亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        氫醌抑制HL-60細(xì)胞分化上調(diào)過(guò)氧化物酶2-Cys過(guò)氧化物氧還蛋白表達(dá)

        2011-05-14 01:08:18韋瀟湘王春雙陳長(zhǎng)艷陸彩玲郭松超李習(xí)藝
        關(guān)鍵詞:單核分化引物

        韋瀟湘,唐 深,王春雙,陳長(zhǎng)艷,陸彩玲,郭松超,李習(xí)藝

        (廣西醫(yī)科大學(xué)1.公共衛(wèi)生學(xué)院;2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;廣西南寧 530021)

        氫醌(hydroquinone,HQ)又名對(duì)苯二酚[C6H(OH)],是苯在生物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物,在苯血液毒性中發(fā)揮重要的作用,可導(dǎo)致再生障礙性貧血、骨髓異常增生綜合征、白血病及淋巴瘤等多種造血系統(tǒng)功能障礙,研究HQ血液毒性機(jī)制對(duì)探討苯的毒性機(jī)制具有重要的意義。前期研究發(fā)現(xiàn),在人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5及人臍血單個(gè)核細(xì)胞中,HQ的毒性可能與過(guò)氧化物酶2-Cys過(guò)氧化物氧還蛋白(peroxiredoxins)(2-Cys Prxs)有關(guān)[1-2]。2-Cys Prxs是細(xì)胞內(nèi)一類抗氧化蛋白家族,它們都有兩個(gè)高度保守的具有氧化還原活性的半胱氨酸殘基,即過(guò)氧化活性的胱氨酸殘基cys51和還原活性的半胱氨酸殘基cys172。2-Cys Prxs在氧化應(yīng)激中發(fā)揮重要的作用[3],保護(hù)細(xì)胞免受氧自由基損害,同時(shí)它們?cè)诩?xì)胞增殖與分化中也起著重要的作用[4]。HL-60細(xì)胞株是人前髓細(xì)胞株,其髓系祖細(xì)胞特性明顯,具有多向分化能力,在豆蔻酰佛波醇(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)或二甲亞砜(DMSO)誘導(dǎo)下可分別向單核系或粒系分化,適用于粒系、單核系分化研究[5-6]。本實(shí)驗(yàn)主要研究HQ對(duì)HL-60細(xì)胞向單核系、粒系分化的影響,并探討2-Cys Prxs在其中的作用。

        1 材料與方法

        1.1 細(xì)胞與試劑

        HL-60細(xì)胞購(gòu)自上海細(xì)胞生物所,IMDM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)海克隆實(shí)驗(yàn)室公司,PMA和HQ購(gòu)自Sigma公司,硝基四氮唑藍(lán)(NBT)購(gòu)自Sanland公司,Cell Counting Kit-8(CCK-8試劑盒)、顯影定影試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所。cDNA合成試劑盒、PCR試劑盒與熒光定量 PCR引物購(gòu)自沈陽(yáng)TaKaRa公司;Trizol購(gòu)自美國(guó) Invitrogen公司,Western印跡抗體購(gòu)自Santa Cruz公司及Fermantas公司,其余試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

        1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

        HL-60細(xì)胞培養(yǎng)于IMDM培養(yǎng)基,含胎牛血淸200 ml·L-1,青霉素 100 kU·L-1,鏈霉素 100 mg·L-1。在37℃,含體積分?jǐn)?shù)為0.05 CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)傳代。

        1.3 HL-60 細(xì)胞染毒

        根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及文獻(xiàn)[2,5-6],細(xì)胞分為正常對(duì)照組、PMA 20 nmol·L-1、PMA 20 nmol·L-1+HQ 1,5 和50 μmol·L-1,以及 1.25%DMSO對(duì)照、DMSO+HQ 1,5 和 50 μmol·L-1組,各組細(xì)胞數(shù)為1×109L-1。HQ用前用無(wú)血清IMDM配制,正常對(duì)照組加入相應(yīng)體積無(wú)血清IMDM。分別在48和96 h收集細(xì)胞。

        1.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

        取各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的HL-60細(xì)胞懸液5 μl推片晾干,乙醇 50 ml·L-1固定 5 min,乙醇 80 ml·L-1固定5 min后晾干,瑞氏-姬姆薩染液染色5~10 min沖洗晾干,光鏡下觀察。

        1.5 NBT還原酶檢測(cè)HL-60細(xì)胞分化

        收集各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的HL-60細(xì)胞,錐蟲(臺(tái)盼)藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活力,取200 μl含有1×1 O5個(gè)活細(xì)胞的細(xì)胞懸液,加入200 μl 1%NBT 溶液含終濃度為2 mg·L-1的佛波酯(PMA)混合,放入37℃孵育60 min,再將細(xì)胞離心后去除上清液,每份標(biāo)本加入200 μl DMSO,在室溫下振蕩20 min,測(cè)波長(zhǎng)570 nm的吸光度值(absorbance,A)[7-8]。A 值越大表明細(xì)胞分化程度越佳。

        1.6 HL-60細(xì)胞增殖檢測(cè)

        參照CCK-8試劑說(shuō)明書收集各組HL-60細(xì)胞,棄原培養(yǎng)液,每組細(xì)胞加入含 CCK-8 100 ml·L-1的培養(yǎng)基,37℃繼續(xù)培養(yǎng)1 h后,測(cè)定A450nm。

        1.7 熒光定量PCR檢測(cè)2-Cys Prxs基因表達(dá)

        1.7.1 總 RNA 制備

        離心收集各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞,棄培養(yǎng)液,加入1 ml Trizol,室溫放置 10 min,加 0.2 ml氯仿,振蕩 15 s,靜置3 min,4℃,12 000×g離心15 min,取水相加入0.5 ml異丙醇,室溫放置10 min,4℃,12 000 ×g離心10 min,75%乙醇洗滌干燥后溶于純焦碳酸二乙酯,紫外分光光度儀檢測(cè)提取總RNA的質(zhì)量和濃度。要求A260/A280在1.8~2.1范圍,并計(jì)算 RNA含量。

        1.7.2 cDNA 的合成

        反應(yīng)體系 20 μl,取隨機(jī)引物(100 μmol·L-1)1 μl,每一份標(biāo)本取總 RNA 1 μg,RNA 酶抑制劑(40 kU·L-1)0.5 μl,dNTP 混合物 (各 10 μmol·L-1)1 μl,5 倍反應(yīng)緩沖液4 μl,逆轉(zhuǎn)錄酶100 U,加純焦碳酸二乙酯至 20 μl。按 42℃ 30 min,95℃ 2 min,進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。合成好的cDNA置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.7.3 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)2-Cys Prxs基因表達(dá)

        20 μl反應(yīng)體系中包括:上下游引物 10 μmol·L-1各 0.8 μl,SYBR ? Premix Ex TaqTM(2 × )10 μl,ROX Reference DyeⅡ(50 × )0.4 μl,雙蒸水 7 μl,cDNA標(biāo)本1 μl。各基因擴(kuò)增片段長(zhǎng)度如下:PrxⅠ為141 bp,PrxⅡ?yàn)?29 bp,PrxⅢ為98bp,PrxⅣ為75 bp,引物序列見(jiàn)表 1。按 95℃,30 s;40個(gè)循環(huán)(95℃,5 s;60℃,34 s)進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)結(jié)束后,儀器自動(dòng)記錄每個(gè)反應(yīng)管中的熒光信號(hào)到達(dá)所設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)(threshold cycles,Ct)值。以β肌動(dòng)蛋白基因?yàn)閮?nèi)參,采用雙ΔCt法計(jì)算目的基因表達(dá)量,每個(gè)樣品目的基因表達(dá)量除以內(nèi)參基因β肌動(dòng)蛋白表達(dá)量即為樣品基因相對(duì)含量[8]。以2-(實(shí)驗(yàn)組ΔCt-對(duì)照組ΔCt)表示實(shí)驗(yàn)組目的基因相對(duì)于正常對(duì)照組表達(dá)的變化倍數(shù)。其中實(shí)驗(yàn)組ΔCt和對(duì)照組ΔCt分別是實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組目的基因與內(nèi)參基因β肌動(dòng)蛋白的Ct的差值。

        表1 過(guò)氧化物氧還蛋白(Prx)Ⅰ,PrxⅡ,PrxⅢ,PrxⅣ及β肌動(dòng)蛋白引物序列Tab.1 Primer of peroxiredoxin(Prx)Ⅰ,PrxⅡ,PrxⅢ,PrxⅣand β-actin in real time PCR

        1.8 Western印跡法檢測(cè)PrxⅢ蛋白的表達(dá)

        各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞用Trizol抽提RNA的同時(shí)抽提總蛋白,用Bradford法定量蛋白,調(diào)整總蛋白上樣量,以β肌動(dòng)蛋白為內(nèi)參照。SDS-PAGE電泳后,0.1 A恒流轉(zhuǎn)膜35 min;5%脫脂牛奶封閉1 h,一抗4℃孵育過(guò)夜,TBST洗膜3次,每次10 min,二抗常溫孵育1 h,TBST洗膜3次,每次10 min,在暗房進(jìn)行化學(xué)發(fā)光試劑染膜后顯影成像。以目標(biāo)條帶與β肌動(dòng)蛋白條帶積分吸光度(integrated absorbance,IA)的比值定量蛋白表達(dá)。

        1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        2 結(jié)果

        2.1 氫醌對(duì)HL-60細(xì)胞形態(tài)的影響

        圖1染色結(jié)果顯示,正常對(duì)照組細(xì)胞胞體較大,胞核大而圓,胞質(zhì)堿深染,核質(zhì)比例大。DMSO,HQ+DMSO組可見(jiàn)細(xì)胞胞體明顯縮小,胞核凹陷,核質(zhì)比例縮小,桿狀核、分葉核細(xì)胞增多,細(xì)胞趨于向成熟粒系分化。PMA和HQ+PMA組可見(jiàn)部分細(xì)胞易貼壁,細(xì)胞核漿比例變小,核形狀不規(guī)則,有明顯的扭曲或折疊,呈腎形或U形、馬蹄形等,呈現(xiàn)向單核或巨噬細(xì)胞分化的特征。

        圖1 氫醌(HQ)對(duì)HL-60細(xì)胞形態(tài)的影響 (瑞氏-姬姆薩染色 ×400).A:正常對(duì)照細(xì)胞,箭頭示細(xì)胞胞核大而圓;B:豆蔻酰佛波醇乙酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)處理細(xì)胞48 h后,箭頭示U形細(xì)胞;C:1.25%二甲亞砜(DMSO)處理細(xì)胞96 h后,箭頭示多葉核細(xì)胞;D:PMA+HQ 50 μmol·L-1處理細(xì)胞48 h后,箭頭示不規(guī)則核細(xì)胞;E:DMSO+HQ 5 μmol·L-1處理細(xì)胞96 h后,箭頭示細(xì)胞胞核凹陷;F:DMSO+HQ 50 μmol·L-1處理細(xì)胞96 h后,箭頭示多葉核細(xì)胞.Fig.1 Effect of hydroquinone(HQ)on morphological changes in HL-60 cells(Wright Giemsa ×400).

        2.2 氫醌對(duì)HL-60細(xì)胞分化的影響

        表2所示各實(shí)驗(yàn)組的HL-60細(xì)胞對(duì)NBT還原力。與正常對(duì)照組比較,PMA組和DMSO組HL-60細(xì)胞NBT還原力明顯增加(P<0.05),說(shuō)明PMA和DMSO可分別誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞向單核細(xì)胞和粒細(xì)胞分化。與PMA和DMSO對(duì)照組比較,PMA+HQ和DMSO+HQ各組細(xì)胞對(duì)NBT還原力均下降,PMA+HQ 5 和 50 μmol·L-1組與 PMA 組比較有明顯差異(P <0.05),說(shuō)明 HQ 1 和5 μmol·L-1可以抑制 HL-60 細(xì)胞向單核系分化;DMSO+HQ 50 μmol·L-1組和DMSO對(duì)照組比較有顯著差異(P<0.05),表明HQ 50 μmol·L-1可抑制細(xì)胞向粒系分化。

        表2 氫醌對(duì)HL-60細(xì)胞分化的影響Tab.2 Effect of HQ on differentiation of HL-60 cells

        2.3 氫醌對(duì)HL-60細(xì)胞增殖的影響

        如表 3 所示,HQ 50 μmol·L-1+PMA 作用于HL-60細(xì)胞后,細(xì)胞CCK-8還原值與單獨(dú)PMA組比較明顯下降;HQ 5,50 μmol·L-1+DMSO 組細(xì)胞CCK-8的還原值與單獨(dú)DMSO組比較明顯下降。這表明 HQ 5 和 50 μmol·L-1與誘導(dǎo)劑的共同作用可以抑制HL-60細(xì)胞增殖。

        表3 氫醌對(duì)HL-60細(xì)胞增殖的影響Tab.3 Effect of HQ on proliferation of HL-60 cells

        2.4 氫醌對(duì)HL-60細(xì)胞2-Cys Prxs基因表達(dá)的影響

        總RNA凝膠電泳后,28 s亮度明顯強(qiáng)于18 s,5 s很弱,說(shuō)明RNA完整性較好(圖2),分光光度計(jì)測(cè)A260/A280在1.8~2.1。各目的基因在 HL-60 細(xì)胞表達(dá)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果顯示,PrxⅠ~PrxⅣ各引物融解曲線均呈清晰的單一峰型,說(shuō)明設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)增出的擴(kuò)增產(chǎn)物沒(méi)有非特異性擴(kuò)增,引物可用。各基因表達(dá)Ct值在16~24,各基因的相對(duì)表達(dá)量在0.15~2。與正常對(duì)照組比較,PMA組2-Cys Prxs基因表達(dá)水平均有降低的趨勢(shì),PrxⅢ的表達(dá)水平與正常對(duì)照組比較有明顯差異(P<0.05);DMSO組的2-Cys Prxs基因表達(dá)水平顯著降低(P<0.01)。給予 HQ 刺激后,在PMA+HQ 5 μmol·L-1組,PrxⅢ,PrxⅣ的表達(dá)高于對(duì)照組(P<0.01),在PMA+HQ 50 μmol·L-1組,PrxⅠ,PrxⅢ,PrxⅣ的表達(dá)水平與正常對(duì)照組和PMA組相比明顯增高(P<0.01)。PrxⅡ在各處理組的表達(dá)水平低于對(duì)照組,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而隨著 HQ 濃度的增加,只有 HQ 50 μmol·L-1+DMSO組PrxⅠ,PrxⅢ的表達(dá)水平與DMSO組相比明顯增高(P <0.01),HQ 5 μmol·L-1+1.25%DMSO各組與單獨(dú)DMSO組比較,2-Cys Prxs各基因表達(dá)水平的差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表4,表5)。

        圖2HQ作用HL-60細(xì)胞后的核蛋白體RNA瓊脂糖凝膠電泳圖.M:標(biāo)志物;條帶1~5:分別為正常對(duì)照,PMA,PMA+HQ1,5 和50 μmol·L-1組.Fig.2 RNA agarose gel electrophoresis of HL-60 cells affected by HQ.

        表4 HQ對(duì)PMA誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞向單核系分化過(guò)程中過(guò)氧化物酶2-Cys過(guò)氧化物氧還蛋白(2-Cys Prx)基因表達(dá)的影響Tab.4 Effect of HQ on expression of 2-Cys peroxiredoxins(2-Cys Prxs)in HL-60 cells during monocytic differentiation induced by PMA

        表5 HQ對(duì)DMSO誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞向粒系分化過(guò)程中2-Cys Prxs基因表達(dá)的影響Tab.5 Effect of HQ on expression of 2-Cys Prxs in HL-60 cells during granulocytes differentiation induced by DMSO

        2.5 氫醌對(duì)HL-60細(xì)胞PrxⅢ蛋白表達(dá)的影響

        如圖3和圖4所示,PMA對(duì)照組和DMSO對(duì)照組PrxⅢ蛋白表達(dá)水平均低于正常對(duì)照組。在PMA誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)組中,給予HQ共同處理后,各組PrxⅢ蛋白表達(dá)量有顯著增加的趨勢(shì)(P<0.01)。在DMSO誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)組中,只有在HQ 50 μmol·L-1+DMSO組PrxⅢ表達(dá)量明顯高于DMSO對(duì)照組(P<0.01)但低于正常對(duì)照組(P<0.05)。蛋白免疫印跡結(jié)果與熒光定量PCR結(jié)果是一致的,說(shuō)明PrxⅢmRNA表達(dá)水平變化和蛋白表達(dá)水平的變化是一致的。

        圖3HQ對(duì)PMA誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞向單核系分化過(guò)程中PrxⅢ蛋白表達(dá)的影響.A:Western印跡;B:半定量結(jié)果.1~5分別為正常對(duì)照,PMA對(duì)照,PMA+HQ 1,5和50 μmol·L-1組.±s,n=6.*P<0.05,與正常對(duì)照組比較;##P<0.01,與PMA對(duì)照組比較.Fig.3 Effect of HQ on expression of PrxⅢ protein in HL-60 cells during monocytic differentiation induced by PMA detected by Western blotting.

        圖4HQ對(duì)1.25%DMSO誘導(dǎo)的HL-60細(xì)胞向粒系分化過(guò)程中PrxⅢ蛋白表達(dá)的影響.A:Western印跡;B:半定量結(jié)果.1~5分別為正常對(duì)照,DMSO對(duì)照,DMSO+HQ 1,5和50 μmol·L-1組.±s,n=6.*P<0.05,與正常對(duì)照組比較;##P<0.01,與DMSO組比較.Fig.4 Effect of HQ on expression of PrxⅢ protein in HL-60 cells during grannlocytes differentiation induced by 1.25%DMSO detected by Western blotting.

        3 討論

        本研究結(jié)果顯示,HQ作用后,PMA誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞向單核系分化受到抑制,與Oliveira等[7]所報(bào)道的一致。但關(guān)于HQ對(duì)HL-60細(xì)胞向粒系分化的影響,Oliverira[7]與 Hedli等[9]報(bào)道不一,可能是由于HQ劑量不同所致。而在本實(shí)驗(yàn)中,HQ 1 μmol·L-1對(duì)粒系分化無(wú)影響,但較高劑量HQ可抑制細(xì)胞向粒系分化,這些結(jié)果提示細(xì)胞向單核系分化較向粒系分化對(duì)HQ所引起的細(xì)胞毒性作用更為敏感。在本實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn),較高劑量HQ抑制分化的同時(shí)伴隨細(xì)胞增殖的抑制,說(shuō)明一定劑量HQ可以影響細(xì)胞的分化與增殖,它可能就是通過(guò)這種途徑而發(fā)揮其在血液系統(tǒng)中的毒性作用。

        本研究結(jié)果顯示,PrxⅠ,PrxⅢ和PrxⅣ與HQ對(duì)HL-60細(xì)胞分化和增殖抑制的生物學(xué)效應(yīng)有關(guān)。其中PrxⅢ在所有分化抑制的細(xì)胞組表達(dá)顯著增高,而在分化未受到抑制的組未見(jiàn)誘導(dǎo)表達(dá),提示其在HQ抑制分化過(guò)程中扮演重要角色。但在本次實(shí)驗(yàn)中,未能用RNAi技術(shù)抑制PrxⅢmRNA表達(dá)來(lái)進(jìn)一步觀察PrxⅢ是否真正地參與HQ抑制HL-60細(xì)胞分化的過(guò)程,因此還不能說(shuō)明PrxⅢ與此過(guò)程有真正的因果關(guān)系,這在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中會(huì)繼續(xù)研究。PRXⅢ定位于線粒體,在線粒體抗氧化防御機(jī)制中起著重要作用,并且參與細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)化和凋亡等活動(dòng)[10-11]。Yang 等[10]研究表明 PrxⅢ與紅細(xì)胞的分化有關(guān),Wonsey等[11]也發(fā)現(xiàn)PrxⅢ是Myc的靶基因,參與Myc介導(dǎo)的增殖、凋亡和腫瘤轉(zhuǎn)化。但PrxⅢ在粒系分化中的作用如何尚未見(jiàn)報(bào)道,其在HQ對(duì)HL-60細(xì)胞分化影響過(guò)程中的具體作用及機(jī)制如何,其表達(dá)水平的變化是分化的原因還是結(jié)果等問(wèn)題都還有待進(jìn)一步研究。

        [1] Li X,Tang S,Huang H,Yang L,Liu J,Zhuang Z.Induction of a cell-survival adaptive response in MRC-5 cells by hydroquinone[J].Mutat Res,2008,652(2):180-185.

        [2] 唐 深,李習(xí)藝,陸彩玲,曾曉春,肖德強(qiáng),孫 斌,等.氫醌刺激臍血單個(gè)核細(xì)胞適應(yīng)性反應(yīng)基因表達(dá)[J].中國(guó)公共衛(wèi)生,2009,25(11):1339-1340.

        [3] Fujii J,Ikeda Y.Advances in our understanding of peroxiredoxin,a multifunctional,mammalian redox protein[J].Redox Rep,2002,7(3):123-130.

        [4] Butterfield LH,Merino A,Golub SH,Shau H.From cytoprotection to tumor suppression:the multifactorial role of peroxiredoxins[J].Antioxid Redox Signal,1999,1(4):385-402.

        [5] Zheng X,Ravatn R,Lin Y,Shih WC,Rabson A,Strair R,et al.Gene expression of TPA induced differentiation in HL-60 cells by DNA microarray analysis[J].Nucleic Acids Res,2002,30(20):4489-4499.

        [6] Saegusa S,Totsuka M,Kaminogawa S,Hosoi T.Saccharomyces cerevisiae and Candida albicans stimulate cytokine secretion from human neutrophil-like HL-60 cells differentiated with retinoic acid or dimethylsulfoxide[J].Biosci Biotechnol Biochem,2009,73(12):2600-2608.

        [7] Oliveira NL,Kalf GF.Induced differentiation of HL-60 promyelocytic leukemia cells to monocyte/macrophages is inhibited by hydroquinone,a hematotoxic metabolite of benzene[J].Blood,1992,79(3):627-633.

        [8] Li D,Wang Z,Chen H,Wang J,Zheng Q,Shang J,et al.Isoliquiritigenin induces monocytic differentiation of HL-60 cells[J].Free Radic Biol Med,2009,46(6):731-736.

        [9] Hedli CC,Rao NR,Reuhl KR,Witmer CM,Snyder R.Effects of benzene metabolite treatment on granulocytic differentiation and DNA adduct formation in HL-60 cells[J].Arch Toxicol,1996,70(3-4):135-144.

        [10] Yang HY, Jeong DK, Kim SH, Chung KJ,Cho EJ,Yang U,et al.The role of peroxiredoxinⅢ on late stage of proerythrocyte differentiation[J].Biochem Biophys Res Commun,2007,359(4):1030-1036.

        [11] Wonsey DR, Zeller KI, Dang CV. The c-Myc target gene PRDX3 is required for mitochondrial homeostasis and neoplastic transformation[J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99(10):6649-6654.

        猜你喜歡
        單核分化引物
        DNA引物合成起始的分子基礎(chǔ)
        高中生物學(xué)PCR技術(shù)中“引物”相關(guān)問(wèn)題歸類分析
        兩次中美貨幣政策分化的比較及啟示
        SSR-based hybrid identification, genetic analyses and fingerprint development of hybridization progenies from sympodial bamboo (Bambusoideae, Poaceae)
        分化型甲狀腺癌切除術(shù)后多發(fā)骨轉(zhuǎn)移一例
        火炬松SSR-PCR反應(yīng)體系的建立及引物篩選
        一種簡(jiǎn)單的分離、培養(yǎng)及鑒定小鼠外周血單核巨噬細(xì)胞方法的建立
        Cofilin與分化的研究進(jìn)展
        單核Ru(Ⅲ)-edta類配合物的合成﹑結(jié)構(gòu)及性質(zhì)研究
        苯并咪唑衍生的單核鈷(Ⅱ)和單核鎳(Ⅱ)配合物與DNA和蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)性及細(xì)胞毒活性研究
        亚洲妇女av一区二区| 国产在线不卡一区二区三区| 日本高清一区二区三区水蜜桃 | 日本亚洲中文字幕一区| 狠狠躁日日躁夜夜躁2020| 国产免费又色又爽又黄软件 | 国产在线一区二区视频免费观看| 天堂丝袜美腿在线观看| 国产成人av综合色| 国内精品视频一区二区三区| 日韩午夜在线视频观看| 二区视频在线免费观看| 日韩aⅴ人妻无码一区二区| 国产不卡一区二区三区免费视| 亚洲青涩在线不卡av| 国产视频一区二区在线免费观看| 亚洲中文字幕在线第二页| 国产亚洲精品看片在线观看| 国产精品久久国产精品久久| 公厕偷拍一区二区三区四区五区| 日本无码人妻波多野结衣| 无码中文日韩Av| 成人爽a毛片免费网站中国| 极品粉嫩嫩模大尺度无码视频 | 国精产品一区一区三区| 亚洲国产精品成人无码区| av少妇偷窃癖在线观看| 激情五月六月婷婷俺来也| 久久综合狠狠综合久久综合88| 亚洲深深色噜噜狠狠爱网站 | 亚洲三级黄色| 精品专区一区二区三区| 蜜桃av精品一区二区三区| 国产精品福利视频一区| 亚洲大尺度动作在线观看一区| 精品三级国产一区二区三| 孕妇特级毛片ww无码内射| 亚洲午夜无码AV不卡| 国产视频一区二区三区久久亚洲| 日本高清视频wwww色| 亚洲欲色欲香天天综合网|