許黎黎,張連峰
(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所,北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院比較醫(yī)學(xué)中心,北京 100021)
埃博拉出血熱(Ebola hemorrhagic fever,EHF)是由埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)引起的一種急性出血性傳染病,自1976年在非洲中部扎伊爾(現(xiàn)剛果民主共和國(guó))和蘇丹暴發(fā)流行后,已在非洲中部形成地方流行,主要包括烏干達(dá)、剛果、加蓬、蘇丹、科特迪瓦、利比里亞、南非等國(guó)家于20世紀(jì)70年代在非洲首次發(fā)現(xiàn)[1-3],具有極高的傳染性,致死率高達(dá)50%~88%。人主要通過(guò)接觸病人或感染動(dòng)物的體液、排泄物、分泌物等而感染。臨床表現(xiàn)主要為發(fā)熱、出血和多臟器損害。
作為18種可引起人類(lèi)病毒性出血熱綜合征的病毒之一,EBOV包括四種亞型:埃博拉-扎伊爾(Ebola-Zaire,ZEBOV),埃博拉-蘇丹(Ebola-Sudan,SEBOV),埃博拉-科特迪瓦(Ebola-Cote d’Ivoire,CEBOV)和埃博拉-萊斯頓(Ebola-Reston,REBOV)。發(fā)生在扎伊爾、蘇丹和科特迪瓦的三種亞型EBOV已被證實(shí)能夠使人類(lèi)致病。不同亞型毒力不同,ZEBOV毒力最強(qiáng),人感染死亡率高達(dá)88%;SEBOV次之,致死率約為50%;CEBOV對(duì)黑猩猩有致死性,對(duì)人的毒力較弱,致病但不致死;REBOV對(duì)非人靈長(zhǎng)類(lèi)有致死性,人感染不發(fā)病[4]。
由于其在自然界的宿主尚未查明,且暫無(wú)有效的抗病毒藥物和疫苗,目前對(duì)埃博拉出血熱的預(yù)防還極為困難。世界衛(wèi)生組織已將EBOV列為對(duì)人類(lèi)危害最嚴(yán)重的第4級(jí)病毒,相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作要求必須在高度安全的BSL-4級(jí)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。
1.1 自然宿主
EBOV的自然宿主至今尚未確定。研究表明蝙蝠可能是EBOV的潛在自然宿主之一[5]。法國(guó)研究人員于2001至2003年間在爆發(fā)過(guò)埃博拉出血熱疫情的加蓬和剛果兩國(guó)捕捉了上千只不同的動(dòng)物,其中包括679只不同種類(lèi)的蝙蝠,222只鳥(niǎo)類(lèi)和129只松鼠等小哺乳動(dòng)物。通過(guò)檢測(cè),研究人員在3種近29只蝙蝠的體內(nèi)(包括血液、肝臟和脾臟中)發(fā)現(xiàn)了感染過(guò)EBOV的痕跡,但這些蝙蝠卻都沒(méi)有出現(xiàn)埃博拉出血熱的癥狀,他們推測(cè)蝙蝠具有成為EBOV自然宿主的條件[6,7]。目前認(rèn)為EBOV的宿主也可能為某些嚙齒類(lèi)動(dòng)物或鳥(niǎo)類(lèi)。從中非共和國(guó)的2種嚙齒類(lèi)動(dòng)物的器官中檢測(cè)到了與ZEBOV型的GP和L相同的序列,說(shuō)明EBOV與非洲動(dòng)物種群可能有著共同的進(jìn)化歷史。另一方面,EBOV入侵的生化途徑及病毒的蛋白質(zhì)外殼與多種鳥(niǎo)類(lèi)的反轉(zhuǎn)錄病毒非常相似,這提示鳥(niǎo)類(lèi)可能是EBOV的天然宿主,或鳥(niǎo)類(lèi)反轉(zhuǎn)錄病毒與EBOV有著相同的祖先,但鳥(niǎo)類(lèi)是否傳染EBOV還未能確定[8]。
1.2 傳播途徑
接觸傳播是本病最主要的傳播途徑。病人或動(dòng)物的血液及其他體液,嘔吐物,分泌物,排泄物(如尿、糞便)等均具有高度的傳染性,可以通過(guò)接觸病人和亞臨床感染者(特別是血液,排泄物及其它污染物)而感染。病人自急性期至死亡前血液中均可維持很高的病毒含量,醫(yī)護(hù)人員在治療,護(hù)理病人時(shí),或處理病人尸體過(guò)程中容易受到感染,病人的轉(zhuǎn)診還可造成醫(yī)院之間的傳播。醫(yī)院內(nèi)傳播是導(dǎo)致埃博拉出血熱暴發(fā)流行的重要因素。
吸入感染性的分泌物,排泄物等也可造成感染。l995年曾有學(xué)者報(bào)道用恒河猴,獼猴作為感染EBOV實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,含有感染動(dòng)物分泌物,排泄物的飛沫通過(guò)空氣傳染了正常猴,證實(shí)了氣溶膠在EBOV傳播中的作用。
以往,使用未經(jīng)消毒的注射器是該病的重要傳播途徑。1976年扎伊爾一位疑診為瘧疾的病人,在接受注射治療后1周內(nèi),數(shù)位在該院住院接受注射治療的病人感染了埃博拉出血熱而死亡。另外,在一埃博拉出血熱病人發(fā)病后第39天和第61天,甚至第101天的精液中均檢測(cè)到EBOV,故存在性傳播的可能性。
EBOV屬絲狀病毒屬(FilovirusFamily),其形態(tài)包括桿狀,絲狀,及“L”形,毒粒長(zhǎng)度平均l000nm,直徑70~90nm。EBOV基因組是不分節(jié)段的負(fù)鏈RNA,長(zhǎng)度為18.9kb,含7個(gè)開(kāi)放閱讀框[9,10],在病毒基因組中的基因排列順序?yàn)椋?’-NP-VP35-VP40-GP/sGP-VP30-VP24-L-5’,每種產(chǎn)物均由各自單獨(dú)的mRNA所編碼。包膜糖蛋白GP為I型跨膜蛋白,具有2個(gè)閱讀框,分別編碼1個(gè)分泌型的小蛋白sGP(secreted GP)和1個(gè)全長(zhǎng)的跨膜GP,sGP作為GP的早期產(chǎn)物被大量分泌出來(lái),可能與干擾免疫細(xì)胞對(duì)病毒的殺傷作用有關(guān),然后再通過(guò)RNA編輯或框架漂移方式合成GP蛋白。GP是病毒表面棘突的唯一結(jié)構(gòu)蛋白,它通過(guò)與受體結(jié)合介導(dǎo)病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞;GP可通過(guò)與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合破壞微血管的完整性,引起血管滲漏[11]。VP40是與毒粒內(nèi)膜相關(guān)的基質(zhì)蛋白,在病毒以病毒樣顆粒(virus-like particles,VLPs)方式在宿主細(xì)胞芽生過(guò)程中起重要作用。VP24為小型膜蛋白,可能與病毒的組裝和出芽釋放有關(guān)[12]。研究表明,正是這三種與膜相偶聯(lián)的蛋白(GP,VP40和VP24),在病毒的毒粒裝配、出芽以及致病過(guò)程中起到了相當(dāng)關(guān)鍵的作用[13,14]。NP為病毒的核衣殼蛋白;VP35不僅在RNA的合成中起到不可替代的作用,而且還可以抑制I型干擾素;VP30是一種鋅指結(jié)構(gòu)蛋白,能與DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)結(jié)合,可激活病毒的轉(zhuǎn)錄;病毒多聚酶L(polymerase)是一種依賴(lài)于RNA的RNA聚合酶。
病毒進(jìn)入機(jī)體后,可能在局部淋巴結(jié)首先感染單核吞噬系統(tǒng)的細(xì)胞(mononuc1ear phagocytic system,MPS),包括單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等等。一些感染的MPS細(xì)胞轉(zhuǎn)移到其他組織,當(dāng)病毒釋放到淋巴或血液中,可以引起肝臟、脾臟以及全身固定的或移動(dòng)的巨噬細(xì)胞感染。從MPS細(xì)胞釋放的病毒可以感染相鄰的細(xì)胞,包括肝細(xì)胞、腎上腺上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等。感染的MPS細(xì)胞同時(shí)被激活,釋放大量的細(xì)胞因子和趨化因子。這些細(xì)胞活性物質(zhì)可增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性,誘導(dǎo)表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞表面粘附和促凝因子,以及組織破壞后血管壁膠原暴露,釋放組織因子等,最終導(dǎo)致彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)。埃博拉出血熱的一個(gè)顯著特點(diǎn)是抑制宿主的免疫反應(yīng),在感染晚期可發(fā)生脾臟、胸腺和淋巴結(jié)等大量淋巴細(xì)胞凋亡[5,14-16],患者經(jīng)常還沒(méi)有出現(xiàn)有效的免疫反應(yīng)就已經(jīng)死亡,甚至在幸存者的恢復(fù)期也檢測(cè)不到病毒的中和抗體[14]。
感染后主要的病理改變是皮膚,黏膜,臟器的出血,在很多器官可以見(jiàn)到灶性壞死,但是以肝臟、淋巴組織最為嚴(yán)重。肝細(xì)胞點(diǎn),灶樣壞死是本病最顯著的特點(diǎn),可見(jiàn)小包涵體和凋亡小體。
病人感染后潛伏期為2~2ld,一般為5~12d。感染EBOV后可不發(fā)病或呈輕型,非重病病人發(fā)病后2周逐漸恢復(fù)。起病急,臨床表現(xiàn)為高熱、畏寒、頭痛、肌痛、惡心、結(jié)膜充血及相對(duì)緩脈。2~3d后可有嘔吐、腹痛、腹瀉、血便等表現(xiàn),半數(shù)病人有咽痛及咳嗽。病后4~5d進(jìn)入極期,病人可出現(xiàn)神志的改變,如譫妄、嗜睡等,重癥病人在發(fā)病數(shù)日可出現(xiàn)咯血,鼻、口腔、結(jié)膜下、胃腸道、陰道及皮膚出血或血尿,第10天為出血高峰,50%以上的病人出現(xiàn)嚴(yán)重的出血,并可因出血、肝腎功能衰竭及致死性并發(fā)癥而死亡。90%的死亡病人在發(fā)病后12d內(nèi)死亡(7~14d)。病人最顯著的表現(xiàn)為低血壓、休克和面部水腫,還可出現(xiàn)DIC,電解質(zhì)和酸堿的平衡失調(diào)等。急性期并發(fā)癥有心肌炎、細(xì)菌性肺炎等。由于病毒持續(xù)存在于精液中,也可引起睪丸炎、睪丸萎縮等遲發(fā)癥。在病程第5天至第7天可出現(xiàn)麻疹樣皮疹,以肩部、手心和腳掌多見(jiàn),數(shù)天后消退并脫屑,部分病人可較長(zhǎng)期地留有皮膚的改變[5,15,16]。
4.1 先天免疫損傷
許多研究表明先天免疫反應(yīng)在EBOV感染中起核心作用,人類(lèi)和非人靈長(zhǎng)類(lèi)感染后可檢測(cè)到伴隨大量細(xì)胞因子產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)。在人體內(nèi),EBOV選擇性抑制IFN-α和IFN-γ的相關(guān)功能,Basler等[17]鑒別出了可以干擾IFN反應(yīng)的兩種EBOV蛋白,其中VP24可能阻礙IFN信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),VP35阻礙IRF3的磷酸化,而IRF3在IFN產(chǎn)生中起轉(zhuǎn)錄因子的作用。單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)在EBOV感染中是最重要的早期靶細(xì)胞,但機(jī)體感染EBOV后,單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的作用有多大,還未被廣泛研究。相反,在先天免疫和獲得性免疫中都有重要作用的DCs,在體外感染EBOV實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)其并不行使功能,即不能產(chǎn)生前炎性細(xì)胞活素或表達(dá)協(xié)同刺激分子。自然殺傷細(xì)胞NK也是受EBOV感染影響的先天免疫細(xì)胞,這些細(xì)胞以獨(dú)立抗原的方式應(yīng)答病毒的感染,并通過(guò)釋放穿孔素和顆粒酶誘導(dǎo)凋亡來(lái)殺死被感染的細(xì)胞。非人類(lèi)靈長(zhǎng)感染EBOV的過(guò)程中,NK細(xì)胞的數(shù)量銳減,第4天后幾乎完全消失,而另有研究表明,人類(lèi)感染EBOV后體內(nèi)NK細(xì)胞的數(shù)量?jī)H略為減少。
4.2 獲得性免疫損傷
從人類(lèi)感染EBOV獲得的有效數(shù)據(jù)中得出,獲得性免疫在致死和非致死病例中呈顯著不同,這暗示了獲得性免疫在EBOV感染中的重要作用。對(duì)幸存者的研究顯示,機(jī)體被攻擊2d后就產(chǎn)生特異性IgM抗體,在5~8d后產(chǎn)生特異性IgG抗體。相反,在致死病例中,只有30%的病人被檢測(cè)出了低水平的特異性IgM,而特異性IgG未被檢測(cè)到。在癥狀發(fā)生后的初期出現(xiàn)的獲得性免疫應(yīng)答對(duì)患者能否存活有重要影響,幸存者在感染EBOV后出現(xiàn)的早期炎癥反應(yīng)也使這個(gè)假設(shè)得到了支持。
EBOV可在人、猴、豚鼠等哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞中增殖,其中Vero-98,Vero-E6,He1a-229細(xì)胞最敏感。病毒接種后,6~7d后出現(xiàn)細(xì)胞病變,表現(xiàn)為細(xì)胞圓化,皺縮,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)纖維狀或顆粒狀結(jié)構(gòu)的包涵體[16]。
目前常用的EBOV動(dòng)物模型主要包括小鼠、豚鼠、及非人靈長(zhǎng)類(lèi)三種。免疫系統(tǒng)完整的成熟小鼠并不能感染EBOV,推測(cè)可能是由于其強(qiáng)大的先天免疫系統(tǒng),尤其是IFN-Ⅰ型反應(yīng)所導(dǎo)致[18]。然而,腹腔或腦內(nèi)接種病毒可導(dǎo)致乳鼠[19]、成熟的免疫系統(tǒng)缺陷SCID小鼠[20]、以及IFN α/β受體或STAT基因敲除小鼠[21,22]的死亡。另一途徑是通過(guò)將ZEBOV在免疫系統(tǒng)完整的小鼠體內(nèi)連續(xù)傳代,來(lái)獲得小鼠適應(yīng)株[23]。
用EBOV攻毒豚鼠僅能引發(fā)短時(shí)的,非致死的發(fā)熱癥狀[24]。同樣,使用ZEBOV在近交及遠(yuǎn)交系豚鼠體內(nèi)連續(xù)傳代可獲得使豚鼠致死的適應(yīng)株[24]。
很多非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物均被用于EBOV動(dòng)物模型的研究。其中狒狒對(duì)所有亞型EBOV均存在一定程度耐受,非洲綠猴(Chlorocebus aethiops)對(duì)REBOV毒株耐受[24]。恒河猴(Rhesus macaques)和食蟹猴(Cynomolgus macaques)是目前使用的最為廣泛的埃博拉動(dòng)物模型,均對(duì)EBOV高度敏感,可引起與人類(lèi)極為類(lèi)似的臨床癥狀。食蟹猴對(duì)ZEBOV毒株最敏感,臨床癥狀出現(xiàn)最快;而恒河猴臨床癥狀出現(xiàn)時(shí)間要稍慢一些,但更接近于人類(lèi)。對(duì)模型更詳細(xì)的說(shuō)明見(jiàn)我們的另外一篇綜述[25]。
埃博拉出血熱的防治方法主要有以下3種:①密切注意世界EBOV疫情動(dòng)態(tài),加強(qiáng)國(guó)境檢疫;②病人處理,發(fā)現(xiàn)病人后嚴(yán)格隔離治療,病人的分泌物和排泄物要嚴(yán)格消毒,病人用過(guò)的衣物進(jìn)行蒸汽消毒,病人的尸體應(yīng)包裹嚴(yán)密就近火葬或掩埋,需轉(zhuǎn)移處理時(shí),應(yīng)放在密閉容器中進(jìn)行,醫(yī)務(wù)人員做好自身防護(hù)工作,如接觸病人時(shí)需戴口罩、手套、眼鏡、帽子和防護(hù)服,嚴(yán)密防止接觸病人污染物;③免疫預(yù)防。疫苗作為最有效的防治方法,一直是科研工作者努力的方向。
6.1 活載體疫苗
應(yīng)用無(wú)致病性或弱毒的病毒和細(xì)菌,例如痘病毒、雞痘病毒、火雞皰疹病毒、偽狂犬病毒、腺病毒以及卡介苗分枝桿菌和沙門(mén)氏菌弱毒疫苗等作為載體,插入外源性保護(hù)基因,構(gòu)建重組活載體疫苗。用活病毒為載體表達(dá)EBOV蛋白有一個(gè)優(yōu)點(diǎn),即病毒疫苗進(jìn)入人體后接近于自然感染,EBOV蛋白便可在轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中表達(dá)。這種方法有兩個(gè)缺點(diǎn):一是宿主細(xì)胞中大量的載體蛋白會(huì)導(dǎo)致免疫競(jìng)爭(zhēng),由此削弱了由載體表達(dá)的特異性EBOV蛋白的免疫反應(yīng)。二是人體中原先存在的免疫力可能會(huì)在機(jī)體針對(duì)活載體疫苗產(chǎn)生足夠免疫應(yīng)答之前就清除了被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞[26]。
6.2 DNA疫苗
將經(jīng)篩選的EBOV基因克隆到質(zhì)粒載體中,通過(guò)肌肉注射的方式注入重組DNA,或者將重組DNA涂在膠體金顆粒表面,然后用基因槍注入皮膚內(nèi),同時(shí)結(jié)合委內(nèi)瑞拉復(fù)制子,使這一體系具有體液免疫和細(xì)胞免疫都能同時(shí)誘導(dǎo)EBOV蛋白產(chǎn)生的優(yōu)點(diǎn)。與上述活載體疫苗方法不同的是,DNA疫苗不會(huì)誘發(fā)針對(duì)載體自身免疫反應(yīng)。但是,這種方法需要很高的注射劑量,而且克隆DNA很可能會(huì)整合到宿主基因組內(nèi),這也是一個(gè)值得高度關(guān)注的安全性問(wèn)題[27]。
6.3 用DNA激發(fā)配合腺病毒(AdV)增強(qiáng)疫苗(DNA/AdV法)
此種疫苗是美國(guó)NIH疫苗研究中心的研究人員Gary Nabel等于2000年研制開(kāi)發(fā)的,是繼DNA疫苗之后的又一新型疫苗,目前已進(jìn)入二期臨床階段。主要采取“兩步走”的策略,首先向動(dòng)物體內(nèi)注射DNA疫苗,隨后用腺病毒載體疫苗加強(qiáng)免疫,結(jié)果發(fā)現(xiàn)小白鼠抗體效價(jià)的增長(zhǎng)較單用DNA疫苗有10~100倍的增長(zhǎng)。然后在恒河猴中進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn),結(jié)果顯示接種安慰劑的4只猴子在2周內(nèi)死亡。而接種疫苗的4只猴子均存活。然而,該疫苗接種過(guò)程長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月,需進(jìn)行4次注射,無(wú)法有效控制快速傳播的疾?。?6,28]。
6.4 快速疫苗
2003年8月,一種針對(duì)EBOV的快速疫苗被研制出來(lái),此疫苗僅需通過(guò)一次注射,4周后就能使短尾猿免受EBOV的感染??焖僖呙缡怯孟俨《荆ˋdV)為載體來(lái)表達(dá)EBOV的GP基因,它比用DNA激發(fā),AdV刺激的反應(yīng)的速度要快得多,但此反應(yīng)相對(duì)較弱[26,28]。
目前,我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)感染埃博拉出血熱病例,但隨著我國(guó)與世界其他國(guó)家之間的貿(mào)易、旅游、人員往來(lái)日益頻繁,EBOV通過(guò)各種途徑傳入我國(guó)是有可能的。EBOV是一種新生的病原微生物,我國(guó)人群無(wú)免疫力,普遍易感。如前所述,從病毒活載體疫苗、DNA疫苗、用DNA激發(fā)配合腺病毒增強(qiáng)疫苗到快速疫苗,人類(lèi)在征服EBOV的這條道路上已經(jīng)邁進(jìn)了一大步,同時(shí)也給予我們征服其它高危烈性病毒性疾病有很大的啟迪??傊?,對(duì)EBOV的深入研究,將對(duì)今后防治埃博拉出血熱提供科學(xué)依據(jù),為更快、更早地研制有效的治療藥物及疫苗奠定基礎(chǔ)。
[1]Pourrut X,Kumulungui B,Wittmann T,et al.The natural history of Ebola virus in Africa[J].Microbes Infect,2005,7:1005-1014.
[2]Colebunders R,Borchert M.Ebola haemorrhagic fever--a review[J].J Infect,2000,40:16-20.
[3]Peters CJ,LeDuc JW.An introduction to Ebola:the virus and the disease[J].J Infect Dis,1999,179 Suppl 1:ix-xvi.
[4]Bente D,Gren J,Strong JE,et al.Disease modeling for Ebola and Marburg viruses[J].Dis Model Mech,2009,2:12-17.
[5]Groseth A,F(xiàn)eldmann H,Strong JE.The ecology of Ebola virus[J].Trends Microbiol,2007,15:408-416.
[6]Biek R,Walsh PD,Leroy EM,et al.Recent common ancestry of Ebola Zaire virus found in a bat reservoir[J].PLoS Pathog,2006,2:e90.
[7]Pourrut X,Souris M,Towner JS,et al.Large serological survey showing cocirculation of Ebola and Marburg viruses in Gabonese bat populations,and a high seroprevalence of both viruses in Rousettus aegyptiacus[J].BMC Infect Dis,2009,9:159.
[8]Gallaher WR.Similar structural models of the transmembrane proteins of Ebola and avian sarcoma viruses[J].Cell,1996,85:477-478.
[9]Volchkova VA,F(xiàn)eldmann H,Klenk HD,etal.The nonstructural small glycoprotein sGP of Ebola virus is secreted as an antiparallel-orientated homodimer[J].Virology,1998,250:408-414.
[10]Sanchez A,Rollin PE.Complete genome sequence of an Ebola virus(Sudan species)responsible for a 2000 outbreak of human disease in Uganda[J].Virus Res,2005,113:16-25.
[11]Yang Z,Delgado R,Xu L,et al.Distinct cellular interactions of secreted and transmembrane Ebola virus glycoproteins[J].Science,1998,279:1034-1037.
[12]Han Z,Boshra H,Sunyer JO,et al.Biochemical and functional characterization of the Ebola virus VP24 protein:implications for a role in virus assembly and budding[J].J Virol,2003,77:1793-1800.
[13]Beer B,Kurth R,Bukreyev A.Characteristics of Filoviridae:Marburg and Ebola viruses[J].Naturwissenschaften,1999,86:8-17.
[14]Sullivan N,Yang ZY,Nabel GJ.Ebola virus pathogenesis:implications for vaccines and therapies[J].J Virol,2003,77:9733-9737.
[15]Feldmann H,Wahl-Jensen V,Jones SM,et al.Ebola virus ecology:a continuing mystery[J].Trends Microbiol,2004,12:433-437.
[16]Zaki SR,Goldsmith CS.Pathologic features of filovirus infections in humans[J].Curr Top Microbiol Immunol,1999,235:97-116.
[17]Basler CF,Wang X,Muhlberger E,et al.The Ebola virus VP35 protein functions as a type I IFN antagonist[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2000,97:12289-12294.
[18]Bray M.The role of the Type I interferon response in the resistance of mice to filovirus infection[J].J Gen Virol,2001,82:1365-1373.
[19]van der Groen G,Jacob W,Pattyn SR.Ebola virus virulence for newborn mice[J].J Med Virol,1979,4:239-240.
[20]Warfield KL,Alves DA,Bradfute SB,et al.Development of a model for marburgvirus based on severe-combined immunodeficiency mice[J].Virol J,2007,4:108.
[21]Bray M,HatfillS,Hensley L,et al.Haematological,biochemical and coagulation changes in mice,guinea-pigs and monkeys infected with a mouse-adapted variant of Ebola Zaire virus[J].J Comp Pathol,2001,125:243-253.
[22]Gibb TR,BrayM,GeisbertTW,etal.Pathogenesisof experimental Ebola Zaire virus infection in BALB/c mice[J].J Comp Pathol,2001,125:233-242.
[23]Bray M,Davis K,Geisbert T,et al.A mouse model for evaluation of prophylaxis and therapy of Ebola hemorrhagic fever[J].J Infect Dis,1998,178:651-661.
[24]Ryabchikova E,Kolesnikova L,Smolina M,et al.Ebola virus infection in guinea pigs:presumable role of granulomatous inflammation in pathogenesis[J].Arch Virol,1996,141:909-921.
[25]許黎黎,秦川.埃博拉出血熱動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2010,20(9),67-71.
[26]Wilson JA,Bosio CM,Hart MK.Ebola virus:the search for vaccines and treatments[J].Cell Mol Life Sci,2001,58:1826-1841.
[27]Volchkov VE,Volchkova VA,Muhlberger E,et al.Recovery of infectious Ebola virus from complementary DNA:RNA editing of the GP gene and viral cytotoxicity[J].Science,2001,291:1965-1969.
[28]Hart MK.Vaccine research efforts for filoviruses[J].Int J Parasitol,2003,33:583-595.