張偉 于爽 孫晶 張云麗 于俊生

(山東省青島市海慈醫(yī)療集團 山東青島 266033)

和腎絡(luò)顆粒是我院中藥自制制劑,由赤芍、白術(shù)、制大黃等八味中藥組成,具有和絡(luò)泄?jié)峁π?用于早、中期慢性腎功能衰竭等病癥,療效確切。本文對該制劑主要功效成分芍藥苷含量進行含量測定方法研究,為制備工藝和質(zhì)量標準制定提供依據(jù)。

1 主要儀器、試劑與藥材

Agilent 1100型高效液相色譜儀,芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所)(批號:110736-200320),色譜純乙腈(美國天地試劑公司),乙醇為藥用,水為重蒸餾水,其余試劑均為分析純。和腎絡(luò)顆粒由本院制劑室提供,陰性對照品實驗時先制,藥材購自本院中藥房。

2 方法與結(jié)果

(1)色譜條件:色譜柱:DiamonsilC18柱(150mm×4.6mm,5μm),流動相:乙腈-水(16∶84)為流動相,流速:1mL·min-1,柱溫:25℃,檢測波長:230nm。

(2)對照品溶液的制備:精密稱取芍藥苷對照品5.2mg,加甲醇定溶于10mL容量瓶中,配成0.52mg·mL-1的對照品溶液。

(3)供試品溶液的制備:取和腎絡(luò)顆粒10g,研細,精密稱重,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇溶液25mL,稱重,浸泡1hr,超聲處理30min,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液10mL,揮干,殘渣用1mL50%甲醇溶解,即為供試品溶液。

(4)陰性對照溶液的制備:取不含赤芍的處方比例量的其他藥材,按制備工藝制備成陰性對照品顆粒,照“2.3”項方法制成陰性對照溶液。

(5)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:按“2.1”項下條件,將對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液分別進樣10μl進行測定,結(jié)果對照品溶液和供試品溶液色譜圖在相應(yīng)的保留時間處均有最大吸收峰,供試品溶液相鄰峰無干擾;陰性樣品色譜圖中,在與對照品色譜相應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn),表明該制劑中其他組分對芍藥苷的測定無干擾。

(6)方法學考察:①線性關(guān)系考察:精密吸取濃度為0.52mg·mL-1的對照品溶液0.5、1、2、4、6、8、10μL進樣,測得峰面積,以對照品含量為橫坐標,峰面積為縱坐標,計算回歸方程為(Y=1189X+35,r=0.9998),表明芍藥苷進樣量在0.26～4.68μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。②精密度試驗:精密吸取對照品溶液(0.52mg·mL-1)2μL,連續(xù)進樣5次,測定芍藥苷峰面積RSD為1.60%(n=5)。精密度良好。③重復(fù)性試驗:精密稱定研細的同一批(070901)樣品粉末10.0g共5份,按“2.3”項方法制備5份樣品溶液,各吸取20μL進樣測定,阿魏酸含量RSD值為0.99%(n=5)。表明方法重復(fù)性較好。④穩(wěn)定性考察:精密吸取對照品溶液(0.52mg·mL-1)2μL,分別于配制后0、2、4、8、16、24h進樣,結(jié)果峰面積RSD為1.81%,表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

3 結(jié)語

高效液相色譜法含量測定研究,成功的關(guān)鍵是流動相的選擇,它要求在某一檢測波長下,樣品液和腎絡(luò)顆粒有8味中藥組成,化學成分復(fù)雜,檢測易受干擾,參照有關(guān)文獻,我們先后對比試驗了乙腈∶水=16∶84[1～3],甲醇-水(32∶68)[4],甲醇-水(25∶75)[5]等流動相,結(jié)果流動相為乙腈∶水=16∶84的樣品液色譜圖有較好的峰型和分離度,同等條件下陰性對照液無吸收峰。所以確定乙腈∶水=16∶84為芍藥苷含量測定的流動相。

本實驗建立的高效液相色譜法測定和腎絡(luò)顆粒中芍藥苷的含量,方法簡便、準確,分離效果好,無干擾,為制備工藝研究和成品質(zhì)量標準評價提供一種有效可行的方法。

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