陳歡歡,文 怡,劉根焰,顧 兵,梅亞寧,陳友華

(南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科,江蘇南京,210029)

臨床上菌血癥和敗血癥是嚴(yán)重危及患者生命的疾病,死亡率高達(dá)29%,因此快速診斷是控制感染、降低死亡率的關(guān)鍵。臨床使用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀,提高了血培養(yǎng)的陽(yáng)性率,也縮短了培養(yǎng)時(shí)間[1-2],但按常規(guī)法鑒定出細(xì)菌和藥敏試驗(yàn)仍需要2～3 d。作者在對(duì)全自動(dòng)血培養(yǎng)儀培養(yǎng)陽(yáng)性的標(biāo)本,直接吸取一定量血液,注入帶分離膠試管中,離心后取上層液體直接用API鑒定試條鑒定細(xì)菌并進(jìn)行藥敏試驗(yàn),同時(shí)與培養(yǎng)轉(zhuǎn)種得到純菌后常規(guī)方法鑒定和藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年3月～2010年7月本院門診及住院患者血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本66例。

1.2 儀器與試劑

全自動(dòng)血培養(yǎng)儀BACTEC 9120,美國(guó)O rganon2Tekn ika公司產(chǎn)品;API鑒定試條,法國(guó)BioM erieux公司產(chǎn)品;LD-2A離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠;哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)、MH瓊脂。藥敏紙片:頭孢唑啉、頭孢噻肟、頭孢吡肟、萬(wàn)古霉素、亞胺培南、頭孢西丁、環(huán)丙沙星、丁胺卡那霉素、紅霉素、克拉霉素、頭孢他啶/克拉維酸、氨芐西林、復(fù)方新諾明均為英國(guó)Oxoid產(chǎn)品。質(zhì)控菌株大腸埃希菌(ATCC 25922),金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)和銅綠假單胞菌(ATCC27853)。

1.3 方法

陽(yáng)性標(biāo)本離心集菌處理及快速檢測(cè):血培養(yǎng)儀培養(yǎng)陽(yáng)性報(bào)警后,從陽(yáng)性瓶中無(wú)菌抽取培養(yǎng)液約3 mL,注入帶分離膠的試管中,置離心機(jī)2 000 rpm離心15 min后,吸取分離膠上層液,并輕輕混勻,直接涂片行革蘭染色,根據(jù)染色結(jié)果,并通過(guò)觸酶或氧化酶試驗(yàn)對(duì)細(xì)菌初步分群后,選擇相應(yīng)API鑒定試條進(jìn)行細(xì)菌鑒定,再將離心上層液制備成0.5 M cFarLand菌懸液,直接用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn),量取抑菌圈直徑。

陽(yáng)性標(biāo)本的常規(guī)檢測(cè):血培養(yǎng)儀培養(yǎng)陽(yáng)性報(bào)警后,從陽(yáng)性瓶中無(wú)菌抽取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種血平板、巧克力平板,經(jīng)35℃培養(yǎng)18～24 h形成菌落后,取菌落涂片行革蘭染色,根據(jù)染色結(jié)果,并通過(guò)觸酶或氧化酶試驗(yàn)對(duì)細(xì)菌初步分群后,選擇相API鑒定試條進(jìn)行細(xì)菌鑒定,用K-B法進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn),量取抑菌圈直徑,結(jié)果進(jìn)行比較。

2 結(jié) 果

66例血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本離心集菌處理后直接檢測(cè)與轉(zhuǎn)種獲取菌落檢測(cè)結(jié)果符合率:腸桿菌科22株,符合率100%;非發(fā)酵菌群10株,符合率85%;葡萄球菌屬28株,符合率90%;腸球菌屬6株,符合率92%。

血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本離心集菌處理后與轉(zhuǎn)種獲取菌落藥敏試驗(yàn)結(jié)果符合率見(jiàn)表1。

3 討 論

如何對(duì)血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行快速準(zhǔn)確的菌種鑒定和藥物敏感試驗(yàn),始終困擾著臨床微生物工作者。國(guó)內(nèi)外臨床微生物工作者,Ken、Marjan和T homas做了很多快速藥敏的嘗試,均也采用離心法對(duì)血培養(yǎng)陽(yáng)性培養(yǎng)液進(jìn)行處理后進(jìn)行了直接上機(jī)MIC藥敏[3-5],國(guó)內(nèi)朱德全、文元和汪定成等報(bào)道類似的實(shí)驗(yàn)[6-7],曾有文獻(xiàn)報(bào)道,直接用陽(yáng)性標(biāo)本作細(xì)菌鑒定和藥物敏感試驗(yàn),方便、快速。但由于血培養(yǎng)標(biāo)本中血細(xì)胞等有型成分的存在,常影響直接取培養(yǎng)液涂片的革蘭染色效果及判定。本研究采用含分離膠的試管處理陽(yáng)性標(biāo)本集菌后檢測(cè),經(jīng)一定時(shí)間離心分層,可較為準(zhǔn)確的得到無(wú)血細(xì)胞的菌懸液,以保證獲得足夠量的菌懸液。吸取菌懸液直接涂片后行革蘭染色結(jié)果判定更直觀,菌懸液亦可直接用于細(xì)菌鑒定和藥物敏感試驗(yàn),平均可提前一天報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果。

本研究的66株血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本離心集菌處理及檢測(cè)與常規(guī)檢測(cè)結(jié)果表明:離心集菌處理后直接鑒定與常規(guī)檢測(cè)兩種方法對(duì)細(xì)菌菌種鑒定差異不大,符合率均大于85%。2種方法的藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果也相差不大,符合率均大于95.2%,結(jié)果比較滿意,與國(guó)外Doren等報(bào)道96.8%相接近[8]。而葡萄球菌鑒定符合率高于國(guó)內(nèi)一些報(bào)道[9]。

血清分離膠主要由硅膠,大分子碳?xì)浠衔?疏水膠等組成。是具有觸變性的粘性膠體,呈惰性,氣密性好,比重 1.045～1.050,血球比重 1.060～1.080,血漿比重1.025～1.030。分離膠正好在血球與血漿之間。離心后,分離膠將兩者分離開(kāi)。血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本在試管中經(jīng)2 000 r/min,離心15 min,可以將其分成4層(從上至下):血漿層,細(xì)菌層,分離膠層,血球?qū)印Ｎ》蛛x膠層之上的細(xì)菌層,直接涂片染色,完全排除了血球?qū)Ω锾m染色結(jié)果判定的影響,涂片背景非常清晰,菌體易辨。血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本溶液經(jīng)離心后,細(xì)菌相對(duì)集中,制成一定菌量的懸液后可直接加到鑒定試條上。

本研究最大優(yōu)點(diǎn)利用分離血培養(yǎng)陽(yáng)性的培養(yǎng)液直接鑒定細(xì)菌,比常規(guī)方法轉(zhuǎn)種平板后鑒定所需時(shí)間至少要縮短1～2 d。但仍有一些問(wèn)題需要探討,如本研究的菌種類別尚少,缺少真菌檢出的報(bào)道;每次吸取陽(yáng)性血培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液中的菌量不同,對(duì)藥敏試驗(yàn)結(jié)果是否影響;陽(yáng)性瓶中如含有兩種以上菌株,用離心集菌處理后直接鑒定就有一定困難。這都有待于今后進(jìn)一步研究和探討。

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