王愛學(xué)，李玉平，趙子申，盧會秀

（河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科，河北石家莊 050000）

CD1a、Caspase-3在暈痣皮損表皮內(nèi)表達(dá)的研究

王愛學(xué)，李玉平*，趙子申，盧會秀

（河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科，河北石家莊 050000）

目的檢測CD1a、半胱氨酸蛋白水解酶-3（CaSpaSe-3），探討暈痣發(fā)病機(jī)制及細(xì)胞凋亡在其中的作用。方法采用免疫組織化學(xué)SP法檢測CD1a、CaSpaSe-3在暈痣患者23例和皮內(nèi)痣患者15例皮損表皮內(nèi)的表達(dá)。結(jié)果暈痣皮損表皮內(nèi)CD1a、CaSpaSe-3的表達(dá)水平顯著高于皮內(nèi)痣（P＜0.05）。結(jié)論CD1a、CaSpaSe-3在暈痣皮損表皮內(nèi)中的高表達(dá)可能與暈痣發(fā)病有關(guān)。

暈痣；半胱氨酸內(nèi)肽酶類；細(xì)胞凋亡

暈痣又名離心性后天性白斑［1］，是臨床上常見的色素性皮膚病，主要特征為以痣細(xì)胞痣為中心，周圍出現(xiàn)色素減退斑，中央痣細(xì)胞痣通常為混合痣或皮內(nèi)痣，大都呈良性［2］。其發(fā)病機(jī)制至今未完全明了，目前較為一致的看法傾向于細(xì)胞免疫，特別是以CD S+為主的細(xì)胞毒性T細(xì)胞清除痣細(xì)胞是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，郎格漢斯細(xì)胞協(xié)同黑素細(xì)胞激發(fā)T細(xì)胞，介導(dǎo)痣細(xì)胞的破壞［3］。本文旨在研究CD1a、半胱氨酸蛋白水解酶-3（CaSpaSe-3）在暈痣皮損內(nèi)的表達(dá)，探討郎格漢斯細(xì)胞及細(xì)胞凋亡在暈痣發(fā)生機(jī)制中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料：標(biāo)本為我科病理室1993年1月—200S年12月存檔的石蠟包埋組織，均為經(jīng)臨床和病理學(xué)診斷確診的暈痣和皮內(nèi)痣。暈痣患者23例，男性9例、女性14例，年齡S～35歲，平均（16.S7± 6.30）歲。皮內(nèi)痣患者15例，男性6例，女性9例，年齡10～35歲，平均（16.2±6.3）歲。2組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。具有可比性。

1.2 主要試劑：鼠抗人CD1a單克隆抗體和兔抗人CaSpaSe-3多克隆抗體、試劑盒SP-9002和濃縮型DAB試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法：將石蠟切片脫蠟至水化；以3%過氧化氫溶液滅活內(nèi)源性過氧化物酶的活性；微波修復(fù)抗原15min，滴加5%正常山羊血清封閉液，依次滴加一抗（CD1a工作濃度為1∶20稀釋，CaSpaSe-3工作濃度為1∶300稀釋）、生物素標(biāo)記的二抗工作液、辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液；DAB染色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。以PBS代替一抗為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定

1.4.1 CD1a的表達(dá)：細(xì)胞膜呈黃褐色的樹枝狀突起的細(xì)胞為CD1a陽性的郎格漢斯細(xì)胞，每例取3張切片，每張切片選取CD1a陽性細(xì)胞分布最密集的5個區(qū)，在光鏡高倍視野下（×400）計數(shù)CD1a陽性細(xì)胞的數(shù)目。取平均值作為郎格漢斯細(xì)胞數(shù)。

1.4.2 CaSpaSe-3的表達(dá)：細(xì)胞漿伴核內(nèi)有黃色至棕黃色顆粒沉積者為陽性染色細(xì)胞，參照Shimizu［4］和Garcia［5］等的方法對標(biāo)記物的表達(dá)結(jié)果進(jìn)行半定量分級。根據(jù)染色強(qiáng)度評分，不著色（-）為0分，淺黃色（+）為1分，深黃色（++）為2分，棕黃色（+++）為3分；根據(jù)表達(dá)范圍評分，表皮無表達(dá)（-）為0分，表皮偶有表達(dá)（+）為1分，表皮中下層表達(dá)（++）為2分，表皮全層表達(dá)（+++）為3分。以上兩項相加結(jié)果等于0或1為陰性（-），2為弱陽性（+），3為陽性（++），≥4為強(qiáng)陽性（+ ++）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理。計量資料以±s表示，組間比較用t檢驗；等級資料比較采用秩和檢驗（Wilcoxon W法）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 CD1a在暈痣和皮內(nèi)痣皮損表皮內(nèi)的表達(dá)：CD1a在郎格漢斯細(xì)胞膜著色呈黃褐色（圖1，2），暈痣和皮內(nèi)痣皮損表皮內(nèi)CD1a陽性細(xì)胞數(shù)（每高倍視野）分別為（23.6±3.75）個、（20.1±4.14）個，2組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 CD1a在暈痣皮損表皮內(nèi)的表達(dá)（SP×400）Figure 1 The expreSSion of CD1a in the epidermiS of halo nevuS（SP× 400）

圖2 CD1a在皮內(nèi)痣皮損表皮內(nèi)的表達(dá)（SP×400）Figure 2 The expreSSion of CD1a in the epidermiS of intradermal nevuS （SP×400）

2.2 CaSpaSe-3在暈痣和皮內(nèi)痣皮損表皮內(nèi)的表達(dá)：根據(jù)染色強(qiáng)度評分，表達(dá)結(jié)果見表1；根據(jù)表達(dá)范圍評分，表達(dá)結(jié)果見表2；2組表達(dá)強(qiáng)度等級的結(jié)果見表3。用PBS代替一抗的陰性對照未見陽性信號。CaSpaSe-3在暈痣組皮損表皮內(nèi)的表達(dá)高于皮內(nèi)痣組（圖3，4），2組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 Caspase-3在暈痣及皮內(nèi)痣皮損表皮內(nèi)染色強(qiáng)度的比較Table 1 The staining intensity of Caspase-3 in epidermis between halo nevus and intradermal nevus（n）

表2 Caspase-3在暈痣及皮內(nèi)痣皮損表皮內(nèi)表達(dá)范圍的比較Table 2 The expression site of Caspase-3 in epidermis between halo nevus and intradermal nevus （n）

表3 Caspase-3在暈痣和皮內(nèi)痣皮損表皮內(nèi)表達(dá)強(qiáng)度等級的比較Table 3 The comparison of Caspase-3 expression intensity in epidermis between halo nevus and intradermal nevus（n）

圖3 CaSpaSe-3在暈痣皮損表皮內(nèi)的表達(dá)（SP×400）Figure 3 The expreSSion of CaSpaSe-3 in the epidermiS of halo nevuS （SP×400）

圖4 CaSpaSe-3在皮內(nèi)痣皮損表皮內(nèi)的表達(dá)（SP×400）Figure 4 The expreSSion of CaSpaSe-3 in the epidermiS of intradermal nevuS（SP×400）

3 討 論

暈痣是白癜風(fēng)的一種特殊類型［6］，發(fā)病率約為1%，發(fā)病機(jī)制未完全明了。有學(xué)者［6］提出大多數(shù)暈痣的痣周及真皮可見大量單個核細(xì)胞浸潤，其中S0%以上為T淋巴細(xì)胞，以CDS+T細(xì)胞為主。目前較為一致的看法傾向于細(xì)胞免疫。

CD1a是細(xì)胞膜表面的一組糖蛋白，屬于第三類抗原提呈分子，是朗格漢斯細(xì)胞的標(biāo)記性抗體［7］。目前主要用CDla陽性細(xì)胞的多少來反映郎格漢斯細(xì)胞的數(shù)量［S～10］。朗格漢斯細(xì)胞是存在于表皮中的樹突狀細(xì)胞，也是具有免疫功能的抗原遞呈細(xì)胞［11］，具有特殊免疫激活能力，具有極強(qiáng)的抗原提呈功能，在人體的防御體系中有著極為重要的作用，其數(shù)量的多少可以反映相應(yīng)的免疫狀態(tài)。楊海平等［12］研究認(rèn)為郎格漢斯細(xì)胞可能是由T細(xì)胞介導(dǎo)疾病的激發(fā)相關(guān)細(xì)胞和（或）靶細(xì)胞。

本研究表明在暈痣皮損表皮內(nèi)郎格漢斯細(xì)胞數(shù)較皮內(nèi)痣皮損中多，推斷郎格漢斯細(xì)胞可能是作為抗原提呈細(xì)胞介導(dǎo)針對黑素細(xì)胞的免疫反應(yīng)，是引起皮膚黑素細(xì)胞破壞的因素，支持郎格漢斯細(xì)胞可能在暈痣病變發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵的調(diào)控作用。

暈痣是在郎格漢斯細(xì)胞作用下，由CDS+T細(xì)胞介導(dǎo)的直接針對痣細(xì)胞的自身免疫反應(yīng)，最終導(dǎo)致痣細(xì)胞的毀損。理論上細(xì)胞毒性T細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞可以啟動細(xì)胞裂解和細(xì)胞凋亡2種機(jī)制。

CaSpaSe-3為半胱天冬酶家族的重要成員，是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵蛋白酶，一旦被激活，即發(fā)生下游級聯(lián)反應(yīng)，使凋亡不可避免，在細(xì)胞凋亡機(jī)制網(wǎng)絡(luò)中居中心地位［13］。本研究表明CaSpaSe-3在暈痣皮損表皮內(nèi)高表達(dá)，皮損表皮內(nèi)陽性顆粒較密集，提示暈痣皮損的產(chǎn)生伴隨著細(xì)胞凋亡，而CaSpaSe-3在細(xì)胞凋亡過程中起著極其重要的作用，故CaSpaSe-3在暈痣發(fā)生、發(fā)展過程中可能具有重要作用。

總之，暈痣中可能存在由抗原遞呈細(xì)胞郎格漢斯細(xì)胞促成的表皮內(nèi)限局性免疫功能異常，進(jìn)而產(chǎn)生了CaSpaSe蛋白酶級聯(lián)反應(yīng)引起的細(xì)胞凋亡，該機(jī)制可能導(dǎo)致了痣細(xì)胞凋亡，并伴隨有黑素細(xì)胞的破壞，形成痣細(xì)胞痣周圍出現(xiàn)色素減退斑。

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THE STUDY ON THE EXPRESSION OF CD1a AND CASPASE-3 IN EPIDERMIS OF HALO NEVUS LESION

WANG Ai-xue，LI Yu-ping*，ZHAO Zi-Shen，LU Hui-xiu
（Department of Dermatology，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China）

ObjectiveTo Study the pathogeneSiS of halo nevuS and the role of apoptoSiS by inveStigating the expreSSion of CD1a and CaSpaSe-3.MethodsThe expreSSion of CD1a and CaSpaSe-3 waS meaSured by immunohiStochemiStry in 23 caSeS of halo nevuS and 15 caSeS of intradermal nevuS. Results The expreSSion of CD1a and CaSpaSe-3 waS Significantly higher in halo nevuS than in intradermal nevuS（P＜0.05）.ConclusionThe higher expreSSion of CD1a and CaSpaSe-3 may play an important role in the development of halo nevuS.

halo nevuS；CD1a；cySteime endopeptidaSeS；apoptoSiS

I75S.51

A

1007-3205（2011）07-0797-03

2011-03-03；

2011-05-10

王愛學(xué)（1975-），女，河北秦皇島人，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事皮膚病、性病診治研究。

*通訊作者

10.3969/j.iSSn.1007-3205.2011.07.021