。

2 結(jié)果

2.1 鳥類與獸類的采樣情況

本次調(diào)查采樣于2009年1月至2010年1月進行，考慮到調(diào)查對象的活動都呈現(xiàn)出季節(jié)性變化的規(guī)律，在不同時期分別進行采樣，具體采樣時間為:2009年2月15日至2009年2月25日、2009年4月25日至2009年5月5日、2009年7月23至2009年7月28日、2009年8月25日至2009年9月5日、2009年11月6日至2009年11月12日，2010年1月9日至2010年1月26日。6次采樣共收集到蝙蝠樣品365份（隸屬于14個種，其中果蝠一種，食蟲蝙蝠13種）；鳥類樣品358份，60種（隸屬13目，21科）；野豬1種16頭。

2.2 病毒檢查

對采集的動物咽拭子和肛拭子進行病毒檢查和分析，通過RT-PCR和熒光定量PCR方法對所有樣本進行病毒檢查，沒有檢查到對賽馬健康具有潛在威脅的病原體。同樣，通過抗體ELISA的方法對血清樣品病毒檢測，也沒有檢測到陽性結(jié)果。

3 討論

3.1 調(diào)查分析

近幾年，在世界各國發(fā)生了規(guī)模不等、強度不一的多起馬病疫情，給各國的養(yǎng)馬業(yè)和賽馬的發(fā)展帶了一定的威脅，如馬接觸傳染子宮炎（美國）、馬流感（印度、埃及、日本、澳大利亞、中國、蒙古）、馬鼻疽（巴西）、馬梨形蟲病（美國）、馬傳染性貧血（法國、德國）、西尼羅病毒?。ㄒ獯罄?、奧地利、法國、阿拉伯聯(lián)合酋長國）、馬病毒性動脈炎（以色列、克羅地亞）[1-7]、非洲馬瘟（埃塞俄比亞）、馬鼻肺炎（以色列）、水泡性口炎（美國）等[8-9]。這些病原導(dǎo)致的疾病給馬屬動物造成巨大的損失。這些病原大都是通過其他動物作為媒介進行傳播，如鳥類、蝙蝠和野豬等。因此，調(diào)查對馬屬動物有潛在威脅的動物攜帶病原的情況，對馬術(shù)比賽的順利進行有很大的幫助。

表1 病毒檢測信息

表2 引物信息

廣東省昆蟲研究所2004—2007年對從化境內(nèi)的獸類和鳥類曾進行過調(diào)查，當時共調(diào)查到獸類38種，分屬7目18科。其中大部分為嚙齒類動物，有17種，幾乎占全部種類的50%；蝙蝠4種，分別為犬蝠（Cynopterus sphinx）、 中 華 菊 頭 蝠（Rhinolophus sinicus）、灰伏翼 （Hypsugo pulveratus）和東亞伏翼（Pipistrellus abramus）；鳥類164種。而本次在該區(qū)域共調(diào)查到蝙蝠14種，發(fā)現(xiàn)了12個新記錄，為以后從化的蝙蝠調(diào)查提供了有力的證據(jù)，同時也說明本次蝙蝠調(diào)查的方法是可行的。本次捕獲鳥類47種，占以往調(diào)查種類的29%，均為當?shù)爻Ｒ姺N類。對于野豬的調(diào)查采取捕捉和訪問結(jié)合，在賽馬場周圍的山上都有發(fā)現(xiàn)野豬的蹤跡，根據(jù)周邊的獵戶介紹，他們每隔4～5天能夠捉到一頭，我們捕到16頭用于病毒檢測。此次調(diào)查取樣種類和數(shù)量基本能代表本地區(qū)動物的基本情況。

3.2 病毒檢測分析

我們對賽馬有潛在病原影響的鳥類和獸類進行系統(tǒng)的調(diào)查，且針對馬屬動物易攜帶的病毒種類進行研究。在不同的季節(jié)調(diào)查所得動物樣本中沒有發(fā)現(xiàn)對賽馬產(chǎn)生危害的病原菌。對野豬樣品主要檢測了日本腦炎、伊氏錐蟲病、水泡性口炎和尼帕病毒；對蝙蝠樣品主要檢測了尼帕和亨德拉病毒；對鳥類樣品則主要檢測了日本腦炎和西尼羅河熱等不同馬屬易感病原體。這為廣州亞運會馬術(shù)比賽提供了技術(shù)支持。

我們調(diào)查檢測了從化馬場周邊的動物可能攜帶對賽馬健康有威脅的6種馬屬動物疫病攜帶情況，雖然所檢測結(jié)果都是陰性，但是我們同樣要做好防護工作。該區(qū)域?qū)愸R健康具有潛在威脅的動物主要是蝙蝠、鳥類和野豬，根據(jù)不同動物可以做好不同的防護工作。蝙蝠不會主動攻擊賽馬，但是賽馬有可能會吃到食果蝙蝠吃剩的果子導(dǎo)致病毒感染。蝙蝠都是在傍晚活動，對光照比較敏感，因此我們可以用加強燈光照明的方法驅(qū)趕蝙蝠。賽馬場周邊鳥類較多，尤其是小型鳥類，活動高峰期主要在凌晨和傍晚，可以采用聲音驅(qū)趕的方法。對于野豬防治，賽馬場可以進行圍欄防止其進入傷害馬匹。

[1]曹軍平，趙國，顧敏，等.實時熒光定量RT-PCR方法檢測禽流感病毒[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2010，30（1）:47-51.

[2]楊文詳，徐國景，唐利軍，等.犬狂犬病毒抗體ELISA檢測方法的建立[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，18（2）:5-8.

[3]Yamanaka T，Tsujimura K，Kondo T，et al.Isolation and genetic analysis of Japanese encephalitis virus from a diseased horse in Japan[J].J Vet Med Sci，2006，68（3）:293-295.

[4]Nidaira M，Taira K，Itokazu K，et al.Detection of Japanese encephalitis virus genome in Ryukyu wild boars（Sus scrofa riukiuanus） in Okinawa，Japan[J].Jpn J Infect Dis，2008，61（2）:164-165.

[5]HartyR N，Brown M E，HayesF P，etal.Vaccinia virus-freerecovery of vesicular stomatitis virus[J].JMol Microbiol Biotechnol，2001，3（4）:513-517.

[6]Harty R N，Brown M E，Hayes F P，et al.Rapid diagnosis of vesicular stomatitis virus in Ecuador by the use of polymerase chain reaction[J].Braz J Microbiol，2007，38（3）:500-506.

[7]王占鋒.水泡性口炎的RT-PCR及ELISA診斷方法的建立[D].長春:吉林大學(xué)，2008.

[8]朱來華，梁成珠，于紅光，等.2008年國際馬病疫情動態(tài)[J].中國動物檢疫，2009，26（8）:64-66.

[9]朱來華，梁成珠，于紅光，等.2009年國際馬病疫情動態(tài)[J].中國動物檢疫，2009，26（7）:71-73.