張曉遠(yuǎn)，王建安，劉國(guó)順，畢慶文，王海明，黎 根，王 瑞，謝東明

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草學(xué)院，河南 鄭 州450002;2.臨滄市煙草公司，云南 臨滄677000;3.湖北中煙工業(yè)有限責(zé)任公司，湖北武漢430051)

煙葉腺毛分泌物的主要化學(xué)成分是萜醇、烷烴、糖酯、表面蠟及微量組分和揮發(fā)性的醛、酮、酸等，是構(gòu)成是烤煙香氣物質(zhì)組成部分［1］，其中茄酮及其衍生物是烤煙重要的致香前體化合物［2］，本身具有很好的香氣［3］.煙葉腺毛一般占總表皮毛的85%［4］，同時(shí)與煙草生長(zhǎng)過(guò)程中抗蟲(chóng)性亦密切相關(guān)［5］.葉面分泌物的組分、數(shù)量和種類(lèi)受遺傳、環(huán)境和栽培條件影響［5～9］，目前葉面成熟過(guò)程中分泌物動(dòng)態(tài)研究相對(duì)較少.K 326和云煙87是中國(guó)烤煙主栽品種，每年種植面積約占51.9%，因此，研究這2個(gè)品種烤煙成熟過(guò)程中腺毛分泌物中生成量，為提高烤煙香氣質(zhì)量以及成熟采收奠定理論支撐具有現(xiàn)實(shí)意義.

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)于2008年在湖北省宣恩縣、來(lái)鳳縣和利川縣進(jìn)行，供試品種為K 326和云煙87(簡(jiǎn)寫(xiě)YY 87).2008－05－05移栽，行距120 cm，株距50 cm，施用純 N 112.5 kg·hm－2，m(N)∶m(P2O5)∶m(K2O)=1∶1.5∶3，規(guī)范化栽培管理.煙葉團(tuán)棵后，選取大小長(zhǎng)勢(shì)一致的煙株掛牌標(biāo)記，中部煙葉(10～12葉位)從移栽后60 d開(kāi)始取樣，上部煙葉(16～18葉位)從移栽后75 d開(kāi)始取樣，每隔5 d取1次樣，直至烘烤采收結(jié)束.

1.2 試驗(yàn)方法

取樣時(shí)，每個(gè)葉片在葉尖、葉中、葉基部的主脈兩側(cè)各取1小圓片(直徑為18 mm)，共取18個(gè)小圓片，各試驗(yàn)點(diǎn)每個(gè)處理取3次重復(fù).

處理方法:取50 mL的燒杯A，倒入20 mL的CH2Cl2，將葉盤(pán)浸提萃取4次，每次時(shí)間為2 s，期間輕輕搖晃.取50 mL的燒杯 B，倒入20 mL的CH2Cl2，將浸提過(guò)的葉盤(pán)再提取4次，每次時(shí)間為2 s，期間輕輕搖晃.合并A液和B液，CH2Cl2涮洗燒杯，用10 g無(wú)水Na2SO4過(guò)濾，棕色瓶中保存.

加入標(biāo)樣500 μL(硝基苯)，濃縮裝置濃縮至標(biāo)準(zhǔn)的1 mL，采用內(nèi)標(biāo)法GC－MS進(jìn)樣定性定量.經(jīng)前處理制備得到的分析樣品，由GC－MS鑒定結(jié)果和NIST02庫(kù)檢索定性.色譜柱:DB－5MS(30 m×0.25 mm.i.d.× 0.25 μm d.f.);載氣及流速:He 0.8 mL·min－1;進(jìn)樣口溫度:250℃;傳輸線溫度:280℃;升溫程序:50℃ (2 min)12℃·min－1→180℃ (2 min)4℃·min－1→210℃ (5 min)3℃·min－1→240 ℃ (30 min);分流比:1∶10;進(jìn)樣量:2 μL;電離能:70 eV;質(zhì)量數(shù)范圍:35～500 amu.

2 結(jié)果與分析

2.1 不同烤煙品種成熟過(guò)程中腺毛分泌物中茄酮含量的變化

在烤煙成熟過(guò)程中，2個(gè)品種中部葉煙葉茄酮含量相差不大(圖1－A)，均表現(xiàn)為雙峰曲線，分別在移栽后65和85 d達(dá)到了2個(gè)高峰，在第1個(gè)高峰，K 326比云煙87含量高143.6%;在第2個(gè)高峰，K 326茄酮含量為2.48 mg·m－2，云煙87為3.51 mg·m－2，K 326 比云煙87 含量低29.3%.上部葉含量曲線較中部葉差異大，含量的變化趨勢(shì)也為雙峰曲線，但達(dá)到高峰的時(shí)間不盡相同，同時(shí)后期含量變化趨勢(shì)也不同，表現(xiàn)在移栽后85 d達(dá)到第1個(gè)高峰，K 326茄酮含量為3.31 mg·m－2，云煙87為 6.03 mg·m－2，K 326比云煙 87低了45.1%;到達(dá)第2個(gè)高峰的時(shí)間不同，K 326在移栽后100 d，為7.20 mg·m－2，而云煙87在移栽后105 d，為 6.65 mg·m－2，K 326 比云煙 87 含量高7.6%，達(dá)到高峰的時(shí)間提前了5 d;110 d后K 326顯示上升趨勢(shì)，云煙87的含量下降，直至采收結(jié)束.

2.2 不同烤煙品種成熟過(guò)程中腺毛分泌物中生物堿含量的變化

生物堿主要包括煙堿、降煙堿、新煙堿和假木賊堿，以及可鐵寧、去氫去甲基煙堿和二烯煙堿［10］.成熟過(guò)程中，2個(gè)品種生物堿含量整體上云煙87＞K 326(圖1－B).從部位上分析，上部葉生物堿含量均表現(xiàn)出先升高再降低的趨勢(shì)，達(dá)到最大值的時(shí)間差別較大，K 326在移栽后90 d達(dá)到最高，為142.10 mg·m－2，云煙87在移栽后115 d達(dá)到最高后，為334.76 mg·m－2，K 326比云煙87低了57.56%，提前了25 d.K 326和云煙87的中部煙葉纖毛分泌物的生物堿含量均在移栽后85 d達(dá)到最高，分別為93.74和269.18 mg·m－2，K 326比云煙87低了65.2%.

2.3 不同烤煙品種成熟過(guò)程中腺毛分泌物中西柏三烯二醇含量的變化

2個(gè)品種在烤煙成熟過(guò)程中西柏三烯二醇含量的變化趨勢(shì)不盡相同(圖1－C)，K 326中部葉西柏三烯二醇的含量相對(duì)較低，并且表現(xiàn)為先升高再降低，然后再升高的變化趨勢(shì)，在移栽后75 d達(dá)到最高值，之后開(kāi)始降低，在移栽后85 d降到最低為2.27 mg·m－2，然后再上升;云煙87中部葉西柏三烯二醇的含量表現(xiàn)為先升高再降低的變化趨勢(shì)，在移栽后85 d達(dá)到最高，為37.90 mg·m－2.K 326上部葉表現(xiàn)為雙峰曲線，分別在移栽后80和100 d出現(xiàn)2個(gè)高峰，第1個(gè)高峰含量大于第2個(gè)高峰;云煙87表現(xiàn)為先升高再降低的趨勢(shì)，在移栽后110 d達(dá)到最高，為36.79 mg·m－2，然后開(kāi)始降低.

圖1 成熟過(guò)程中烤煙腺毛各類(lèi)分泌物變化Fig.1 Changes of various secretions of flue-cured tobacco trichome exudates during maturity

2.4 不同烤煙品種成熟過(guò)程中腺毛分泌物中其他物質(zhì)含量的變化

其他類(lèi)物質(zhì)主要包括易揮發(fā)的酸、醇、醛、酮、脂和脂肪烴，以及未知成分.在烤煙成熟過(guò)程中2個(gè)品種有相似的變化規(guī)律(圖1－D)，煙葉中其他物質(zhì)含量均表現(xiàn)為先降低再升高，然后再降低的變化趨勢(shì).中部葉K 326的其他物質(zhì)含量值在移栽后80 d降到最低，然后升高，在移栽后85 d達(dá)到最高，之后再次降低;云煙87中部葉其他物質(zhì)含量在移栽后75 d降到最低，然后升高，在移栽后85 d達(dá)到最高，之后再次降低;K 326其他物質(zhì)含量降到最低的時(shí)間比云煙87推遲5 d，且在成熟過(guò)程中變化范圍不大，在其他物質(zhì)含量達(dá)到最高時(shí)K 326比云煙87其他物質(zhì)含量低了37.6%.

K 326上部葉其他物質(zhì)含量在移栽后85 d降到最低，然后升高，在移栽后95 d達(dá)到最高值，之后再次降低;云煙87上部葉其他物質(zhì)含量在移栽后90 d降到最低，為108.77 mg·m－2，然后升高，在移栽后100 d達(dá)到150.10 mg·m－2，之后再次降低;K 326上部葉其他物質(zhì)含量在移栽后75 d比云煙87低了53.4%，在降到最低時(shí)K 326比云煙87低了30.4%，在移栽95 d后，2個(gè)品種其他物質(zhì)含量差別不大，但是在105 d之后又略有波動(dòng).

2.5 不同烤煙品種成熟過(guò)程中腺毛分泌物總量的變化

圖2是不同烤煙品種腺毛分泌物總量的變化趨勢(shì)，2個(gè)品種的曲線變化基本相同.2個(gè)品種腺毛分泌物總量表現(xiàn)為云煙87＞K 326，同一品種就部位而言表現(xiàn)為，上部葉＞中部葉.各部位腺毛分泌物總量表現(xiàn)出先升高再降低的趨勢(shì)(圖2).K 326和云煙87的中部煙葉的腺毛分泌物總量均在移栽后85 d達(dá)到最高，分別為185.48和450.11 mg·m－2，K 326比云煙87低了58.8%，但上部葉腺毛分泌物總量的最大值卻出現(xiàn)在不同的時(shí)期，K 326在移栽后90 d達(dá)到最高，為374.94 mg·m－2，云煙87在移栽后 100 d，為 494.58 mg·m－2，K 326 比云煙87低了24.4%;但移栽后105 d均出現(xiàn)一段相對(duì)穩(wěn)定階段，表現(xiàn)為云煙87總量大于K 326.

圖2 成熟過(guò)程中烤煙腺毛分泌物總量的變化Fig.2 Changes of total secretions of flue-cured tobacco trichome exudates during maturity

3 討論與結(jié)論

3.1 不同烤煙品種成熟過(guò)程中腺毛分泌物中茄酮生成的種類(lèi)

烤煙成熟過(guò)程中3個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的相同品種腺毛分泌物相同，不同品種的腺毛分泌物的成分不同，檢測(cè)出K 326已知物質(zhì)有11種，分別為十二烷、十四烷、十六烷、十六酸、苯甲酸乙酯、鄰苯二甲酸-2-乙基己酯、2-環(huán)戊烯酮、茄酮、煙堿、去氫去甲基煙堿和西柏三烯二醇;3種未知成分，共14種.檢測(cè)出云煙87已知物質(zhì)為16種，分別為十二烷、十四烷、十六烷、3-己烯-1-醇、壬醛、苯甲酸乙酯、2-環(huán)戊烯酮、茄酮、可鐵寧、煙堿、去甲基煙堿、二烯煙堿、西柏三烯二醇和3種脂肪烴;未知成分5種，共21種.

云煙87腺毛分泌物的含量多于 K 326，但K 326腺毛分泌物中特有存在的物質(zhì)有2種，為十六酸和鄰苯二甲酸-2-乙基己酯，云煙87特有的物質(zhì)有6種，為3-己烯-1-醇、壬醛、可鐵寧、二烯煙堿和3種脂肪烴.

3.2 腺毛分泌物總量變化

陳淑珍等［10］研究發(fā)現(xiàn)隨葉片成熟度的增進(jìn)，腺毛密度先增加，后又降低，以適熟時(shí)最高.本試驗(yàn)成熟過(guò)程中腺毛分泌物總量先上升后下降的趨勢(shì)，印證了腺毛分泌物含量與腺毛的數(shù)量變化規(guī)律的正相關(guān)性［11］.因此，只有采收適熟葉片，才能保證葉片多細(xì)胞腺毛密度最大，分泌物最多，產(chǎn)生的腺毛類(lèi)分泌物含量最充足.

本試驗(yàn)條件下，云煙87的腺毛含量高于K 326.李永平等［12］研究了K 326和云煙87單料煙評(píng)吸的感官香氣評(píng)價(jià)，得出了云煙87優(yōu)于K 326.烤煙腺毛分泌物的含量與單料煙評(píng)吸的感官香氣質(zhì)量是否相關(guān)性或具有多大的相關(guān)性，還需要做進(jìn)一步研究.

3.3 腺毛分泌物主要成分變化

腺毛分泌物主要成分是西柏三烯二醇和茄酮［13］，2個(gè)烤煙品種茄酮含量表現(xiàn)為雙峰曲線，中部葉分別在移栽后65和85 d達(dá)到2個(gè)高峰，上部葉分別在在85和100～105 d達(dá)到第2個(gè)高峰，但K 326比云煙87早5 d;2個(gè)烤煙品種各部位西柏三烯二醇含量變化趨勢(shì)也不一致，這與楊鐵釗等［11］在河南煙區(qū)研究的結(jié)論也不太一致.郭紫明等［14］認(rèn)為雨水直接沖刷煙葉表面造成腺毛損傷，將導(dǎo)致煙葉表面分泌物中許多致香物質(zhì)的含量降低.恩施州烤煙在成熟期間處于多雨的氣候條件下，大田后期雨水沖刷造成腺毛分泌物主要成分差異對(duì)不同品種的影響程度，還需要對(duì)品種、腺毛分泌物和腺毛數(shù)量關(guān)系的進(jìn)行深入研究.

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