李 菲,趙錦程,郭玉琴,韓玉澤,侯麗然,李懷荊

(1.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,黑龍江佳木斯 154007;2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江佳木斯 154003)

骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis OP)是以骨量減少、骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化(松質(zhì)骨骨小梁變細(xì)、斷裂、數(shù)量減少;皮質(zhì)骨多孔、變薄)為特征,以致骨的脆性增高及骨折危險(xiǎn)性增加的一種全身性骨病[1]。最常見(jiàn)的類型是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松,女性圍絕經(jīng)期后,卵巢功能由減退到衰竭,雌激素水平明顯降低,骨骼對(duì)甲狀腺激素的敏感性增加,加速了骨吸收,骨量丟失也隨之增加。因此,雌激素在絕經(jīng)后骨代謝變化中起重要作用。骨金散為一祖?zhèn)黩?yàn)方,由三七、血蝎、乳香、沒(méi)藥、龍骨、方蟲(chóng)等十余味中藥組成,臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)可增加骨質(zhì)疏松病人的骨量,減輕疼痛等癥狀,并可促進(jìn)骨質(zhì)疏松所致骨折的愈合。本研究通過(guò)去卵巢手術(shù),建立大鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型,觀察雌激素變化,探討骨金散治療骨質(zhì)疏松的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組

選用6月齡雌性健康 SD大鼠40只,清潔級(jí),體重(300±20)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào)SCXK黑2008004。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為假手術(shù)組(10只)和去勢(shì)組(30只)。1個(gè)月后,去勢(shì)組根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分3組,每組10只,即模型組、雌激素組、骨金散組。骨金散由佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥局提供,由三七、血蝎、乳香、沒(méi)藥、龍骨、方蟲(chóng)等十余味中藥組成。己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)由上海醫(yī)藥(集團(tuán))有限公司華聯(lián)制藥廠生產(chǎn),國(guó)藥準(zhǔn)字H31020272;雌激素(E2)酶聯(lián)免疫吸附試劑盒由上海江萊生物科技有限公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

SD大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉(劑量0.3mL/100mg),俯臥位固定于手術(shù)板上,常規(guī)備皮,碘伏消毒手術(shù)部位。取最下肋骨水平,與脊柱中線左側(cè)2cm處做一切口,分離皮下組織和肌肉,進(jìn)入腹腔,切開(kāi)視野中可見(jiàn)一乳白色的脂肪團(tuán),卵巢即包埋其中,以小鑷子輕輕夾住脂肪團(tuán)拉出切口外,分離脂肪團(tuán),便可見(jiàn)粉紅色的卵巢。剪取時(shí),先將卵巢下輸卵管(包括脂肪)用手術(shù)線結(jié)扎,再摘除卵巢,術(shù)后順勢(shì)將子宮送回腹腔中,同法摘除另一側(cè)卵巢。慶大霉素注射液0.3mL(4萬(wàn)u/mL)+生理鹽水0.6mL(1:2)沖洗切口,關(guān)閉腹腔,縫合背部切口,局部以碘伏處理切口。假手術(shù)組同法,但只摘除部分脂肪,不摘除卵巢。術(shù)后正常飼養(yǎng),1月后雌激素組每日灌胃給予己烯雌酚0.05mg/kg;骨金散組按1.8g/kg灌服骨金散,其余兩組灌服等量的生理鹽水,持續(xù)2個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每周稱重一次,于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后眼球內(nèi)眥取血,4℃冰箱中靜置4h后離心取血清,-20℃保存。聯(lián)免疫吸附法測(cè)量E2。取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物右股骨,剔除肌肉等組織,采用雙能X線骨密度儀,應(yīng)用小動(dòng)物軟件,進(jìn)行離體左右肢股骨、脛骨骨密度測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體重變化

所有實(shí)驗(yàn)大鼠體重均呈現(xiàn)增長(zhǎng)的趨勢(shì)。模型組、雌激素組、骨金散組的體重差異無(wú)顯著性(P＞0.05),但均高于假手術(shù)組(P＜0.05)。

表1 各組大鼠體重變化(g;± s;n=10)

表1 各組大鼠體重變化(g;± s;n=10)

與假手術(shù)組比較,*P＜0.05,**P＜0.01;與模型組比較,△P＜0.01。

組別 手術(shù)前 術(shù)后4周 術(shù)后8周 術(shù)后12周假手術(shù)組 295.50±20.88 301.40±17.81 310.60±16.84 319.80±16.16模型組 294.40±18.12 323.80±14.36 349.90±12.42** 369.70±10.66**雌激素組 294.50±17.83 322.10±16.31 326.90±13.19△ 329.70±11.15△骨金散組 294.40±20.27 321.20±19.36 324.90±14.97△ 335.60±14.05*△

2.2 各組大鼠E2的變化

與假手術(shù)組比較,模型組雌激素水平明顯下降(P＜0.05);與模型組比較,雌激素組,骨金散組雌激素水平明顯升高(P＜0.05);雌激素組與骨金散組相比有差異(P＜0.05)。

表2 各組大鼠血清E2水平和左右肢股骨、脛骨骨密度的變化(± s;n=10)

表2 各組大鼠血清E2水平和左右肢股骨、脛骨骨密度的變化(± s;n=10)

與假手術(shù)組比較,△P＜0.05,△△P＜0.01;與模型組比較*P＜0.05,**P＜0.01。

組別 雌激素(pg/mL) 股骨骨密度(g/cm2) 脛骨骨密度(g/cm2)假手術(shù)組 13.03±2.08** 0.226±0.011** 0.222±0.010**模型組 6.66±1.78△△ 0.209±0.010△△ 0.205±0.014△雌激素組 11.27±1.83** 0.223±0.013* 0.221±0.012*骨金散組 8.90±2.56△△* 0.221±0.012* 0.218±0.009*

3 討論

雌激素是女性的主要生殖激素,對(duì)骨代謝起著重要的調(diào)節(jié)作用。本世紀(jì)40年代Albright就提出骨質(zhì)疏松發(fā)病與雌激素水平降低有著密切的關(guān)系,稱之為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松。人到二三十歲以后,骨形成的速度慢于骨吸收的速度,使每年骨量以1%的速度遞減。絕經(jīng)后5～10年骨丟失加快,每年達(dá)5%～10%,以后丟失減慢。雌激素缺乏引起骨的吸收和重建平衡失調(diào)已被公認(rèn)為OP的重要原因[2]。目前認(rèn)為其機(jī)制主要有以下幾個(gè)方面:①雌激素抑制白介素(IL)-1和IL-6的分泌,抑制導(dǎo)致IL-1,IL-6介導(dǎo)的骨吸收[3]。②雌激素有拮抗甲狀旁腺激素骨吸收作用[4]。③雌激素能加強(qiáng)降鈣素的分泌,抑制破骨細(xì)胞活性。④雌激素抑制骨髓的破骨細(xì)胞前體-粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落形成單位(GM-CFU)分化成為破骨細(xì)胞,而且可通過(guò)Fas/FasL系統(tǒng)誘導(dǎo)破骨細(xì)胞凋亡[5,6]。⑤雌激素有助于維持胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-l)的水平,促進(jìn)骨細(xì)胞的增殖和基質(zhì)膠原合成[7]。⑥雌激素可升高OPGmRNA和蛋白的表達(dá),同時(shí)能抑制人成骨細(xì)胞中OPGLmRNA和蛋白的表達(dá),使細(xì)胞內(nèi)護(hù)骨素/護(hù)骨素配體(OPG/OPGL)比率升高,抑制破骨細(xì)胞生成、活化、減少骨吸收[8]。⑦雌激素有促進(jìn)成骨細(xì)胞發(fā)生、分化、增殖的功能[9]。⑧雌激素有抗氧化的作用,可抑制氧化應(yīng)激所致的骨細(xì)胞凋亡[10]。目前,治療骨質(zhì)疏松的藥物主要是通過(guò)參與骨重建的過(guò)程而起作用的。骨重建主要是由破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞參與的、發(fā)生于骨表面的、由破骨細(xì)胞激活和骨吸收開(kāi)始以及與之相偶聯(lián)的成骨細(xì)胞激活和骨形成而終結(jié)的過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)切除大鼠雙側(cè)卵巢復(fù)制絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型,研究雌激素水平的變化。運(yùn)用己烯雌酚體外補(bǔ)充給予雌激素,抑制骨吸收,改善大鼠去卵巢后的骨質(zhì)疏松的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,灌服骨金散后,大鼠體內(nèi)的雌激素水平和骨密度明顯高于模型組,說(shuō)明中藥骨金散能增加絕經(jīng)后體內(nèi)的雌激素水平和骨密度,預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。骨金散主要由三七、血蝎、乳香、沒(méi)藥、龍骨、桂枝等10余味中藥組成,具有活血化瘀、滋陰補(bǔ)腎等功效,可提高去卵巢大鼠的雌激素和骨密度水平,改善骨質(zhì)疏松,因此,可考慮替代雌激素長(zhǎng)期用來(lái)防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥,并減少長(zhǎng)期使用雌激素所致的心臟病事件、腦卒中及乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)增加。

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