王雪冰 安新茹

糖尿病是由遺傳因素、免疫功能紊亂等各種致病因子作用于機體導致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)一系列代謝紊亂綜合征[1]。中國目前有超過9200萬的糖尿病患，已經(jīng)取代印度，成為全球糖尿病第一大國[2]。中醫(yī)藥辨證施治，通過多途徑多靶點治療糖尿病，具有降低血糖、減輕糖尿病對機體損害及控制、延緩糖尿病并發(fā)癥作用，療效顯著[3]。使用動物模型探討中藥治療糖尿病的機理對于臨床治療糖尿病及治療藥物的研制具有重要意義。本文對目前中藥治療糖尿病實驗研究所采用的動物模型、中藥治療糖尿病實驗研究現(xiàn)狀進行綜述，為進一步研究中醫(yī)藥治療糖尿病提供借鑒。

1 糖尿病實驗動物模型的研究

多年來，國內(nèi)外學者進行了大量實驗研究工作，成功建立了多種糖尿病動物模型，常用的糖尿病模型有下列幾種：

1.1 高脂、高糖飲食誘發(fā)模型

通過特殊的飲食喂養(yǎng)，給動物催肥，使其發(fā)生肥胖，繼之發(fā)生高糖、高胰島素血癥和胰島素抵抗。常用的飲食有高脂飼料或高糖飼料。魯瑾等[4]采用高脂飲食飼養(yǎng)大鼠7周后，動物出現(xiàn)了高胰島素血癥，并且葡萄糖—胰島素耐量實驗顯示產(chǎn)生明顯的糖尿病，認為這是一個可靠的由高脂飲食造成的糖尿病模型。葛學美等[5]用高脂飲食成功地誘發(fā)C57BLP6J小鼠產(chǎn)生2型糖尿病，使小鼠血清胰島素水平不斷提高，血糖升高，小鼠體重超常，伴血脂明顯差異。此類模型與人類發(fā)病情況較接近，但實驗成本較高，穩(wěn)定性較差，且造模時間長，一般需要喂養(yǎng)成年動物4-5個月。

1.2 化學藥物誘發(fā)模型

利用化學藥物誘導是較常采用的方法，藥物多選用四氧嘧啶和鏈脲佐菌素。四氧嘧啶主要通過產(chǎn)生氧自由基破壞β細胞結(jié)構(gòu)，影響細胞膜的通透性和細胞內(nèi)ATP的產(chǎn)生，導致細胞的損傷及壞死，從而阻礙胰島素的分泌，使血清胰島素水平降低，動物模型多呈現(xiàn)典型的1型糖尿病。因注射四氧嘧啶同時會造成肝、腎組織中毒性損害，故目前已經(jīng)很少應(yīng)用[6]。鏈脲佐菌素對一定種屬動物胰島β細胞有選擇性破壞作用，進而使其產(chǎn)生糖尿病。因其對組織毒性小，動物存活率高，成為目前使用最廣泛的糖尿病動物模型化學誘導劑[7]。

1.3 特殊飲食結(jié)合化學藥物誘發(fā)造模

通常胰島素抵抗是啟動2型糖尿病發(fā)生的初始原因。胰島素抵抗發(fā)生后，一旦β細胞功能開始衰竭，糖耐量將迅速惡化，并發(fā)展為糖尿病。高糖、高脂飲食及肥胖在胰島素抵抗的誘發(fā)及最終糖尿病的發(fā)病中可能起重要作用。目前很多研究通過高糖、高脂飲食誘發(fā)出高胰島素血癥和胰島素抵抗，再通過注射低劑量的鏈脲佐菌素，造成部分胰島細胞破壞，導致胰腺代償性分泌胰島素障礙，最后可誘發(fā)高血糖癥，建立2型糖尿病大鼠模型。

郭嘯華等[8]給雌性Wistar大鼠喂以高糖高脂飼料一個月，大鼠出現(xiàn)高胰島素血癥和高脂血癥，成功地誘發(fā)出胰島素抵抗。然后以鏈脲佐菌素腹腔注射，誘發(fā)胰島素代償性分泌障礙，使之產(chǎn)生高血糖癥。通過對其胰島素敏感性檢測和腎臟病理學觀察，表明成功復(fù)制出了2型糖尿病模型。

孫桂菊等[9]用高能量飼料，喂養(yǎng)大鼠4周后，腹腔注射鏈脲佐菌素并繼續(xù)給予高能量飼料4周，測定大鼠空腹血糖，計算胰島素敏感指數(shù)及葡萄糖耐量實驗曲線下面積，表明動物對胰島素敏感性降低，葡萄糖耐量實驗曲線下面積升高，表現(xiàn)出明顯的2型糖尿病模型特征。

通過高脂飲食誘導胰島素抵抗，再注射小劑量的鏈脲佐菌素破壞部分胰腺β細胞建立2型糖尿病動物模型，該模型具有與人類2型糖尿病患者類似的生化代謝及臨床特征，涉及高血糖和高胰島素，高血脂，胰島素抵抗等多個致病因素，成模率高，是目前研究人類2型糖尿病及其并發(fā)癥比較理想的動物模型。

1.4 遺傳自發(fā)性糖尿病模型

遺傳型模型是在自然發(fā)生胰島素抵抗的個體中實施遺傳學控制(選擇性繁殖、近交系、突變系等)獲得的。遺傳型大鼠模型包括Wistar-Kyoto肥胖大鼠、OLETF大鼠等。遺傳型小鼠模型有C57BL/6J肥胖小鼠、C57BL/ks糖尿病小鼠等。該模型具有胰島素敏感性的遺傳缺陷，能自發(fā)形成穩(wěn)定的胰島素抵抗狀態(tài)，胰島素抵抗能夠作為系統(tǒng)特征表現(xiàn)出來，這類模型適用于糖尿病發(fā)生機理的研究。其缺點是飼養(yǎng)、繁殖條件要求高，價格昂貴，因此限制了此種模型的普及[10]。

1.5 轉(zhuǎn)基因動物模型

2型糖尿病是多基因遺傳，有許多機制參與發(fā)病。運用轉(zhuǎn)基因動物研究胰島素分泌調(diào)節(jié)、肝葡萄糖產(chǎn)生、胰島素分子結(jié)構(gòu)、胰島素受體敏感性及受體后水平缺陷等在2型糖尿病發(fā)生中的作用已有文獻報道[11]。應(yīng)用此方法可更好地評估特異基因產(chǎn)物的生理功能，能形成選擇性生理缺陷并研究其對復(fù)雜綜合征的潛在作用。轉(zhuǎn)基因動物模型的建立要求分子生物學的前沿技術(shù)和昂貴精密的儀器，目前國內(nèi)尚不能得到普遍推廣。

1.6 手術(shù)方法造模

通過手術(shù)切除實驗動物的胰腺鉤突及體尾部，然后局部或全身應(yīng)用胰腺β細胞毒性藥物，以破壞殘留胰腺的β細胞，使其喪失功能，造成實驗動物體內(nèi)胰島素缺乏，從而誘發(fā)實驗動物出現(xiàn)糖尿病的臨床癥象。手術(shù)方法造模風險性較大，動物死亡率較高[12]。

2 中藥治療糖尿病實驗研究現(xiàn)狀

黃芪對糖尿病及其并發(fā)癥有一定的療效，具有降低血糖、改善血流動力學、保護血管內(nèi)皮細胞和抑制微血管病變的功能[13]。熊凡等[14]研究黃芪對糖尿病大鼠血糖及脂質(zhì)過氧化作用的影響，表明黃芪治療可降低血糖水平和丙二醛水平，提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性。張全[15]觀察黃芪對糖尿病模型大鼠在改善胰島素抵抗后的胰島β細胞組織形態(tài)學上的改變，并測定大鼠治療前后空腹血糖與空腹胰島素。結(jié)果表明，黃芪具有胰島素增敏作用，保護胰島β細胞作用。

劉竹青等[16]采用高能量飼料加鏈脲佐菌素注射制備糖尿病大鼠模型，觀察葛根煎劑對糖尿病大鼠降血糖的作用機理。發(fā)現(xiàn)葛根煎劑能顯著降低糖尿病大鼠空腹血糖、游離脂肪酸的含量，提高胰島素敏感指數(shù)，改善胰島素抵抗。曾明等[17]發(fā)現(xiàn)葛根提取物可明顯降低糖尿病大鼠的血糖、改善血液流變性。

石斛具有降血糖，保護、修復(fù)胰組織的作用[18]。多糖類成分及生物堿是其特征成分。羅傲霜等[19]研究表明石斛多糖能顯著降低四氧嘧啶高血糖小鼠空腹血糖，增強四氧嘧啶高血糖大鼠的糖耐量。黃琦等[20]觀察到金釵石斛總生物堿可降低四氧嘧啶所致糖尿病大鼠血糖水平，并發(fā)現(xiàn)其作用機制與對胰島的保護作用有關(guān)。

孫鴻朗等[21]觀察中藥姜黃對實驗性糖尿病大鼠血管病變的影響，結(jié)果表明姜黃能顯著改善實驗性糖尿病大鼠血栓素、前列腺素的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物水平，提示姜黃能有效地防治糖尿病血管病變。邢燕玲等[22]研究發(fā)現(xiàn)姜黃可降低糖尿病模型大鼠血脂、血糖，增加血清超氧化物歧化酶表達，降低丙二醛水平，說明姜黃可降低糖尿病炎癥，保護或延緩糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。

復(fù)方中藥生芪降糖顆粒以黃芪、葛根、生地、紅花、黃連、虎杖組成，以益氣養(yǎng)陰、清熱化瘀為治療原則。王顏剛等[23]研究表明，該復(fù)方中藥生芪降糖顆粒能明顯改善糖尿病模型大鼠血生化指標，且作用效果與羅格列酮相當，并呈劑量依賴性。

石斛合劑以石斛、黃芪、枸杞、五味子等組成，以養(yǎng)陰益氣、潤燥清熱為治療原則。施紅等[24]研究石斛合劑降糖作用。結(jié)果表明，該合劑具顯著降低血糖作用能使該造模動物的血糖降至正常水平；還具有改善血黏度、血脂等作用。

梅山降糖神茶以山藥、黃芪輔以綠茶組方；以滋陰生津，清熱益氣為治療原則。何明等[25]采用四氧嘧啶法制備糖尿病大鼠模型。研究梅山降糖神茶降糖作用。給藥2周后，空腹血糖顯著降低；4周后糖耐量能力明顯增強；病理切片結(jié)果提示：胰島形態(tài)、結(jié)構(gòu)明顯修復(fù)。

3 回顧與展望

糖尿病是多方面的因素共同作用的結(jié)果，以多環(huán)節(jié)、多靶點、多因素相互作用為其特點。中醫(yī)藥從病證辨治的角度出發(fā)，根據(jù)其病證特點，從整體水平上綜合調(diào)理，辨證論治，可使糖尿病減輕、甚至逆轉(zhuǎn)，在改善胰島素抵抗方面具有很大優(yōu)勢。中醫(yī)藥對2型糖尿病胰島素抵抗的藥物治療從單味藥到復(fù)方多由具有益氣健脾、滋陰清熱、化痰除濕和活血化瘀功效的方藥組成，這與疾病的不同時期不同病機相對應(yīng)。

通過對中醫(yī)藥治療糖尿病胰島素抵抗研究的探討，證明了中醫(yī)藥可通過不同途徑和環(huán)節(jié)改善胰島素的敏感性，改善臨床癥狀，延緩病癥發(fā)展，提示中醫(yī)藥防治糖尿病可能有著廣闊的前景。但也存在一些問題，例如：供中醫(yī)藥研究的糖尿病動物模型尚不統(tǒng)一，以證候?qū)W研究為基礎(chǔ)的認識很少，對糖尿病的基本病機認識還有所欠缺。

在今后的研究中應(yīng)建立糖尿病病證結(jié)合模型，并將動物模型與中醫(yī)辨證分型之間建立正確對應(yīng)關(guān)系，從動態(tài)角度觀察中醫(yī)藥防治效應(yīng)，運用現(xiàn)代分子生物學技術(shù)，從細胞、分子水平研究中醫(yī)藥防治糖尿病的機制。

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