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        瞬時受體電位通道C3/6與大電導(dǎo)鈣激活鉀通道在腎小球足細胞表面轉(zhuǎn)運中的作用

        2011-03-16 21:00:12謝永玲,楊卓
        天津醫(yī)藥 2011年2期
        關(guān)鍵詞:共表達電導(dǎo)離子通道

        由Slo 1基因編碼的大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(BKCa)與各種瞬時受體電位通道C(TRPCs)在許多細胞系上共表達,其中包括腎小球的足細胞(臟層上皮細胞)。在本實驗中,通過免疫共沉淀和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)pull-down方法證實在分化的足細胞系上的BKCa通道與內(nèi)源性的TRPC3/6通道相聯(lián)系。2種TRPC通道在足細胞上與Slo1共定位,并且在人胚腎(HEK)293T細胞上TRPC通道蛋白與Slo1瞬時共表達。在HEK293T細胞上,經(jīng)細胞表面生物素化方法以及共聚焦顯微鏡測定,TRPC6的表達可增加Slo1亞基的剪切變體(Slo1 VE?DEC)。經(jīng)膜片鉗全細胞以及膜內(nèi)面向外記錄顯示,BKCa通道電流會隨TRPC6的共表達而增大。相反,TRPC3無論對HEK293T細胞上BKCa的表達還是對電流峰值均無影響。在足細胞,經(jīng)小干擾RNA(siRNA)敲除內(nèi)源性TRPC6,使內(nèi)源性Slo1通道細胞表達下降,但是敲除TRPC3卻沒有影響。同時,敲除TRPC6也會降低足細胞BKCa通道的電壓激活外向電流,TRPC3則無此作用。這些資料表明TRPC3/6通道蛋白能與Slo1相結(jié)合,并且這種共定位可能成為BKCa通道激活的Ca2+庫。TRPC6通道在足細胞上BKCa通道亞基的表達調(diào)控中起重要作用。由Slo1基因編碼(也被稱為KCNMA1)的大電導(dǎo)鈣激活鉀離子通道(BKCa)在大量可興奮或不可興奮組織上均有表達并調(diào)控許多生理進程。鈣離子通過結(jié)合到BKCa通道C末端的復(fù)合位點,將其電壓激活的依賴性轉(zhuǎn)換為生理水平下的膜電位。BKCa通道通常表現(xiàn)出對鈣離子相對較低的親和力,并且只在鈣離子濃度高于胞漿鈣離子濃度時才會簇狀激活。胞質(zhì)鈣離子緩沖實驗操作提示BKCa通道的激活至少需要質(zhì)膜上的鈣離子通道的部分共定位。與此相一致的是,在大腦中表達的BKCa通道顯示能結(jié)合在不同類型電壓激活鈣通道的亞基上,從而形成通道復(fù)合體,這種排列提供了一種快速負反饋的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),因為BKCa通道的鈣依賴激活會導(dǎo)致神經(jīng)元的復(fù)極化,電壓激活鈣離子通道的失活以及鈣離子內(nèi)流的終止。

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