齊曉飛，趙曉冬

阿奇霉素片溶出度測(cè)定最早采用微生物檢定法，不僅費(fèi)時(shí)、繁瑣，而且工作量較大。用高效液相色譜法測(cè)定阿奇霉素片溶出度較為準(zhǔn)確、省時(shí)，但因色譜柱堿性較大，不易得到廣泛使用，筆者參照有關(guān)資料，重點(diǎn)考察了紫外分光光度法測(cè)定阿奇霉素片溶出度，并將測(cè)定的結(jié)果與高效液相色譜法進(jìn)行比較［1］，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

ZRS-4智能溶出試驗(yàn)儀，超聲波振蕩器(上海聲波儀器廠)，RZOOD電子天平，島津UV-240紫外分光光度儀，島津LC-10AD高效液相色譜儀。阿奇霉素片規(guī)格 250 mg，批號(hào):T-1、T-2、T-3;規(guī)格:500 mg，批號(hào) T-4、T-5、T-6。阿奇霉素二水合物對(duì)照品由中國(guó)生物制品檢定所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外分光光度法測(cè)定阿奇霉素片溶出度方法的建立

2.1.1 顯色方法與波長(zhǎng)的選擇 取本品適量，加磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)溶解，并稀成約含55 U/mL的溶液，過(guò)濾，取續(xù)濾液5 mL，精密加入硫酸溶液(75→100)5 mL，混勻，自然冷卻，按照紫外分光光度法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄XC)，在420～520 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行掃描，其最大吸收波長(zhǎng)在(482±2)nm，測(cè)定波長(zhǎng)確定為(482±2)nm。

2.1.2 吸收度和濃度的線性關(guān)系 精密稱取阿奇霉素二水合物標(biāo)準(zhǔn)品適量置100量瓶中，加適量甲醇溶解后，加磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)至刻度，再依次稀釋成 18、36、54、72、90 U/mL 濃度的溶液，以溶劑為空白液，按照紫外分光光度法，在(482±2)nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度值，以濃度與吸收度進(jìn)行回歸計(jì)算，得回歸方程:A=0.007 5C-0.017，r=0.999 1。結(jié)果表明，阿奇霉素在17.94～89.69 U/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.3 輔料對(duì)吸收度的影響 按處方配制，精密稱取輔料適量，加磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，依照顯色法進(jìn)行顯色，并在420～520 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，結(jié)果表明，輔料無(wú)吸收，對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響。

2.1.4 回收率試驗(yàn) 精密稱取阿奇霉素原料適量，再依據(jù)處方比例加入輔料，加磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)溶解，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，依照顯色法進(jìn)行顯色，在(482±2)nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，并計(jì)算其回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)(n=6)

2.1.5 溶出曲線的制備 取1片阿奇霉素片放入900 mL 溶劑中，在規(guī)定時(shí)間(5、10、20、30、45、60 min)經(jīng)100 r/min攪拌后，取10 mL濾過(guò)，隨即補(bǔ)加預(yù)熱至37℃的溶劑10 mL，取續(xù)濾液5 mL，加硫酸溶液5 mL混勻，在(482±2)nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算出各時(shí)間的累計(jì)溶出量和RSD值，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 溶出曲線

2.1.6 溶出度方法的建立 取本品1片于900 mL溶劑中，以磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)為溶劑，按照溶出度測(cè)定法第二法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄XC)測(cè)定。100 r/min攪拌。45 min取樣過(guò)濾，取續(xù)濾液10 mL，用溶劑稀釋成55 U/mL，精密量取5 mL加硫酸溶液5 mL(75～100)，混勻，放30 min自然冷卻。按照紫外分光光度法，在(482±2)nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度。另取供試品10片研細(xì)，混勻，稱取適量(相當(dāng)于1片的重量)用甲醇溶解，用磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)稀釋成55 U/mL作為對(duì)照品溶液，同法測(cè)定計(jì)算出每片的溶出量。結(jié)果見(jiàn)表3。

2.2 高效液相色譜法測(cè)定阿奇霉素片溶出度取本品，照溶出度測(cè)定法［2］(中國(guó)藥典2005年版二部附錄XC第二法)測(cè)定，以磷酸鹽緩沖液(pH 6.5)900 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為75 r/min，45 min后取溶液10 mL濾過(guò)，取續(xù)濾液5 mL，加堿液0.2 mL搖勻，作為供試品溶液(規(guī)格250 mg);或取續(xù)濾液0.4 mL搖勻，作為供試品溶液(規(guī)格500 mg)。按高效液相色譜法外標(biāo)法測(cè)定，色譜柱:ODS-50，流動(dòng)相:0.04MK2HPO4(pH 11.0)緩沖液-乙腈(400∶600)，流速:1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):215 nm，柱溫:40℃，進(jìn)樣量:20 μL。另取阿奇霉素二水合物標(biāo)準(zhǔn)品適量(約相當(dāng)于阿奇霉素28 mg)置100 mL量瓶中，加溶劑并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置10 mL量瓶中，加堿液0.2 mL混勻，作為對(duì)照品溶液。同法操作，計(jì)算出每片的溶液出量。結(jié)果見(jiàn)表4。

2.3 高效液相色譜法及紫外分光光度法測(cè)定阿奇霉素片溶出度的方法比較 分別用高效液相色譜法及紫外分光光度法測(cè)定阿奇霉素片規(guī)格250 mg及500 mg各3批樣品的溶出度，結(jié)果見(jiàn)表4及表5。結(jié)果表明，兩種方法測(cè)定的溶出度基本一致。

表4 高效液相色譜法測(cè)定阿奇霉素片溶出度

表5 紫外分光光度法測(cè)定阿奇霉素片溶出度結(jié)果

3 討論

3.1 高效液相色譜法及紫外分光光度法測(cè)得的阿奇霉素片溶出量的百分含量基本一致，并且誤差較小，方法簡(jiǎn)便，但高效液相色譜法流動(dòng)相中緩沖液的pH值較高，對(duì)柱子的選擇性要求高，國(guó)內(nèi)不易達(dá)到廣泛使用。而紫外分光光度法條件限制不高，測(cè)定的結(jié)果與高效液相色譜法的結(jié)果基本一致，并且其他各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件均符合實(shí)驗(yàn)要求。

3.2 紫外分光光度法中加硫酸液顯色，反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短及硫酸質(zhì)量?jī)?yōu)劣等對(duì)顏色的深淺有一定的影響，操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格掌握。

［1］ 高燕霞，張菁，張哲峰，等.阿奇霉素的兩種含量測(cè)定方法比較［J］.中國(guó)抗菌藥物雜志，2000，25(5):388.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.二部.2005.