朱海霞 陳禮明 陳姿如

百草枯又名克無蹤、對(duì)草快，屬高效有機(jī)雜環(huán)類接觸性除草劑與脫葉劑。目前臨床上多采用血液定量、尿液定性的方法檢測(cè)百草枯，尿液定量檢測(cè)百草枯方法少見報(bào)道[1]。本文介紹一種快速、簡(jiǎn)便的百草枯尿液定量檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 722分光光度計(jì)（山東魯南瑞虹化工儀器有限公司），離心機(jī)；無水碳酸鈉、碳酸氫鈉、連二亞硫酸鈉（保險(xiǎn)粉）均為分析純，20%三氯醋酸。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以市售百草枯（20%，即200 g/L）為標(biāo)準(zhǔn)，用去離子蒸餾水稀釋為40 mg/L百草枯標(biāo)準(zhǔn)貯備液。取貯備液0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0 mL分別于8只玻璃試管中，加蒸餾水2.5 mL和正常尿液2.5 mL混勻，百草枯質(zhì)量濃度分別為0、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2、4.0和8.0 mg/L，加固體無水碳酸鈉0.5 g和碳酸氫鈉0.2 g，混合使其溶解，使其pH>9.0，加固體連二亞硫酸鈉0.3 g混合溶解呈藍(lán)色，722分光光度計(jì)比色，波長(zhǎng)396 nm，1 cm比色杯，以水為參比測(cè)定吸光度，平行操作3次取均值，以測(cè)定管吸光度減去空白管吸光度為Y值，百草枯濃度為X值求得標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程。

1.3 樣品測(cè)定 取2只10 mL玻璃試管分別稱為V和B管，各加患者尿液2.5 mL，蒸餾水2.5 mL，加固體無水碳酸鈉0.5 g和碳酸氫鈉0.2 g，混合使其溶解，pH>9.0，V管加固體連二亞硫酸鈉0.3 g混合溶解顯藍(lán)色。以水為參比，用722分光光度計(jì)分別對(duì)2管進(jìn)行比色，波長(zhǎng)396 nm，所得尿液空白吸光度視為AB,尿液測(cè)定管吸光度視為AV，（AV-AB）通過回歸方程或查標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的值乘以2即尿百草枯濃度。

2 結(jié)果

（1）線性關(guān)系和檢出限。百草枯濃度在0～5.0 mg/L線性關(guān)系良好，r=0.999 2，回歸方程Y=0.182 3 X+0.002 7，方法檢出限為0.10 mg/L，尿樣最低檢出濃度為0.10 mg/L。（2）方法的精密度。用健康查體者混合尿液配制0.5、2.0、10.0 mg/L低、中、高百草枯樣品，分別進(jìn)行6次重復(fù)試驗(yàn)，計(jì)算方法的精密度，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）分別為5.0%、4.2%和4.8%。（3）方法的回收率試驗(yàn)。用正常人尿液配制0.5、5.0和10.0 mg/L共3種百草枯樣品濃度，分別進(jìn)行6次重復(fù)試驗(yàn)，計(jì)算方法的回收率為95.5%～102.3%。其RSD分別為4.6%、3.2%和4.7%。（4）尿樣本底顏色的干擾。尿樣顏色呈淺黃色、褐色，深淺差別較大，在396 nm有較大的吸光度，百草枯中毒后的患者因尿液膽紅素增高，尿液更易變黃。（5）顯色穩(wěn)定性。加入顯色劑連二亞硫酸鈉后，其藍(lán)色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而褪色。

3 討論

采用722分光光度計(jì)比色法檢測(cè)尿液中的百草枯對(duì)診斷和治療百草枯中毒有重要意義，百草枯主要以原形從腎小球和腎小管濾過排泄。尿液中百草枯的量相對(duì)較高，有時(shí)當(dāng)血樣中已檢測(cè)不到時(shí)，尿液中仍能檢測(cè)到，所以檢測(cè)尿液中百草枯可作為是否需要血液灌流或透析的重要指標(biāo)；筆者將用到的固體試劑無水碳酸鈉、碳酸氫鈉及連二亞硫酸鈉稱量包裝于帶蓋的塑料樣品杯中，方便使用，若配制成液體試劑，則不呈藍(lán)色反應(yīng)；本法不需要昂貴器材設(shè)備，簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，一般接到樣品后10 min即可發(fā)出報(bào)告；線性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)和回收試驗(yàn)結(jié)果也顯示該方法能夠滿足臨床需要。

[1]孫世義,王翠,羅曉芳.分光光度法快速測(cè)定尿中百草枯[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2008,18（5）:819-874.