封蘋(píng) 孟慶俠

(江蘇省沛縣疾病預(yù)防控制中心 江蘇沛縣 221600)

1 增菌

(1)當(dāng)樣品中有多種細(xì)菌混雜時(shí),容易影響目標(biāo)菌增菌效果。如檢測(cè)志賀氏菌時(shí),由于其對(duì)酸性環(huán)境較敏感,產(chǎn)酸的菌株可使其在數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡[1]。當(dāng)用GN增菌志賀氏菌時(shí),若同時(shí)存在其它致病性或非致病性細(xì)菌且志賀氏菌含量較少時(shí),應(yīng)尤其注意增菌時(shí)間。(2)延長(zhǎng)增菌時(shí)間有時(shí)可以提高陽(yáng)性檢出率[2],如增菌副溶血性弧菌。(3)增菌時(shí)也可多選擇一種增菌液。

2 分離

(1)如果條件允許,一種致病性細(xì)菌可選擇2種及以上選擇性培養(yǎng)基。如:當(dāng)志賀氏菌和沙門(mén)氏菌混雜在一起,且志賀氏菌含量相對(duì)較少,有時(shí)在SS上較難挑出志賀氏菌,如果同時(shí)接種在山梨醇麥康凱選擇平板上,沙門(mén)氏菌分解山梨醇而呈紅色,多數(shù)志賀氏菌不分解山梨醇無(wú)色,從而增加分離出志賀氏菌的機(jī)會(huì)。若樣品為大便,用SS平板更有利于分離出志賀氏菌。另外,單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在含有亞碲酸鉀的平板上形成黑色的菌落(BP平板內(nèi)含有亞碲酸鉀)。(2)同一種選擇性培養(yǎng)基,不同生產(chǎn)廠家,甚至同一生產(chǎn)廠家不同生產(chǎn)批號(hào),菌落生長(zhǎng)情況亦不同。在一次質(zhì)量控制中,把副溶血性弧菌用同種方法同時(shí)接種于2個(gè)廠家生產(chǎn)的TCBS平板上,其中一塊TCBS平板上菌落生長(zhǎng)較多,而另一塊TCBS平板上僅在初始接種處有少許藍(lán)綠色菌苔生長(zhǎng)。(3)在直接接種平板時(shí),均可接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、血平板,便于菌落形態(tài)及溶血情況的觀察。單核細(xì)胞增生李斯特菌溶血情況尤其值得注意。

3 涂片、染色

(1)樣品有時(shí)可直接涂片染色。(2)KOH拉絲試驗(yàn)[3]:若革蘭氏染色效果不理想,可輔以此試驗(yàn),革蘭氏陰性菌此試驗(yàn)陽(yáng)性;革蘭氏陽(yáng)性菌此試驗(yàn)陰性。(3)區(qū)分桿菌、弧菌時(shí)可做氧化酶試驗(yàn)。

4 生化試驗(yàn)

(1)接種生化反應(yīng)管時(shí)應(yīng)挑取三糖鐵(或雙糖鐵)斜面上的純培養(yǎng)物,亦可用普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上的純培養(yǎng)物。(2)可多挑取幾個(gè)可疑菌落接種三糖鐵瓊脂斜面,以防遺漏。(3)接種三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)氣不明顯時(shí),可用帶小倒管的單糖復(fù)核[4]。(4)若三糖鐵(或雙糖鐵)斜面為黃色(酸性),不宜做氧化酶試驗(yàn),會(huì)出現(xiàn)假陰性,可挑取不含糖培養(yǎng)基上的純培養(yǎng)物再做氧化酶試驗(yàn)[4]。(5)做ONPG試驗(yàn)時(shí):黃色變化不太明顯時(shí),一定要與陰性對(duì)照仔細(xì)對(duì)比觀察。(6)尿素試驗(yàn)時(shí):僅上層顏色變紅應(yīng)判為陰性,這可能是細(xì)菌在有氧條件下分解蛋白胨產(chǎn)堿變色。(7)微量生化管有時(shí)結(jié)果不可靠,產(chǎn)生疑問(wèn)時(shí)可再輔以自配生化反應(yīng)管。(8)API 20E的生化反應(yīng)結(jié)果有時(shí)與接種量相關(guān),在一次質(zhì)量控制中,小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的API 20E試驗(yàn)結(jié)果中尿素試驗(yàn)就有不同:若按說(shuō)明書(shū)上要求挑取一個(gè)菌落制成接種液,尿素試驗(yàn)陰性;若挑取多個(gè)菌落制成微混的接種液,尿素試驗(yàn)陽(yáng)性。(9)SIM動(dòng)力試驗(yàn)效果不明顯時(shí),可同時(shí)接種普通半固體。

5 血清凝集

(1)挑取斜面上的純培養(yǎng)物做凝集,更易觀察結(jié)果。(2)要做鹽水對(duì)照。(3)注意診斷血清的有效性,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)有效期內(nèi)的診斷血清失效。如果生化、菌落形態(tài)均符合而血清不凝集,可用其它批號(hào)或生產(chǎn)廠家的診斷血清試試,不能輕易否定。(4)做凝集試驗(yàn)時(shí),若凝集效價(jià)低或不凝集,除考慮診斷血清的因素外,還可能是因菌株的變異引起,這時(shí)可以多傳幾代,有時(shí)還須誘導(dǎo)。

6 討論

(1)在食物中毒或病人標(biāo)本檢測(cè)中,增菌的同時(shí),可直接接種選擇性平板;(2)同一種致病性細(xì)菌可同時(shí)接種2種及以上選擇性平板;(3)同一種致病性細(xì)菌接種同一種平板可多種幾塊,接種時(shí),接種量要有一定的梯度變化;(4)平板當(dāng)天觀察后,可以在室溫下多存放2d或培養(yǎng)箱內(nèi)多培養(yǎng)1d,再觀察,菌落形態(tài)會(huì)更典型;(5)使用顯色培養(yǎng)基更易于檢出致病性細(xì)菌。

[1]李影林.臨床微生物學(xué)及檢驗(yàn)[M].吉林:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,1991:189.

[2]何曉青.衛(wèi)生防疫檢驗(yàn)[M].江西:江西省衛(wèi)生防疫站,1980:1 6.

[3]李仲興,鄭家齊,李家宏.診斷細(xì)菌學(xué)[M].香港:黃河文化出版社,1992:96.

[4]齊小秋.病原生物學(xué)檢驗(yàn)-細(xì)菌[M].北京:衛(wèi)生部病原生物學(xué)檢驗(yàn)教材編寫(xiě)組,2009:301.