鵝細(xì)小病毒基因組結(jié)構(gòu)特征研究進(jìn)展/朱海俠（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所），萬(wàn)春和，黃瑜//中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào).-2011,19(1).-81～82

鵝細(xì)小病毒(Goose parvovirus,GPV)屬細(xì)小病毒科,細(xì)小病毒屬,由我國(guó)學(xué)者方定一1956年首次分離報(bào)道。GPV基因組約5 Kb,由左右2個(gè)完整的開放閱讀框(open reading frame,ORF)組成:LORF(left ORF)和RORF(right ORF)。LORF編碼非結(jié)構(gòu)蛋白(nonstructural protein,NS)NS1和NS2,RORF編碼VP1、VP2和VP3三種結(jié)構(gòu)蛋白。本文針對(duì)近年來(lái)鵝細(xì)小病毒基因組結(jié)構(gòu)特征的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

柔嫩艾美耳球蟲抗藥性相關(guān)基因M20的克隆與表達(dá)/程軍（上海師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院），董輝，郭濤等//中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào).-2001,19(1)-62～67

利用前期構(gòu)建的柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella)地克珠利抗藥株和馬杜拉霉素抗藥株與各自母株之間的抑制性消減文庫(kù)而獲得的ESTs序列,選擇其中一個(gè)差異表達(dá)的EST序列(克隆號(hào)為M20),采用RACE技術(shù),以柔嫩艾美耳球蟲敏感株孢子化卵囊cDNA為模板,擴(kuò)增獲得了該基因的全長(zhǎng)cDNA序列,命名為M20,該基因全長(zhǎng)847 bp,包括一個(gè)525 bp的開放閱讀框,編碼174個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)理論分子量約為19 ku。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,該基因在敏感株中表達(dá)量高于地克珠利抗藥株和馬杜拉霉素抗藥株;在不同發(fā)育階段中,未孢子化卵囊表達(dá)量高于孢子化卵囊、子孢子以及裂殖子階段蟲體。將該基因克隆于原核表達(dá)質(zhì)粒pET28b中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28b-M20,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)后,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)獲得了重組蛋白,分子量約約為23 ku,該蛋白以包涵體形式存在,在IPTG誘導(dǎo)8h后表達(dá)穩(wěn)定,Western blot檢測(cè)表明,其具有較好的免疫原性。

羊種布氏菌體外藥物敏感性分析/姜海(中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所),崔步云,趙鴻雁等//中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào).-2011,27(4).-325～326，330

目的了解羊種布氏菌對(duì)常用抗生索的耐藥情況及耐藥機(jī)制。方法用微量稀釋法對(duì)國(guó)內(nèi)分離的69株羊種布氏菌進(jìn)行12種抗生素(阿奇霉素、克拉霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、多西環(huán)素、利福平、頭孢曲松、復(fù)方新諾明、鏈霉素)的耐藥檢測(cè)。結(jié)果除了阿奇霉素和克拉霉素外,所有羊種布氏菌對(duì)另外10種抗生素均敏感。所有菌株23SrRNA都具有單核苷酸多態(tài)性2632 T/C。結(jié)論 23SrRNA轉(zhuǎn)肽酶中心點(diǎn)突變是羊種布氏菌耐大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的機(jī)制之一。盡管布氏菌耐藥尚未對(duì)布病防控構(gòu)成威脅,但還需開展耐利福平監(jiān)測(cè)工作。

志賀氏菌病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展/康靜靜（河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院），楊玉榮，梁宏德//中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué).-2011,44(9).-1939～1944

志賀氏菌也稱痢疾桿菌,屬于革蘭氏陰性細(xì)胞內(nèi)致病菌,主要侵害結(jié)腸,引發(fā)炎癥并形成潰瘍,可引起頻繁的粘液性血性腹瀉,兒童和幼齡動(dòng)物有較高的感染率和死亡率。目前志賀氏菌病的臨床治療很困難,對(duì)志賀氏菌病發(fā)病機(jī)制的研究可為臨床治療提供理論依據(jù),本文從志賀氏菌的胞內(nèi)入侵機(jī)制、分子機(jī)制和免疫機(jī)制等方面概述志賀氏菌病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展。

抗犬Ⅰ型腺病毒單克隆抗體的制備及生物學(xué)特性鑒定/李曉葉(吉林大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院),劉穎,藍(lán)田豐等//中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào).-2011,27(11).-31～34

為制備抗犬I型腺病毒單克隆抗體,將犬I型腺病毒(CAV-I)細(xì)胞培養(yǎng)液飽和硫酸銨沉淀,差速離心濃縮,氯化銫密度梯度離心的方法純化后免疫BALB/c小鼠,三免后效價(jià)過(guò)1:10000即可取脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞在聚乙二醇(PEG)作用下融合,通過(guò)間接ELISA方法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株,有限稀釋法亞克隆,制備單克隆抗體,并對(duì)制備完成的單克隆抗體進(jìn)行生物學(xué)特性鑒定。獲得2株能穩(wěn)定分泌抗CAV-I的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞,命名為C8、E9,經(jīng)鑒定其亞型分別為IgG1和IgG2a。間接ELISA檢測(cè)效價(jià),2株單抗細(xì)胞上清液效價(jià)為1:3200～1:6400,腹水效價(jià)為1:25600～1:51200。該單克隆抗體與CDV、FPV、FCV病毒均無(wú)交叉反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)成功制備了抗CAV-I單克隆抗體,為進(jìn)一步建立相關(guān)診斷方法奠定了基礎(chǔ)。

犬細(xì)小病毒VP2基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)與檢測(cè)/畢聰明（遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院），費(fèi)東亮，陳強(qiáng)等//中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào).-2011,27(7).-352～355

為表達(dá)犬細(xì)小病毒VP2蛋白(CPVVP2),用于犬細(xì)小病毒病的診斷、疫苗研制和VP2蛋白功能研究,根據(jù)基因庫(kù)已發(fā)表犬細(xì)小病毒序列設(shè)計(jì)合成了VP2基因的1對(duì)特異引物,以細(xì)小病毒感染的犬糞樣品中提取的總DNA為模板,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,把擴(kuò)增產(chǎn)物克隆至pMD18-T載體進(jìn)行測(cè)序、鑒定。將克隆的VP2基因片段克隆至原核表達(dá)載體PGEX-6P-1,再將構(gòu)建成功的原核表達(dá)質(zhì)粒載體PGEX-6P-VP2轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21中,進(jìn)行鑒定、測(cè)序、表達(dá)。結(jié)果表明,克隆的VP2基因片段全長(zhǎng)1755bp,與6個(gè)VP2基因序列的同源性為98.7%～99.7%。Western-blotting分析顯示,表達(dá)產(chǎn)物約為90kD的融合蛋白,可被犬細(xì)小病毒陽(yáng)性血清所識(shí)別,具有良好的反應(yīng)原性。

雞傳染性支氣管炎病毒HN104株的鑒定及S1基因的分子特征/劉文杰(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院),王忠田,李新生等//中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào).-2001,27(7).-343～347

2010年4月從河南省某疑似患雞傳染性支氣管炎雞場(chǎng)中分離到一株病毒。通過(guò)SPF雞胚致侏儒實(shí)驗(yàn),雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn),干擾新城疫病毒增殖試驗(yàn)和RT-PCR試驗(yàn)確認(rèn)該病毒為一變異的雞傳染性支氣管炎病毒。該病毒尿囊液凝集雞紅細(xì)胞的HA價(jià)為0,經(jīng)胰酶處理后為27;EID50(雞胚半數(shù)感染量)為10-5.5/0.1mL;能夠顯著干擾雞新城疫病毒LaSota株在雞胚中的增殖;動(dòng)物回歸試驗(yàn)結(jié)果顯示該病毒可致SPF雛雞出現(xiàn)腎臟腫大,呈花斑腎。其S1基因全長(zhǎng)為1617bp,經(jīng)序列分析發(fā)現(xiàn)與雞傳染性支氣管炎疫苗Massachusetts株、T株、4/91株親緣關(guān)系較遠(yuǎn)低于78%。

綿羊痘病毒RPO30基因的克隆及序列分析/趙志荀(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院),吳國(guó)華,顏新敏等//中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào).-2011,27(7).-304～308

選擇羊痘病毒RNA聚合酶RPO30進(jìn)行分析,為進(jìn)行RNAi羊痘病毒研究,進(jìn)行目的基因的初步篩選。PCR擴(kuò)增RPO30基因,連入pMD18-T simple載體并轉(zhuǎn)化DH5a大腸桿菌。經(jīng)藍(lán)白斑篩選挑選白斑制備質(zhì)粒,經(jīng)雙酶切、PCR及測(cè)序鑒定。結(jié)果成功克隆了RPO30基因,克隆的SSPV RPO30基因ORF為585bp,編碼193個(gè)氨基酸,閱讀框內(nèi)有一個(gè)HindIII酶切位點(diǎn),測(cè)序結(jié)果與Gen Bank數(shù)據(jù)庫(kù)中不同痘病毒毒株之間同源性存在著明顯區(qū)別。進(jìn)一步經(jīng)過(guò)生物學(xué)軟件分析表明RPO30蛋白質(zhì)氨基酸4—12、18—26、50—61、68—92,176—190位之間區(qū)域形成活性中心的可能性較大,選擇這些區(qū)域進(jìn)行作用可能會(huì)造成該基因產(chǎn)物酶的失活,從而高效抑制病毒的復(fù)制。

寧波市狂犬病病毒NB0901株核蛋白基因的序列分析/易波(寧波市疾病預(yù)防控制中心傳染病防制所);倪紅霞;方挺等//中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志.-2011,22(2).-148～150

目的通過(guò)RT-PCR方法對(duì)2009年寧波市狂犬病病毒分離株(NB0901)的N基因擴(kuò)增并測(cè)序,了解寧波地區(qū)狂犬病病毒的流行特點(diǎn)。方法運(yùn)用RT-PCR方法和序列測(cè)定方法獲得NB0901株的N基因序列,并在核苷酸和氨基酸水平與疫苗株(3aG和CNT-1)進(jìn)行同源性比較,同時(shí)進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析。結(jié)果狂犬病病毒NB0901株與疫苗株的核苷酸和氨基酸序列同源性分別在86.6%～90.1%和95.5%～98.8%之間。NB0901株N蛋白的抗原表位與疫苗株相比后發(fā)現(xiàn)在NⅠ和NⅡ抗原表位存在突變。而在Th細(xì)胞表位上,NB0901株與CNT-1株完全一致,與3aG株相比變異較大。進(jìn)化結(jié)果表明NB0901株屬于狂犬病病毒Ⅰ群中的A亞型。結(jié)論狂犬病病毒NB0901株和當(dāng)前疫苗株雖同屬于Ⅰ群,但是與疫苗株相比存在差異,從氨基酸序列水平上分析,CNT-1株較3aG株更能有效保護(hù)流行毒株感染。

豬腦心肌炎病毒NJ08株基因組序列測(cè)定與分析/白娟(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病診斷與免疫重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室)蔣康富,李玉峰等//中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào).-2011,33(5).-402～404

為測(cè)定豬源腦心肌炎病毒(EMCV)NJ08分離株全基因序列,本研究應(yīng)用RT-PCR方法分5個(gè)基因片段擴(kuò)增NJ08分離株的基因組,同時(shí)應(yīng)用3'-RACE和5'-RACE技術(shù)擴(kuò)增3'-UTR和5'-UTR,分別克隆于pMD18-T載體中進(jìn)行測(cè)序,獲得EMCVNJ08株全基因組cDNA序列,并將全基因組及其推導(dǎo)的氨基酸序列與GenBank中登錄的國(guó)內(nèi)外參考病毒株進(jìn)行同源性比較及系統(tǒng)進(jìn)化分析。結(jié)果表明:EMCVNJ08分離株基因組全長(zhǎng)7724bp;屬于Ia亞群;與GXLC、GX0602、BJC3、HB1等國(guó)內(nèi)分離株以及BEL-2887A、CBNU、K3、K11、EMCV-R、PV21等國(guó)外分離株同源性達(dá)99%以上;EMCV流行株的非結(jié)構(gòu)蛋白中3D最為保守,2A變異最大,結(jié)構(gòu)蛋白中VP2最為保守,VP1變異最大。本研究豐富了我國(guó)EMCV分子流行病學(xué)資料。

我國(guó)部分地區(qū)蛋雞ALV-J分離株gp85基因遺傳進(jìn)化分析/潘偉(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室),高玉龍,劉超男等//中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào).-2011,33(5).-399～401,414

為了解我國(guó)蛋雞J亞型白血病病毒(ALV-J)株來(lái)源及其遺傳進(jìn)化關(guān)系,本研究對(duì)2009年從我國(guó)6個(gè)省區(qū)蛋雞場(chǎng)分離到的19株ALV-J的gp85基因進(jìn)行克隆和測(cè)序,并與11個(gè)ALV-J參考株gp85基因作了比較分析。結(jié)果表明:19個(gè)ALV-J分離株的gp85基因長(zhǎng)度為894bp～924bp不等,分別編碼298～308個(gè)氨基酸;各病毒株間gp85推導(dǎo)氨基酸的同源性為71.3%～100%。遺傳進(jìn)化分析表明,目前我國(guó)蛋雞ALV-J分離株來(lái)源復(fù)雜,其中13個(gè)分離株與英國(guó)原型株HPRS-103、國(guó)內(nèi)麻黃肉雞株SCAU-0901親緣關(guān)系較近;3個(gè)分離株與美國(guó)株ADOL-7501及國(guó)內(nèi)白羽肉雞株HN0001處在同一大的分支;而另外3個(gè)分離株則各自形成獨(dú)立的分支,表明其gp85基因發(fā)生了較大變異。本研究表明,19個(gè)分離株與國(guó)內(nèi)早期肉雞分離株親緣關(guān)系較遠(yuǎn),提示我國(guó)當(dāng)前蛋雞ALV-J株可能并非源自國(guó)內(nèi)早期肉雞ALV-J株,其來(lái)源有待進(jìn)一步研究。

牛腸道病毒的分離鑒定/李英利(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/大動(dòng)物病研究室),常繼濤,于力//中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào).-2011,33(5).-388～390

本研究從內(nèi)蒙古某奶牛場(chǎng)的犢牛糞便樣品中分離的一株牛腸道病毒(BEV),命名為BHM26,通過(guò)電鏡觀察顯示和分子生物學(xué)鑒定,發(fā)現(xiàn)病毒粒子在細(xì)胞漿中呈結(jié)晶狀排列,單一病毒粒子呈典型小RNA病毒粒子形態(tài),直徑為25nm～30nm,無(wú)囊膜;病毒的部分3D蛋白編碼區(qū)和全長(zhǎng)3'UTR區(qū)段的1026bpDNA片段的RT-PCR擴(kuò)增和序列分析表明,其核苷酸序列與GenBank登錄的參考病毒株核苷酸序列同源性為71.9%～87%,其中與BEVWye-3A株同源性最高,為87%。分析表明中國(guó)BEV分離株與國(guó)外參考毒株具有較大差異。

抗豬偽狂犬病病毒gH抗體的制備及gH在感染細(xì)胞中表達(dá)分析/劉慶偉(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所獸醫(yī)公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室)，邱亞峰，王曉杜等//中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào).-2011,33(5).-383～387

為檢測(cè)偽狂犬病病毒(PRV)在體外細(xì)胞中糖蛋白H(gH)的表達(dá)情況,本研究構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET-gHN660,并在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,純化的gH重組蛋白免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物制備抗PRVgH抗體,經(jīng)westernblot和IFA檢測(cè)到病毒感染細(xì)胞中g(shù)H蛋白的表達(dá),病毒感染細(xì)胞后表達(dá)的gH蛋白大小為95ku,定位于細(xì)胞漿中,gH蛋白在病毒感染細(xì)胞4h可以檢出,隨PRV的復(fù)制gH蛋白表達(dá)增加,gH蛋白可以作為PRV復(fù)制的指示蛋白。本研究利用制備的抗體分析感染細(xì)胞中g(shù)H蛋白的表達(dá)情況,初步探討感染細(xì)胞中PRV的復(fù)制,為PRV和宿主相互作用的研究奠定基礎(chǔ)。

豬白細(xì)胞介素-2在BHK-21細(xì)胞中表達(dá)及其活性分析/王大偉(石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院),喬軍,張輝等//中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào).-2011,33(5).-378～382

為鑒定BHK-21細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)豬白細(xì)胞介素-2(PoIL-2)的活性,本研究利用RT-PCR技術(shù)從豬的淋巴細(xì)胞中克隆PoIL-2基因,將其連接于pcDNA3.1載體中,并轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞。經(jīng)過(guò)G418篩選及RT-PCR鑒定,獲得穩(wěn)定表達(dá)PoIL-2基因的BHK-21細(xì)胞系。采用實(shí)時(shí)定量PCR及ELISA測(cè)定PoIL-2在BHK-21細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),同時(shí)以淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)(MTT)檢測(cè)PoIL-2蛋白活性。試驗(yàn)結(jié)果表明穩(wěn)定整合PoIL-2基因的BHK-21細(xì)胞系其PoIL-2mRNA的轉(zhuǎn)錄效率是陰性對(duì)照組1.43倍,蛋白表達(dá)量是陰性對(duì)照組1.29倍。MTT試驗(yàn)表明真核表達(dá)的PoIL-2促淋巴細(xì)胞增殖活性與陰性對(duì)照組相比差異極顯著(p<0.01),表明BHK-21細(xì)胞表達(dá)的PoIL-2具有良好的生物學(xué)活性。本研究為開發(fā)新型基因工程疫苗佐劑和抗病毒制劑奠定了基礎(chǔ)。

狂犬病病毒糖蛋白在Bac-to-bac桿狀病毒系統(tǒng)中的表達(dá)及應(yīng)用/范曉娟(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室),李剛,李偉等//中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào).-2011,33(5).-366～369

為表達(dá)狂犬病病毒(RV)糖蛋白(G),本研究通過(guò)RTPCR方法克隆RVFluryLEP病毒株G基因,將其克隆至質(zhì)粒pFastBacHTα中,重組質(zhì)粒pFastBac-RV-G轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)同源重組獲得重組桿狀病毒穿梭質(zhì)粒Bacmid-RV-G,將其轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞sf21獲得含有G基因的重組桿狀病毒。采用SDS-PAGE和westernblot對(duì)重組蛋白進(jìn)行鑒定及抗原性分析,以重組G蛋白作為包被抗原的ELISA檢測(cè)36份犬血清樣品。結(jié)果表明,在Bac-to-bac桿狀病毒系統(tǒng)中表達(dá)的RVG蛋白能與histag單克隆抗體及RV陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng),其相對(duì)分子量為60ku;與以RV為包被抗原的商品化ELISA試劑盒相比,以重組RVG蛋白為抗原建立的間接ELISA的敏感性、特異性和符合率分別為80%、81.8%和80.6%,表明桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)的RVG蛋白是檢測(cè)RV抗體的理想抗原蛋白,作為一種亞單位疫苗具有潛在的應(yīng)用前景。

穩(wěn)定表達(dá)T7RNA聚合酶PK-15細(xì)胞系的建立/黃俊華(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/豬傳染病研究室)，賀番，孫元等//中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào).-2001,33(5).-358～361

為構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)T7RNA聚合酶(RNAP)的豬腎細(xì)胞系(PK-15),本研究采用PCR方法,以E.coliBL21(DE3)細(xì)菌基因組為模板擴(kuò)增T7RNAP基因,將其克隆到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLXSN中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pLXSN-T7。采用脂質(zhì)體將pLXSN-T7轉(zhuǎn)染至PT67細(xì)胞中,經(jīng)G418篩選培養(yǎng)獲得重組逆轉(zhuǎn)錄病毒rMLV-T7,將其接種于PK-15細(xì)胞進(jìn)行G418加壓篩選和純化;應(yīng)用PCR、間接免疫熒光試驗(yàn)及T7啟動(dòng)子控制下的紅色熒光蛋白的重組表達(dá)質(zhì)粒(pET-RED)進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),檢測(cè)T7RNAP的表達(dá)及活性,結(jié)果表明篩選所得的細(xì)胞系PK/T7的不同代次均具有轉(zhuǎn)錄活性。本研究建立穩(wěn)定表達(dá)T7RNAP的細(xì)胞系PK/T7,為實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)T7啟動(dòng)的轉(zhuǎn)錄和豬源RNA病毒等的反向遺傳操作提供了有效的方法。

兔出血癥病毒衣殼蛋白VP60與兔肝臟細(xì)胞中相互作用蛋白的初步篩選/穆亞芳(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究室)，劉家森，郭東春等//中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào).-2001,33(5).-354～357

為鑒定兔出血癥病毒(RHDV)在感染兔肝臟過(guò)程中與肝細(xì)胞膜表面相互作用的靶蛋白,本研究利用SMART文庫(kù)構(gòu)建技術(shù)構(gòu)建了兔肝臟細(xì)胞的真核表達(dá)cDNA重組質(zhì)粒文庫(kù),將其轉(zhuǎn)染SP2/0細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選表達(dá)兔肝細(xì)胞蛋白的陽(yáng)性SP2/0細(xì)胞。以RHDV-VP60蛋白作為固相包被抗原,經(jīng)篩選,獲得能夠與VP60蛋白相互結(jié)合的表達(dá)性陽(yáng)性SP2/0細(xì)胞克隆。測(cè)序表明26個(gè)克隆與兔的一些功能性蛋白有較高的同源性,其中包括代謝酶類13個(gè)、免疫信號(hào)通路受體蛋白5個(gè)以及其他細(xì)胞膜蛋白等。本研究鑒定的與RHDVVP60具有結(jié)合性的細(xì)胞蛋白為RHDV感染機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。

雞傳染性支氣管炎病毒ck/CH/LHB/100801株的分離鑒定及分子特征研究/馬會(huì)杰(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)),劉孝珍,韓宗璽等//中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào).-2011,33(5).-348～353

本研究于2010年8月從河北省某雞場(chǎng)雞群中分離一株病毒,通過(guò)對(duì)分離株進(jìn)行電子顯微鏡觀察、雞胚致病性試驗(yàn)、血凝特性試驗(yàn)等生物學(xué)特性及雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)核蛋白基因RT-PCR方法鑒定,結(jié)果表明分離株為IBV,命名為ck/CH/LHB/100801。根據(jù)GenBank中登錄的IBV基因組序列,設(shè)計(jì)擴(kuò)增病毒全基因組的19對(duì)引物,并擴(kuò)增病毒基因組,采用3`-RACE和5`-RACE技術(shù),擴(kuò)增得到該病毒全部基因組序列。通過(guò)與已發(fā)表的參考病毒株全基因組序列比較表明,該分離株基因組全長(zhǎng)為27675bp,共有10個(gè)開放閱讀框,其基因排序?yàn)?5'-cap-Replicase-S-3a-3b-3c-M-5a-5b-N-poly(A)-3',纖突蛋白裂解位點(diǎn)為534RRFRR538。序列分析表明ck/CH/LHB/100801與臺(tái)灣分離株TW2296/95的結(jié)構(gòu)蛋白序列相似性高達(dá)99.8%,進(jìn)化親緣關(guān)系最近,推測(cè)兩分離株間可能具有相同的進(jìn)化來(lái)源。

禽源U6啟動(dòng)子介導(dǎo)雞馬立克氏病病毒gI、gE基因特異siRNA的篩選及干擾活性鑒定H5亞型禽流感疫苗變異候選株的構(gòu)建/張文俊(揚(yáng)州大學(xué)農(nóng)業(yè)部畜禽傳染病學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室),薛濤,吳小偉等//中國(guó)家禽.-2011,33(8).-14～18

本文就2008年在江蘇某雞場(chǎng)分離到的一株發(fā)生抗原變異的H5N1亞型禽流感病毒A/chicken/Huadong/4/2008(wt-DT株)開展如下研究:利用反向遺傳技術(shù),刪除wt-DT株病毒血凝素(HA)基因多堿性氨基酸序列,使之成為低致病特征,再與wt-DT株的神經(jīng)氨酸酶(NA)基因組合,結(jié)合雞胚高產(chǎn)病毒PR8株的6個(gè)內(nèi)部片段骨架,構(gòu)建針對(duì)此種變異H5亞型禽流感的疫苗株,結(jié)果成功拯救出重組病毒rH5N1/PR8。病毒在雞胚和MDCK細(xì)胞上均具有較好的繁殖能力,相對(duì)于wt-DT株,rH5N1/PR8在MDCK細(xì)胞上的繁殖能力明顯提高。rH5N1/PR8對(duì)SPF雞和雞胚無(wú)致病性,在雞體內(nèi)的免疫保護(hù)效果良好,符合疫苗候選株的標(biāo)準(zhǔn)。

泊洛沙姆—辛酸法對(duì)雞卵黃脫脂條件的研究/張倫(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院),高軒,李明義//中國(guó)動(dòng)物檢疫.-2011,28(3).-49～51

本文就泊洛沙姆濃度、辛酸濃度、泊洛沙姆沉淀法沉淀離心條件對(duì)泊洛沙姆-辛酸法對(duì)雞卵黃脫脂的影響進(jìn)行了探討。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:泊洛沙姆濃度、辛酸濃度分別對(duì)卵黃脫脂存在不同程度影響,卵黃稀釋液沉淀離心條件對(duì)卵黃脫脂影響不大。蛋黃稀釋液不經(jīng)離心直接紗布過(guò)濾,辛酸濃度為0.2%,泊洛沙姆濃度分別為0.6%、0.8%、1%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%的7個(gè)處理中,以1.2%濃度的提取效果最好;泊洛沙姆濃度為1.2%,辛酸濃度為0.2%,蛋黃稀釋液經(jīng)離心處理和紗布過(guò)濾處理對(duì)卵黃脫脂影響不大;泊洛沙姆濃度為1.2%,蛋黃稀釋液紗布過(guò)濾處理,辛酸濃度分別為0、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的6個(gè)處理中,以0.2%濃度的提取效果最好。