楊耀蘭,薛 濤,呂素珍,梁中樞,趙明麗,劉保有

(1.玉溪市動物疫病預(yù)防控制中心,云南 玉溪 653100; 2.玉溪市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,云南 玉溪 653100;3.峨山縣動物疫病預(yù)防控制中心,云南 峨山 653200; 4.江川縣動物疫病預(yù)防控制中心,云南 江川 652600)

豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus,PCV)是迄今發(fā)現(xiàn)的一種最小的動物病毒,現(xiàn)已知 PCV有 PCV-1和 PCV-2兩個(gè)血清型,PCV-1為非致病性的病毒,PCV-2為致病性的病毒,是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaning Multisystemic Wasting Synd rome,PMWS)的主要病原。本病于 1991年首先在加拿大被發(fā)現(xiàn),1996年暴發(fā)于世界許多國家。我國 2002年證實(shí)豬群中存在本病,臨床上主要表現(xiàn)為斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征和新生仔豬先天性震顫,母豬繁殖障礙等,并出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫抑制,從而容易導(dǎo)致繼發(fā)或并發(fā)其他傳染病,被世界各國公認(rèn)為最重要的豬傳染病之一。近年來,隨著玉溪市養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,生豬及其產(chǎn)品大流通,種豬的大量引進(jìn)等原因,PCV-2引起的豬圓環(huán)病毒病不斷發(fā)生,其流行情況也呈上升趨勢。為了解玉溪市豬群中PCV-2的感染、分布及流行情況,有效預(yù)防、控制豬圓環(huán)病毒病,減少該病給玉溪市養(yǎng)豬業(yè)帶來的經(jīng)濟(jì)損失。筆者應(yīng)用ELISA方法,自 2004～2009年期間,對玉溪市豬PCV-2感染情況進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 豬血清樣品

自 2004～2009年期間采自玉溪市 9個(gè)縣區(qū),樣品總數(shù)為 2 478份,其中采集了 170個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場(存欄 100頭以上)未免疫血清 1 606份,散養(yǎng)戶(飼養(yǎng) 10頭以下)309戶的未免疫血清 872份。血清于 -18°C保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 診斷試劑

豬圓環(huán)病毒 2型抗體 ELISA檢測試劑盒,由武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司提供。

1.3 檢測儀器

Biocell2010酶標(biāo)儀由鄭州博賽生物工程有限責(zé)任公司提供,單道可調(diào)微量加樣器,多道可調(diào)微量加樣器等。

1.4 檢測方法

①洗滌液配制:試劑盒使用前各種試劑平衡至室溫(25℃左右),用去離子水將洗滌液作 20倍稀釋備用。②樣品稀釋:在血清板中按 1∶40的體積稀釋待檢血清;陽性和陰性對照按 1∶4稀釋備用。③取檢測板用稀釋好的洗滌液洗板 2次,每次靜置 2m in后倒掉,再在干凈的吸水紙上拍干。④取稀釋好的血清樣品 10μL加入到檢測板中;陰性對照和陽性對照各設(shè) 2孔,每孔 100μL;輕輕振勻孔中樣品,置 37℃溫育 30min。⑤甩掉板中的溶液,用洗滌液洗板 3次,200μL/孔,每次靜置 3min,倒掉,再在干凈的吸水紙上拍干。⑥每孔加酶標(biāo)二抗 100μL(抗豬IgG-HRP結(jié)合物),置37°C溫育 30min。⑦洗滌 5次,方法同⑤。⑧每孔先加底物液 A 1滴(50μL),再加底物液 B 1滴(50μL),混勻,室溫避光顯色 10m in。⑨每孔加終止液 1滴(50μL),10min內(nèi)在酶標(biāo)儀上測定結(jié)果。

1.5 結(jié)果判定

在酶標(biāo)儀上測各孔OD 630值。試驗(yàn)成立的條件是陽性對照孔平均 OD 630值大于或等于 1.0,陰性對照孔平均OD 630值必須小于 0.3。樣品 OD630值大于 0.42,判為陽性;樣品 OD630值在 0.38到 0.42之間,判為可疑;樣品OD 630值小于 0.38,判為陰性。

2 結(jié)果

2.1 玉溪市 2004～2009年抽檢的 2 478份血清樣品 PCR-2抗體檢測結(jié)果

陽性率從 2004年的 5.03%逐年上升到 2009年的31.23%,并且呈逐年上升的趨勢(見表 1)。

表 1 玉溪市PCV-2各年度血清學(xué)檢測結(jié)果

2.2 不同養(yǎng)殖方式豬群的圓環(huán)病毒 2型抗體檢測結(jié)果(見表2)

(1)同一年度不同飼養(yǎng)方式陽性率情況:由表 2的結(jié)果經(jīng) t檢驗(yàn)得出,2004年和 2005年的散養(yǎng)戶與規(guī)模場陽性率差異不顯著(P＞0.05);2006年、2007年、2008年散養(yǎng)戶與規(guī)模場陽性率差異極顯著(P＜0.01);2009年散養(yǎng)戶與規(guī)模場陽性率差異顯著(P＜0.05)。

(2)不同的飼養(yǎng)方式豬PCV-2陽性率差異性很大。規(guī)模場陽性率 6年總平均值為 26.90%,散養(yǎng)戶陽性率 6年總平均值為 8.14%,相差 18.76個(gè)百分點(diǎn)。規(guī)模豬場陽性率較高,其中 2006～2009年陽性率在 25%～50%。散養(yǎng)戶陽性率在 4%～10%,到 2009年有較大增加,達(dá) 19%。

2.3 種豬與育肥豬圓環(huán)病毒病 2型檢測結(jié)果(見表 3)

表 3 種豬與育肥豬PCV-2感染情況檢測結(jié)果

由表 3結(jié)果經(jīng) t檢驗(yàn)得出,同年度比較 2004年種豬與育肥豬陽性率差異不顯著(P＞0.05),2005年、2006年、2007年、2008年、2009年種豬與育肥豬陽性率差異極顯著(P＜0.01);6年合計(jì)比較:種豬陽性率 6年總平均值為 37.19%,育肥豬陽性率 6年總平均值為 7.63%,相差 29.56個(gè)百分點(diǎn),陽性率差異極顯著(P＜0.01)。不同年度之間比較,種豬和育肥豬陽性率都呈逐年上升趨勢。

3 分析與討論

(1)通過玉溪市 2004～2009年對豬圓環(huán)病毒病 2型感染情況的調(diào)查結(jié)果表明,玉溪市 9縣(區(qū))都存在 PCV-2感染,表明豬圓環(huán)病毒病在玉溪市已廣泛存在。感染率從 2004年到 2009年呈逐年上升的趨勢。

(2)從不同飼養(yǎng)方式的豬PCV-2感染檢測情況來看,規(guī)?；B(yǎng)豬場的豬群感染率明顯高于散養(yǎng)戶,并且差異顯著。規(guī)模養(yǎng)豬場和散養(yǎng)戶分年度的感染率都呈逐年上升的趨勢。隨著生豬交易頻繁,農(nóng)村散養(yǎng)戶存在暴發(fā)流行該病的隱患。不同規(guī)模豬場陽性率在 10%～70%不等,這可能與各豬場的飼養(yǎng)管理、其它疫病預(yù)防等有關(guān)。

(3)種豬的感染率明顯高于育肥豬,這可能與近幾年大量引入種豬,又不進(jìn)行檢疫、凈化有關(guān)。另外,不同品種、不同日齡的豬群均有感染。

4 防治

豬圓環(huán)病毒病目前無特效的治療方法,除加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,提高營養(yǎng)水平,注意環(huán)境衛(wèi)生及消毒等綜合防治措施外,筆者就該病的防治,提出以下幾點(diǎn)建議:

(1)清除帶毒豬,凈化豬場。一旦發(fā)現(xiàn)可疑病豬,應(yīng)立即隔離,加強(qiáng)消毒,切斷傳播途徑,杜絕疫情傳播。

(2)把好引種關(guān),做好引入種豬的檢疫和隔離消毒工作,隔離、淘汰陽性種豬。

(3)豬圓環(huán)病毒病易與其它病原混合感染或繼發(fā)多種細(xì)菌感染,所以要做好相關(guān)疫病的疫苗接種,減少混合感染。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,控制繼發(fā)感染,提高豬群的免疫能力,做到早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早治療。

(4)藥物防治:該病重在預(yù)防,應(yīng)在未發(fā)病之前使用藥物進(jìn)行預(yù)防。當(dāng)豬群發(fā)病時(shí),治療效果一般不理想,可根據(jù)發(fā)病豬混合感染的具體情況,選用阿莫西林、氟苯尼考等抗菌素配合使用清熱解毒類中藥制劑及有免疫增強(qiáng)作用的黃芪多糖等藥,進(jìn)行肌肉注射,連續(xù)治療 5～7 d,同時(shí)在飲水或飼料中投入免疫增強(qiáng)劑(黃芪多糖)、復(fù)合電解多維、葡萄糖等進(jìn)行飲水 1周,達(dá)到控制繼發(fā)感染,降低應(yīng)激反應(yīng),提高豬體抵抗能力,降低發(fā)病死亡比例的目的。