馬 麗，李鐵健

鹽酸頭孢他美酯為半合成第三代口服頭孢菌素類抗生素，能夠有效抑制鏈球菌類等革蘭陽(yáng)性菌和大腸桿菌等革蘭陰性菌，并對(duì)多種細(xì)菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定，具有較好的抗菌活性。臨床主要用于敏感菌所致的肺炎、急性支氣管炎、咽喉炎、扁桃體炎、尿路感染及婦產(chǎn)科、外科、耳鼻咽喉科和口腔科等感染［1-3］。根據(jù)中國(guó)藥典對(duì)藥品質(zhì)量控制的要求，本實(shí)驗(yàn)對(duì)研制的新藥鹽酸頭孢他美酯顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，建立了HPLC法測(cè)定該制劑的含量，并進(jìn)行了方法學(xué)考察［4-6］。

1 儀器與試藥

儀器:Agilent 1100高效液相色譜儀，包括紫外檢測(cè)器、四元泵、在線脫氣機(jī)、柱溫箱、自動(dòng)進(jìn)樣器、Chemstation色譜工作站。

對(duì)照品:鹽酸頭孢他美酯(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，批號(hào):130512-200201，含量:71.3%。頭孢他美酸:自制，純度＞99.9%。

試藥:鹽酸頭孢他美酯顆粒(自制)，批號(hào):091101、091102、091103。乙腈、甲醇為色譜純(美國(guó)TEDIA公司)，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)溶液的制備

2.1.1 系統(tǒng)適用性溶液的制備 精密稱取頭孢他美酸10 mg置于100 mL量瓶中，乙腈(9→20)溶液溶解并定容。取此溶液5 mL、頭孢他美酯14 mg置10 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液制成含頭孢他美酸 0.05mg/mL、頭孢他美酯1.4 mg/mL的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。

圖1 鹽酸頭孢他美酯顆粒HPLC色譜圖注:A.輔料溶液，B.系統(tǒng)適用性溶液，C.對(duì)照溶液，D.樣品溶液。1.頭孢他美酸，2.頭孢他美酯

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取頭孢他美酯對(duì)照品28 mg(約相當(dāng)于頭孢他美20 mg)置于100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，得含頭孢他美為0.2 mg/mL的對(duì)照溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品10袋，稱重，計(jì)算平均裝量，精密稱取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于頭孢他美20 mg)，置100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜過(guò)濾，即得。

2.1.4 輔料溶液(陰性對(duì)照)的制備 按照處方比例稱取輔料適量，置100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，即得。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱:Agela XBP-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-甲醇-水-磷酸鹽緩沖液(取無(wú)水磷酸氫二鈉5.8 g與磷酸二氫鉀3.5 g，加水溶解并稀釋成1 000 mL)(360∶90∶500∶45)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng):263 nm;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL。取系統(tǒng)適用性溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣6次，要求頭孢他美酯峰面積的RSD≤2%，理論塔板數(shù)按頭孢他美酯色譜峰計(jì) ＞5 000，其與頭孢他美酸峰(tR=1.35 min)的分離度應(yīng)＞28.0，頭孢他美酯峰(tR=12.9 min)與其相對(duì)保留時(shí)間RRT約為0.9和1.1處雜質(zhì)峰的分離度均應(yīng)＞2.0。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3 線性曲線的繪制 精密稱取頭孢他美酯對(duì)照品(含量71.3%)28.85 mg置于50 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，得含頭孢他美0.411 4 mg/mL對(duì)照儲(chǔ)備溶液，分別精密量取此溶液7.0、6.0、5.0、4.5、4.0、3.0 mL 到10 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液稀釋至刻度，搖勻。照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，以濃度C(μg/mL)對(duì)頭孢他美酯峰面積(A)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:Y=18.65 X-40.791，r=0.999 7。結(jié)果表明，頭孢他美的濃度在123.42～287.98 μg/mL范圍內(nèi)線性良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按測(cè)定的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄頭孢他美酯的峰面積，計(jì)算RSD為0.77%(n=6)，表明精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液和樣品溶液，分別在 0、2、4、6、8、12 h 進(jìn)樣分析，記錄頭孢他美酯峰面積，計(jì)算RSD分別為0.74%和0.68%(n=6)，表明在12 h內(nèi)對(duì)照溶液和樣品溶液基本穩(wěn)定。2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同一批次藥品細(xì)粉6份，按樣品溶液制備方法操作，分別進(jìn)樣，記錄頭孢他美酯峰面積，計(jì)算含量，RSD為0.51%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 根據(jù)鹽酸頭孢他美酯顆粒的配比，在412 mg輔料中分別加入頭孢他美酯對(duì)照品 22.4 mg(80%)、28 mg(100%)、33.6 mg(120%)各3份，置于100 mL量瓶中，加乙腈(9→20)溶液溶解并稀釋至刻度，得回收率試驗(yàn)溶液。以測(cè)得量與加入量的比值作為回收率。結(jié)果3個(gè)濃度下的平均回收率為100.3%，RSD=0.50%(n=9)，表明本方法回收率較高(見(jiàn)表1)。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(mg，n=9)

2.8 樣品測(cè)定 按上述“2.2”方法制備溶液，對(duì)3個(gè)批次(091101、091102、091103)鹽酸頭孢他美酯顆粒的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 三批樣品含量測(cè)定結(jié)果(%，n=2)

3 討論

為了有效控制鹽酸頭孢他美酯顆粒的質(zhì)量，通過(guò)參考相關(guān)文獻(xiàn)［5-6］，本文決定采用HPLC法測(cè)定本品的含量。實(shí)驗(yàn)表明，采用本方法測(cè)定鹽酸頭孢他美酯顆粒的含量具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，主成分在該條件下能與其他雜質(zhì)完全分離，可訂入標(biāo)準(zhǔn)中，用于控制本品質(zhì)量。

［1］ 姜佳峰.鹽酸頭孢他美酯的合成［J］.齊魯藥事，2008，27(8):489-491.

［2］ 李華，黃莉.鹽酸頭孢他美酯膠囊溶出度方法的研究［J］.山東醫(yī)藥工業(yè)，2001，20(4):1-3.

［3］ 馬錦芳，鄭勁平，江梅.鹽酸頭孢他美酯膠囊單獨(dú)或序貫治療急性支氣管炎和肺炎的療效觀察［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25(12):2051-2053.

［4］ 于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:69.

［5］ 鮮楊，龍恩武，袁浩宇.反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸頭孢他美酯膠囊中頭孢他美含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2010，19(7):31-32.

［6］ 中國(guó)藥典.2010年版(二部).北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:667-669.