顧華愛,汪月祥,李麗敏

乙型病毒性肝炎 (乙肝)是一種嚴(yán)重危害人類身心健康的傳染性疾病,乙肝病毒寄生于人肝細(xì)胞中,病程通常慢性化,長(zhǎng)期可致肝纖維化、肝硬化以至肝癌[1]。其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,至今尚未完全明了。國內(nèi)外相關(guān)研究認(rèn)為乙肝患者肝功能的損害并非由乙型肝炎病毒(HBV)直接損害肝細(xì)胞所致,肝功能損害的發(fā)生和發(fā)展與患者的細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)[2-4]。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測(cè)定了慢性乙肝患者血清中白介素 (IL)-2、IL-6、腫瘤壞死因子α(TNF-α)3種與細(xì)胞免疫功能十分密切的細(xì)胞因子,以及急性時(shí)相蛋白質(zhì)——超敏 C反應(yīng)蛋白 (high-sensitivity C,hs-CRP)的表達(dá)水平,并以健康人作為對(duì)照,旨在探討 3種細(xì)胞因子及 hs-CRP在慢性乙肝患者體內(nèi)的表達(dá)水平與乙肝患者肝功能損害之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2010年 3—9月來我院就診的臨床確診的慢性乙肝患者 75例,年齡 29～53歲,平均 (38.5±9.7)歲;男 61例,女 14例;均符合 2000年第十次全國病毒性肝炎與肝病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的 《病毒性肝炎防治方案》的診斷標(biāo)準(zhǔn)。并選取同期 50例參加健康體檢的成年人作為對(duì)照組,年齡 30～55歲,平均(40.3±8.3)歲;男 35例,女 15例;均經(jīng)體檢排除乙肝及其他疾病。

1.2 方法 利用真空采血管采集受試者空腹肘靜脈血共 5 ml于無抗凝劑玻璃試管中,37℃水浴 20 min,以 4 000 r/min離心5 min(離心半徑70 mm),分離血清于 3個(gè)管中。前 2個(gè)管用于常規(guī)肝功能[丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (AST)]檢查、hs-CRP和乙肝兩對(duì)半免疫學(xué)檢查,第 3個(gè)管置 -20℃中保存,批量測(cè)定 IL-2、IL-6和TNF-α。

1.3 儀器及試劑盒 ALT、AST及 hs-CRP測(cè)定試劑盒為寧波亞太生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn);乙肝兩對(duì)半 ELISA測(cè)定試劑盒為上海科華生物技術(shù)有限公司生產(chǎn);IL-2、IL-6、TNF-αELISA測(cè)定試劑盒為美國 Rapidbio(RB)公司生產(chǎn);肝功能及 hs-CRP均在 BECKMAN COULTER Synchron CX5全自動(dòng)生化儀上進(jìn)行測(cè)定,免疫學(xué)指標(biāo)由熟練檢驗(yàn)技師在 DEM酶標(biāo)洗板機(jī)上洗板,ST-360酶標(biāo)儀上進(jìn)行測(cè)定,各實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按試劑配套說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 13.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以 (x ±s)表示,計(jì)量數(shù)據(jù)組間比較采用 t檢驗(yàn)。p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料及肝功能比較 慢性乙肝組患者血清 ALT、AST水平分別為(521.4±105.3)U/L和 (321.6±73.5)U/L,對(duì)照組分別為 (28.5±10.9)U/L和 (17.8±15.3)U/L,兩組 ALT、AST水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (t值分別為 35.3和 18.5,p＜0.01)。

2.2 細(xì)胞因子及 hs-CRP水平比較 慢性乙肝組患者血清 IL-2表達(dá)水平較對(duì)照組顯著降低,而血清 IL-6、TNF-α、hs-CRP水平則較對(duì)照組顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (p＜0.05,見表 1)。

3 討論

基礎(chǔ)研究表明,HBV感染人體后,人體對(duì)于 HBV既可以產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答,又可以產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答,但是以細(xì)胞免疫應(yīng)答為主。其中效應(yīng) T細(xì)胞及 Th細(xì)胞在免疫應(yīng)答過程中可以釋放多種細(xì)胞因子,在體內(nèi)構(gòu)成免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò),作用于病毒感染的靶肝細(xì)胞,引起肝細(xì)胞組織的免疫病理損傷。為了研究慢性乙肝患者細(xì)胞免疫應(yīng)答過程中產(chǎn)生的細(xì)胞因子與肝功能損害之間的關(guān)系,本研究測(cè)定了慢性乙肝患者肝功能損害指標(biāo) ALT、AST,急性時(shí)相蛋白 hs-CRP以及血清中的 3種細(xì)胞因子 IL-2、IL-6、TNF-α。

眾所周知,IL-2、 IL-6、TNF-α均為體內(nèi)重要的細(xì)胞因子,具有多種生物學(xué)功能。IL-2主要由細(xì)胞產(chǎn)生,IL-6可由多種活性細(xì)胞 (如 B細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞)分泌。HBV感染機(jī)體后所形成的免疫復(fù)合物均可刺激單核巨噬細(xì)胞,促使其分泌IL-6。在肝內(nèi),IL-6可以調(diào)節(jié)許多急性期反應(yīng)蛋白如 hs-CRP的合成[5];而TNF-α也能刺激 T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞等,并使其功能活性增強(qiáng),并與抗原及病毒感染后改變了的肝細(xì)胞膜成分發(fā)生反應(yīng),造成肝細(xì)胞損傷。因此,當(dāng)肝臟感染 HBV后受到不同程度損傷時(shí),可以引起 CD4+T細(xì)胞數(shù)量下降,從而可以引起 IL-2血清表達(dá)降低[6];同時(shí)由于肝細(xì)胞對(duì)細(xì)胞因子 IL-6、TNF-α的清除能力下降,使體內(nèi)細(xì)胞因子通過血液運(yùn)輸?shù)綑C(jī)體各部,導(dǎo)致 IL-6、TNF-α水平升高;hs-CRP是一種主要由肝臟合成的急性時(shí)相蛋白,因此當(dāng)肝臟細(xì)胞被HBV病毒感染后,造成肝細(xì)胞的損害從而引起 hs-CRP的表達(dá)增加。故不論何種原因?qū)е碌母渭?xì)胞損害都可以使肝細(xì)胞膜破損,從而使得 ALT、AST釋放入血引起血清水平升高。

表 1 兩組 3種細(xì)胞因子及 hs-CRP水平比較 Table 1 The levels of cytokines and hs-CRP in the two groups

表 1 兩組 3種細(xì)胞因子及 hs-CRP水平比較 Table 1 The levels of cytokines and hs-CRP in the two groups

組別 例數(shù) IL-2(ng/L) IL-6(ng/L)TNF-α(ng/L)hs-CRP(mg/L)慢性乙肝組 75 34.0± 6.8 103.5±69.8 108.5±59.0 10.45±4.27對(duì)照組 50 87.7±65.7 16.4±9.9 38.8±19.5 1.58±0.75 t值.3 P值 0.023 0.004 0.007 0.008-15.8 35.2 20.7 25

本研究結(jié)果顯示,慢性乙肝患者血清IL-2表達(dá)較健康者顯著降低,其原因可能是由于患者感染 HBV后,引起分泌 IL-2的T細(xì)胞數(shù)量下降造成的。而IL-6、TNF-α及急性時(shí)相蛋白 hs-CRP血清表達(dá)則較健康者顯著增加,與國內(nèi)外有關(guān)報(bào)道相符合[7-10]。并且乙肝患者肝功能損害重要指標(biāo) ALT、AST水平也較健康者顯著升高,與上述基礎(chǔ)理論研究相符合。因此,可以認(rèn)為血清 IL-2的低表達(dá)以及 IL-6、TNF-α的高表達(dá)可能與乙肝患者肝功能的損害存在一定的關(guān)聯(lián)。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)慢性乙肝患者血清 IL-2、IL-6、TNF-α及 hs-CRP表達(dá),對(duì)于臨床醫(yī)生了解患者機(jī)體免疫應(yīng)答狀況、判斷肝功能的損傷情況以及患者的療效與預(yù)后都有重要的臨床意義。

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