安耀榮,朱向東,丁文君,程暢和

(1.甘肅中醫(yī)學(xué)院,甘肅蘭州 730000;2.甘肅省中醫(yī)藥研究院,甘肅蘭州 730050)

慢性非細菌性前列腺炎是男性泌尿系統(tǒng)常見病、多發(fā)病,好發(fā)于青壯年[1]。其病因及發(fā)病機制目前尚不完全清楚,屬難治性疾病,臨床缺乏有效的治療方法和藥物。本研究所用敦煌前列寶以敦煌出土卷子《輔行訣臟腑用藥法要》中所載“大瀉腎湯”為基礎(chǔ),依據(jù)慢性前列腺炎臨床表現(xiàn)加減化裁而成,經(jīng)臨床反復(fù)運用,療效肯定。

1 材料與方法

1.1 動 物

SPF級雄性Wistar大鼠50只,3月齡,體質(zhì)量(240±20)g,由甘肅中醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供,實驗動物質(zhì)量合格證號:SCXK(甘)2004-0006。全部實驗操作均于SPF級動物實驗室進行,設(shè)施使用合格證號:SYXK(甘)2004-0006。

1.2 藥品與試劑

敦煌前列寶由茯苓、生甘草、制大黃、黃芩、赤芍、干姜、川牛膝、益母草按特定比例組成。藥材由甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中藥房提供,煎煮后過濾去渣,水浴濃縮濾液,使每毫升藥液含生藥 1.72 g。前列泰膠囊,陜西東泰制藥有限公司產(chǎn)品,批號為z20050003;消痣靈注射液,北京第四制藥廠產(chǎn)品,批號為 0710312,實驗前用生理鹽水配制成 25%消痣靈注射液,標(biāo)記備用;白細胞介素-8(IL-8)放免試劑盒,蘭州軍區(qū)總醫(yī)院安寧分院核檢驗科提供,批號為S20063089;腫瘤壞死因子-α(TNF-α)放免試劑盒,中國原子能科學(xué)研究所提供,批號為S10940082。

1.3 主要儀器

Biofuge Fresco低溫高速離心機,德國賀力氏(Heraeus)公司產(chǎn)品;BS124s電子分析天平,德國賽多利斯(Sartorius)公司產(chǎn)品;UV-2401 PC型紫外分光光度計,日本島津公司產(chǎn)品;BH 2型光學(xué)顯微鏡,日本奧林巴斯公司產(chǎn)品;MDF-71超低溫冰箱,日本三洋公司產(chǎn)品;HH-601數(shù)顯恒溫水浴箱,江蘇省金壇市恒豐儀器廠產(chǎn)品。

1.4 動物分組

動物適應(yīng)性喂養(yǎng) 1周后,稱重,按體質(zhì)量編號,并按隨機數(shù)字表法選取 8只為正常對照組,其余動物造模后選取 40只稱重后按隨機數(shù)字表法分為模型對照組,前列泰膠囊組,敦煌前列寶高、中、低劑量組 5組,每組 8只。

1.5 模型的建立與給藥

根據(jù)文獻,將實驗大鼠用10%水合氯醛(250～300μg/g)麻醉,無菌操作下取下腹部正中切口約1 cm,直達腹腔,提出膀胱及兩側(cè)精囊,暴露附屬于精囊內(nèi)側(cè)的前列腺背葉,注入前列腺雙側(cè)背葉 25%消痔靈注射液共0.2m L,縫合肌肉、皮膚。創(chuàng)口處噴慶大霉素注射液以防感染。造模期 7 d。造模成功后模型對照組、正常對照組按用藥組的方法,每日灌服蒸餾水;敦煌前列寶高、中、低劑量組予敦煌前列寶湯液 10μL/g灌胃,分別相當(dāng)于 17.2,8.6, 4.3 g/kg生藥;前列泰膠囊組予前列泰膠囊用蒸餾水配制成混懸液10μL/g灌胃,相當(dāng)于0.66 g/kg生藥。各組大鼠每日給藥 1次,連續(xù) 30 d。

1.6 檢測指標(biāo)

于末次給藥后24 h,稱大鼠體重,頸椎脫臼法處死動物,取出前列腺組織,剝離被膜及周圍脂肪組織,生理鹽水涮洗,濾紙吸干,電子天平稱重,計算各組大鼠前列腺指數(shù),即前列腺濕重/體質(zhì)量。將各組大鼠前列腺以中軸均分 2份,右側(cè)部分保存于 4%多聚甲醛/0.1M PBS(pH 7.2)固定液中,室溫下經(jīng)水洗、梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋等處理后,切片備用。HE染色制作病理切片,鏡下觀察前列腺局部病理變化。左半側(cè)組織勻漿,將勻漿液以3 000 r/min離心15min,將上清液分裝2個試管,按照試劑盒說明書采用放免法檢測IL-8、TNF-α。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計分析軟件處理。計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)(BZ_139_2138_999_2156_1045)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示,各組間比較采用單因素方差分析,各個實驗組的兩兩比較采用最小顯著性差異法LSD-t法。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 敦煌前列寶對慢性前列腺炎模型大鼠一般情況的影響

造模期間,正常對照組動物毛色光澤,食欲良好,活動自如,墊料干濕適中;模型組動物逐漸顯現(xiàn)食欲減少,毛色略顯枯槁,自主活動減少,墊料明顯偏濕,氣味腥臊。治療開始后,前列寶各劑量組及前列泰膠囊組動物經(jīng)處理狀態(tài)逐漸恢復(fù)。實驗期間,各組動物均無死亡。

2.2 敦煌前列寶對慢性前列腺炎模型大鼠前列腺濕質(zhì)量及腺體指數(shù)水平的影響

模型對照組前列腺指數(shù)與正常對照組對比顯著增高,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。進行藥物干預(yù)后,前列泰膠囊組及敦煌前列寶高劑量組大鼠前列腺指數(shù)較模型對照組降低,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);敦煌前列寶中、低劑量組與模型對照組對比,差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

表1 各組大鼠前列腺濕質(zhì)量、體質(zhì)量及腺體指數(shù)水平對比 g,±s

表1 各組大鼠前列腺濕質(zhì)量、體質(zhì)量及腺體指數(shù)水平對比 g,±s

注:與正常對照組對比,*P＜0.05;與模型對照組對比,#P＜0.05。

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2.3 敦煌前列寶對慢性前列腺炎模型大鼠前列腺組織勻漿IL-8、TNF-α含量的影響

與正常對照組對比,模型對照組大鼠前列腺組織勻漿中細胞因子IL-8和TNF-α高表達,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。治療后,敦煌前列寶各組局部前列腺組織細胞因子IL-8和TNF-α表達顯著減輕,與模型對照組對比,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表 2。

表2 各組大鼠前列腺組織勻漿IL-8、TNF-α含量對比 ng·L-1,±s

表2 各組大鼠前列腺組織勻漿IL-8、TNF-α含量對比 ng·L-1,±s

注:與正常對照組對比,*P＜0.05;與模型對照組對比,#P＜0.05,##P＜0.01。

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2.4 敦煌前列寶對慢性前列腺炎模型大鼠前列腺組織病理學(xué)的影響

正常腺體組織柔軟,有光澤,彈性好,與周圍組織無粘連,易分離。模型對照組腺體明顯增大,與周圍組織粘連較重,部分組織表面可見暗紅色或灰白色片狀結(jié)節(jié)。前列泰膠囊組腺體中度增大,與周圍組織有粘連,彈性較差,部分組織表面呈暗紅色,其程度較模型組明顯減輕。敦煌前列寶各劑量組腺體與周圍組織也有輕度粘連,腺體較柔軟,表面有光澤,但腺體較正常組織有輕度的腫脹。見圖 1～6。

圖6 敦煌前列寶高劑量組 (HE染色,100×)

3 討 論

中醫(yī)典籍中雖無前列腺炎病名,但針對其病因病機已有了深入的論述。歷覽諸家之言,濕熱是其主要病因病機,精濁瘀阻是主要病理變化,腎虛是后期疾病演變結(jié)果。敦煌前列寶是在出自敦煌出土卷子《輔行訣臟腑用藥法要》所載“大瀉腎湯”的基礎(chǔ)上,依據(jù)慢性前列腺炎腎虛為本,濕熱、血瘀為標(biāo)的病機本質(zhì),加減化裁而成?！按鬄a腎湯”以茯苓為君,淡以利竅,甘以助陽;重用大黃為臣,以清泄?jié)駸帷⒒钛鲋?輔以黃芩,清熱燥濕、瀉火解毒,獨特之處,在蕩滌祛實之中,妙用芍藥護陰;佐以干姜溫陽辛開,陰陽并調(diào),氣化以行。敦煌前列寶方中又酌加川牛膝、益母草以奏活血化瘀、利尿通淋之效。大量研究提示,在前列腺液中測到IL-8即可考慮為前列腺的感染[2-3];TNF-α是主要的促纖維化性細胞因子,可刺激成纖維細胞增殖和分泌ECM增多,同時通過細胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的協(xié)同作用參與促進纖維化;且刺激活的成纖維細胞一方面可自分泌TNF-α[4],另一方面可吸引白細胞向炎癥部位浸潤,進一步分泌細胞因子。本研究采用傳統(tǒng)的前列腺內(nèi)注射消痣靈方法成功復(fù)制了慢性非細菌性前列腺炎動物模型,并且以促炎細胞因子白介素IL-8和促纖維化性細胞因子(TNF-α)為觀察指標(biāo),研究結(jié)果表明敦煌前列寶可明顯改善實驗性慢性非細菌性前列腺炎大鼠前列腺組織的炎癥狀態(tài)及病理損傷,降低局部相關(guān)細胞因子IL-8和TNF-α的表達,為其臨床治療慢性前列腺炎提供理論依據(jù),也為敦煌古方的臨床開發(fā)提供基礎(chǔ)技術(shù)資料。

[1]王琦.王琦男科學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,653.

[2]Miller LJ,Fischer KA,Goralnick SJ,et al.Interleukiirlo levels in seminal Plasma:imPlications for chronic Prastatitischronic Pelvic Pain syndrome[J].JUrol,2002,167(2Pt1): 753-756.

[3]李宏軍,商學(xué)軍,黃宇烽.IL-10、IL-8在慢性前列腺炎中的改變及意義[J].中華男科學(xué)雜志,2004,10(7):486-487.

[4]張俊.腫瘤壞死因子在腎臟病中的作用[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1998,17(5):62-64.