苗艷平，苗艷波，張憲平

(1.長春中醫(yī)藥大學，吉林 長春 130117；2.吉林省中醫(yī)藥科學院，吉林 長春 130021；3.吉林省食品藥品檢驗所，吉林 長春 130033)

返魂草為菊科千里光屬植物SeneciocannabifoliusLess.的干燥地上部分[1]。包括單葉返魂草SeneciocannahifoliusLess.Var.integrifolius(Koidz.)Kitag.和寬葉返魂草(又名麻葉千里光，SeneciocannabifoliusLess.)。具有清熱解毒，散血消腫，下氣通經，清熱祛痰，鎮(zhèn)咳平喘。用于瘀血腫痛，跌打損傷，肺內感染，慢性支氣管炎，喘息性支氣管炎，急性呼吸道感染等癥[2]。為更好的控制返魂草藥材質量，本文采用4-羥基苯乙酸作為測定對象，建立了用HPLC測定返魂草[3-5]中4-羥基苯乙酸的方法。

1 材料

島津LC-2010CHT全自動高效液相色譜儀，CLASS-VP色譜工作站；4-羥基苯乙酸(C8H8O3)對照品(批號：140736-200501；含量：98.5%；規(guī)格:約10 mg/支)由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為優(yōu)級純；水為自制超純水；其他均為分析純。樣品提供：吉林敖東力源藥業(yè)股份有限公司。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性 色譜柱：鉆石C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)；流動相：甲醇-水-冰醋酸(14∶86∶1)混合液；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃;檢測波長為224 nm；理論塔板數按4-羥基苯乙酸峰計算，應不低于8 000。

2.1.1 對照品溶液的制備 取4-羥基苯乙酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品中粉約5 g，精密稱定，精密加水100 mL，稱定重量，加熱回流提取3 h,放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液15 mL,濃縮近干，殘渣加甲醇研磨使溶解，轉移至5 mL量瓶中，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL,注入液相色譜儀，測定，即得。

2.2 標準曲線和檢出限及定量限 取4-羥基苯乙酸對照品溶液(43.14 μg/mL)。分別精密吸取1、5、10、15、20 μL進樣，結果進樣量在43.14～862.8 μg范圍內,回歸方程為Y=6 266.7X+1 369.5，r=0.999 9。檢測限為0.4 μg；定量限為1.3 μg。

2.3 儀器精密度和樣品穩(wěn)定性、重復性試驗

2.3.1 精密度試驗 精密吸取同一樣品溶液10 μL，注入HPLC儀，重復進樣6次，測定對照品溶液峰面積積分值，結果RSD=0.8%。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗 精密量取同一供試品溶液在0、2、4、7、12、21 h進樣10 μL，以4-羥基苯乙酸峰面積的相對標準偏差反映樣品的穩(wěn)定性，結果RSD=1.0%。

2.3.3 重復性試驗 取同一批號樣品依含量測定項下方法獨立制備6分供試品，分別依法測定，結果RSD=1.4%。

2.4 準確性試驗 取樣品(0.0225%)適量，研細，精密加入4-羥基苯乙酸對照品溶液4 mL，精密加水50 mL，按質量標準含量測定項下方法測定，進樣10 μL，共6分，進行回收率試驗。

2.5 含量測定 取樣品，按2.1.2項下方法制備供試品溶液后，精密吸取供試品溶液10 μL，按2.1項下色譜條件測定，用外標法計算返魂草中4-羥基苯乙酸的含量，結果見表1。

表1 6批樣品4-羥基苯乙酸含量測定結果

3 結論

本文為首次采用HPLC法以4-羥基苯乙酸為定量指標進行含量測定。根據4-羥基苯乙酸對照品的流動相溶液的紫外吸收光譜掃描圖，顯示在278 nm和224 nm波長處有最大吸收，但在224 nm波長處響應值明顯高于278 nm波長處響應值，最終確定224 nm為本法的測定波長。對流動相進行了篩選。1)甲醇-水-冰醋酸(14∶86∶1)混合液，2)甲醇-1%冰醋酸(30∶70)混合液。方法:分離效果較好，保留時間適中，故選擇其作為本文方法。專屬性:按正文條件采用二極管陣列檢測器檢查4-羥基苯乙酸峰純度，結果表明峰純度較好,無雜質峰包埋。

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