黃文忠,彭海生,魯富有,張喬明

(1.云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南 昆明 650051; 2.普洱市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,云南 普洱 665000)

豬偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由皰疹病毒科(Herprioviridae)皰疹病毒屬(Herpesvirus)偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus)引起的一種多種動(dòng)物感染和發(fā)病的傳染病。PRV感染豬主要通過(guò)母豬胎盤和公豬精液垂直傳播,同時(shí)也可水平傳播[1]。該病可引起種公豬的不育、妊娠母豬的流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎,可引起新生仔豬的大量死亡而造成養(yǎng)豬業(yè)的較大經(jīng)濟(jì)損失。PR由 Au jeszky(1902年)在匈牙利確定為一種獨(dú)立的疫病。本病發(fā)生于整個(gè)歐洲,對(duì)牛、豬飼養(yǎng)業(yè)帶來(lái)很大損失。我國(guó)自 1947年首次報(bào)道該病以來(lái),目前已擴(kuò)散至全國(guó)的十幾個(gè)省市,并給當(dāng)?shù)氐酿B(yǎng)豬業(yè)發(fā)展也造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2-8]。近年來(lái)普洱市養(yǎng)豬業(yè)有了長(zhǎng)足的發(fā)展,2003年到 2007年,生豬飼養(yǎng)量由 180.4萬(wàn)頭增加到 210.7萬(wàn)頭,增長(zhǎng) 16.80%。但隨之而來(lái)的是普洱市的豬病疫情也變得越來(lái)越復(fù)雜。本研究旨在通過(guò)開展豬偽狂犬病的流行病學(xué)調(diào)查及血清學(xué)研究,揭示該疫病的三間分布規(guī)律,分析疫病成因,掌握疫病的發(fā)生現(xiàn)狀及特點(diǎn),進(jìn)行疫病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并提出防制對(duì)策,為提高普洱市防控豬偽狂犬病的整體能力提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 血清

隨機(jī)采集臨床上無(wú)異常癥狀豬血清,高速離心后,分離血清冷藏(冷凍)待檢。

1.2 檢測(cè)試劑

PR乳膠凝集試劑盒、偽狂犬病gE鑒別酶聯(lián)(ELISA)試劑盒均由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)學(xué)院動(dòng)物病毒室生產(chǎn),武漢科前動(dòng)物生物制品有限公司提供。其中PR乳膠凝集試劑盒批號(hào)為:200401、060821、060802、070301;偽狂犬病 gE鑒別酶聯(lián)(ELISA)試劑盒批號(hào)為:200404、200506、200602、200703。

1.3 方法

1.3.1 疫病監(jiān)測(cè)點(diǎn)設(shè)置

依托景東、鎮(zhèn)沅、景谷、墨江、寧洱、思茅、西盟等 7個(gè)縣(區(qū))獸醫(yī)站設(shè)置疫病監(jiān)測(cè)點(diǎn);瀾滄、孟連、江城等 3家邊境動(dòng)物疫情監(jiān)測(cè)站設(shè)置邊境疫病監(jiān)測(cè)點(diǎn)。

1.3.2 試驗(yàn)基點(diǎn)

在縣(區(qū))獸醫(yī)站豬場(chǎng)、有關(guān)縣相對(duì)較大的個(gè)體養(yǎng)豬戶等設(shè)置中型場(chǎng)試驗(yàn)點(diǎn);相對(duì)較小的景東、鎮(zhèn)沅、景谷、墨江、寧洱、思茅、西盟、江城、瀾滄、孟連 10縣(區(qū))個(gè)體養(yǎng)豬戶等設(shè)置小型豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶試驗(yàn)基點(diǎn)。

1.3.3 養(yǎng)豬模式的劃定

根據(jù)普洱市養(yǎng)豬狀況,將全市養(yǎng)豬模式劃定為散養(yǎng)戶(10頭以下)、小型養(yǎng)豬場(chǎng)(10～50頭)、中型養(yǎng)豬場(chǎng)(50～200頭)三類來(lái)進(jìn)行研究。

1.3.4 檢測(cè)方法

檢測(cè)目的物為自然感染豬偽狂犬病毒抗體。所采血清全部用豬乳膠凝集試劑盒進(jìn)行檢測(cè),對(duì)已使用豬偽狂犬病基因缺失滅活苗免疫但仍有繁殖障礙記錄的豬場(chǎng)血清用豬偽狂犬病 gE鑒別 ELISA診斷試劑盒進(jìn)行再次檢測(cè)。

1.3.4.1 豬偽狂犬病乳膠凝集試驗(yàn) 取待檢樣品(血清)、陽(yáng)性血清、陰性血清、稀釋液各 1滴,分置于潔凈載玻片上,各加乳膠抗原 1滴,用牙簽混勻,攪拌并搖動(dòng) 1～2min,于3～5min內(nèi)觀察結(jié)果。根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果:“++++”全部乳膠凝集,顆粒聚于液滴邊緣,液體完全透明;“+++”大部分乳膠凝集,顆粒明顯,液體稍渾濁;“++”約 50%乳膠凝集,但顆粒較細(xì),液體較渾濁;“+”有少許乳膠凝集,液體呈渾濁;“-”液滴呈原有的均勻乳狀;以出現(xiàn)“++”以上凝集者判為陽(yáng)性凝集。確定陽(yáng)性血清加抗原呈“++++”;陰性血清加抗原呈“-”,抗原加稀釋液呈“-”,試驗(yàn)結(jié)果方可成立,否則應(yīng)重試。

1.3.4.2 豬偽狂犬病gE鑒別ELISA按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作 取已包被好的酶標(biāo)板,洗滌液洗板 3次,200μL/孔,最后一次拍干,除空白對(duì)照孔外,每孔加入以樣品稀釋液 1∶40稀釋的待檢樣品 100μL。同樣 1∶40稀釋對(duì)照血清,設(shè)陽(yáng)性對(duì)照 2孔,陰性對(duì)照 3孔,空白對(duì)照不加,輕輕振勻孔中樣品(勿溢出),置 37℃溫育 30min。

甩掉板孔中的溶液,洗滌液洗板 3次,200μL/孔,最后一次拍干。每孔加酶標(biāo)二抗 100μL,置 37℃溫育 30 min。洗滌液洗板 3次,200μL/孔,最后一次拍干。每孔加底物A液、B液各 1滴(50μL),室溫避光顯色 15min。每孔加終止液 1滴(50μL),15min內(nèi)測(cè)定結(jié)果。結(jié)果判定。以空白孔調(diào)零,在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔 OD 630值,其陽(yáng)性對(duì)照孔 OD 630值≥0.4,陰性對(duì)照 OD 630值低于 0.1時(shí),則按 0.1計(jì)算。根據(jù)公式:樣品孔 OD 630值/陰性孔 OD 630值≥2.1為 gE蛋白抗體陽(yáng)性,介于 1.9～2.1為可疑,小于 1.9為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 PR流行情況監(jiān)測(cè)(見表 1)

對(duì)表 1中 2003～2007年 PR流行情況監(jiān)測(cè)縣(區(qū))數(shù)、村(場(chǎng))數(shù)、監(jiān)測(cè)數(shù)、陽(yáng)性數(shù)、陽(yáng)性率作 x2檢驗(yàn),結(jié)果 2006年、2007年較 2003年、2004年、2005年 PR流行陽(yáng)性率差異顯著(P＜0.05),表明全市豬PR陽(yáng)性率總體上呈上升趨勢(shì),2007年達(dá)到 16.38%。

表 1 2003～2007年 PR流行情況監(jiān)測(cè)統(tǒng)計(jì)

2.2 PR流行狀況時(shí)間分布(見表 2)

表 2 2003～2007年 PR流行狀況時(shí)間分布

對(duì)表 2中 2003～2007年 PR流行狀況各月份分布作 x2檢驗(yàn),結(jié)果 4月、5月、6月、7月、8月、9月對(duì)其它各月差異顯著(P＜0.05),表明全市豬 PR流行高峰出現(xiàn)在 4～9月,占77.95%。

2.3 PR流行狀況空間分布(見表 3)

表 3 2003～2007年 PR流行狀況空間分布

對(duì)表 3中 2003～2007年 PR流行狀況空間分布作 x2檢驗(yàn),結(jié)果江城縣較墨江、景東、思茅、鎮(zhèn)沅、瀾滄 5縣(區(qū))PR流行狀況空間分布陽(yáng)性率差異極顯著(P＜0.01),西盟、孟連、景谷、寧洱 4縣較墨江、景東、思茅、瀾滄 4縣區(qū) PR流行狀況空間分布陽(yáng)性率差異顯著(P＜0.05),表明全市豬PR流行陽(yáng)性率最高的是江城,其次是西盟、孟連、景谷、寧洱等生豬生產(chǎn)縣,陽(yáng)性率較低的是墨江、景東、思茅、瀾滄、鎮(zhèn)沅等養(yǎng)豬縣。

2.4 PR流行狀況群間分布

2003～2007年全市豬 PR共累計(jì)檢出陽(yáng)性樣品 381份,其中:散養(yǎng)戶 68份,占全市 PR陽(yáng)性樣品總數(shù)的 17.85%;小型養(yǎng)豬場(chǎng) 127份,占 33.33%;中型養(yǎng)豬 場(chǎng) 186頭,占48.82%。對(duì)PR流行狀況群間分布作 x2檢驗(yàn),結(jié)果中型養(yǎng)豬場(chǎng)對(duì)散養(yǎng)戶差異極顯著(P＜0.01),小型養(yǎng)豬場(chǎng)對(duì)散養(yǎng)戶差異顯著(P＜0.05),表明全市豬PR在中、小、散養(yǎng)戶豬群中流行程度從重到輕,流行程度與養(yǎng)殖規(guī)模關(guān)系密切。

2003～2007年的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明,豬PR是危害普洱市豬群的重要疫病之一。

3 討論

3.1 普洱市規(guī)模豬場(chǎng)疫病的三間分布

3.1.1 時(shí)間分布特點(diǎn)

豬 PR流行高峰出現(xiàn)在 4～9月(占 77.95%)。這與普洱市這一時(shí)期氣溫升高,生豬存欄量多,飼養(yǎng)密集以及鼠類活動(dòng)活躍有關(guān)。

3.1.2 空間分布特點(diǎn)

江城縣豬 PR病流行陽(yáng)性率最高,其次是西盟和孟連,這是因?yàn)檫@些縣生豬的飼養(yǎng)周期過(guò)長(zhǎng)(有的農(nóng)戶飼養(yǎng)生豬長(zhǎng)達(dá)1～2年),大大增加了個(gè)體生豬感染PR病的機(jī)會(huì)。而景谷、寧洱等生豬生產(chǎn)縣豬 PR陽(yáng)性率中等是由于這兩縣多年來(lái)從市外引入杜洛克、約克等種豬進(jìn)行品種改良時(shí),未經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的 PR檢疫,種豬通過(guò)精液將該病逐步擴(kuò)散,特別是這兩縣養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖技術(shù)相對(duì)較高,飼養(yǎng)數(shù)量密集,生豬的飼養(yǎng)周期較短,但基本未進(jìn)行過(guò) PR疫苗免疫保護(hù)的緣故。墨江、鎮(zhèn)沅、瀾滄 PR陽(yáng)性率較低是因?yàn)檫@ 3個(gè)縣的養(yǎng)殖戶地處偏遠(yuǎn)山區(qū),交通不便,PR的擴(kuò)散程度相對(duì)緩慢。景東、思茅等養(yǎng)豬縣PR陽(yáng)性率較低是因?yàn)檫@兩縣壩區(qū)的部分規(guī)模養(yǎng)殖戶近年來(lái)開始使用 PR的滅活疫苗對(duì)豬群進(jìn)行不同程度的免疫,以及山區(qū)養(yǎng)殖戶分散飼養(yǎng)等有關(guān)。

3.1.3 群間分布特點(diǎn)

豬 PR的群間分布,散養(yǎng)戶發(fā)病率最低為 17.85%,小型養(yǎng)殖場(chǎng)次之為 33.33%,中型養(yǎng)殖場(chǎng)較高為48.82%。流行病學(xué)調(diào)查和監(jiān)測(cè)情況顯示,發(fā)生PR疫病群間分布以散養(yǎng)戶、小型規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)多發(fā),中型規(guī)模豬場(chǎng)以PR繁殖障礙類疫病為主。這表明豬群發(fā)病與其飼養(yǎng)規(guī)模關(guān)系密切,散養(yǎng)戶豬群發(fā)病次數(shù)明顯多于中型和小型規(guī)模豬場(chǎng),究其原因主要是散養(yǎng)戶飼養(yǎng)管理和疫病防治技術(shù)水平比中型、小型規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)差。PR的監(jiān)測(cè)說(shuō)明本病與豬群的飼養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短、飼養(yǎng)數(shù)量等因素有關(guān)。

3.2 普洱市豬PR防制對(duì)策

(1)普洱市中、小型豬場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和引種豬時(shí)進(jìn)行 PR檢疫,定期進(jìn)行監(jiān)測(cè),撲殺淘汰 PR野毒感染豬并經(jīng)常進(jìn)行消毒和消滅鼠害。

(2)根據(jù)普洱市豬 PR流行情況,依照免疫程序應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)寧洱、景谷兩縣以及其它各縣中、小型豬場(chǎng)的豬PR免疫接種 。其免疫程序?yàn)?未感染 PR的豬用豬 PR弱毒凍干疫苗免疫接種。種豬每頭肌注 4頭份,乳豬每頭肌注 1頭份,其它豬每頭肌注2頭份,乳豬斷奶后加強(qiáng)免疫 1次。

(3)發(fā)生 PR疫情的豬場(chǎng)應(yīng)將臨床觀察疑似未受感染的母豬和仔豬以及妊娠母豬與已受感染的豬隔離管理,以避免機(jī)械傳播,并進(jìn)行 PR疫苗緊急免疫;發(fā)生 PR的豬舍地面、墻壁、設(shè)施及用具每隔 2～3 d消毒 1次;對(duì) PR帶毒豬要進(jìn)行淘汰,PR病死豬要進(jìn)行無(wú)害化處理。

4 結(jié)論

(1)全面、系統(tǒng)地進(jìn)行 PR流行病學(xué)調(diào)查和自然感染病毒抗體監(jiān)測(cè),界定PR是當(dāng)前對(duì)普洱市養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重的重要疫病種類之一。發(fā)現(xiàn)現(xiàn)階段流行的PR主要臨床表現(xiàn)形式以繁殖障礙和疫病發(fā)生引起一定數(shù)量新生仔豬發(fā)病、死亡為特點(diǎn)。

(2)時(shí)間、空間及群間分布現(xiàn)狀及流行病學(xué)特點(diǎn),總體上顯示出 PR主要發(fā)生于中型和小型養(yǎng)豬場(chǎng),部分縣散養(yǎng)戶 PR的陽(yáng)性率偏高可能與豬的飼養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)有關(guān)。

(3)普洱市豬群疫病時(shí)間、空間及群間分布現(xiàn)狀及流行病學(xué)特點(diǎn),總體上顯示普洱市豬 PR的防制模式是重點(diǎn)加強(qiáng)中、小型豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理和引種檢疫;定期監(jiān)測(cè),撲殺淘汰野毒感染豬;經(jīng)常性消毒和嚴(yán)格按免疫程序進(jìn)行預(yù)防接種;豬場(chǎng)周圍經(jīng)常性滅鼠為主要內(nèi)容的綜合防制措施。

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