雷 霆 陳志國(guó) 周 軍 肖 剛

陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院（陜西咸陽(yáng)712000）

門脈高壓性胃病 （PHG）系指門脈高壓病所伴發(fā)的一種特殊類型的胃黏膜病變，是引起上消化道出血的重要因素之一。在重度肝功能不全患者及重度PHG患者中，PHG為第1位出血因素［1］。本研究通過(guò)建立PHG大鼠模型，應(yīng)用白及三七混劑治療 PHG，觀察血漿中血小板 4因子（PF4）和可溶性 P-選擇素（SPS）的變化，探討其治療PHG出血的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物 白及三七混劑 （白及粉200mg/kg、三七粉200mg/kg加入沸水，晾涼后制成糊劑）；云南白藥 （國(guó)藥準(zhǔn)字Z53020798，產(chǎn)品批號(hào)：20090607）；10%水合氯醛；青霉素鈉（哈藥集團(tuán)總廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：C080101417）。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SD大鼠40只，雌雄各半，育齡6~8周，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)自西安交通大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，合格證編號(hào)：SCXK（陜）2007-001。

1.3 試劑與儀器 酶聯(lián)免疫試劑由西安阿爾寶生物技術(shù)有限公司提供試劑盒（48孔配置）。高速臺(tái)式離心機(jī)（北京安亭醫(yī)用離心機(jī)廠）；超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備公司，SW-CJ-ID型）；低溫冰箱（三洋公司MDF-U332型）；酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（國(guó)營(yíng)華東電子管廠DG5031型）；電子天平（上海第二分析儀器廠FA 2004N型）；顯微鏡（德國(guó)Leica公司DM40008型）。

1.4 分組及造模［2-5］40只健康SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表分為假手術(shù)組、模型組、白及三七混劑組及云南白藥組。除假手術(shù)組外，其余3組采用1期門靜脈縮窄加左腎上腺靜脈結(jié)扎法復(fù)制大鼠PHG模型。10%水合氯醛（0.3mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，正中切口入腹，游離出門靜脈，用9號(hào)針頭作內(nèi)支撐，縮窄門靜脈橫經(jīng)約90%，再將左腎上腺靜脈結(jié)扎。假手術(shù)組只游離門靜脈和左腎上腺靜脈，不縮窄或結(jié)扎。2周后隨機(jī)自手術(shù)組選取2只及假手術(shù)組1只處死，取肝組織行苦味酸-天狼紅染色，按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝纖維化組織學(xué)Ⅵ級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行肝纖維化程度評(píng)判對(duì)照，鏡下觀察肝纖維形成，示模型制備成功［6］。

1.5 給藥方法及標(biāo)本采集 白及三七混劑組按1mL/100g每日給予白及三七等混劑灌胃（400mg/kg）；云南白藥組按1mL/100g每日予云南白藥灌胃（400mg/kg）；假手術(shù)組及模型組大鼠正常喂養(yǎng)。給藥7d后處死大鼠，采取血樣標(biāo)本，待測(cè)。

1.6 檢測(cè)指標(biāo) 選擇檸檬酸鈉作為抗凝劑，與血樣標(biāo)本混合10～20min，2000～3000r/min離心20min左右， 仔細(xì)收集上清液，即為血漿成分，將所有處理好的血樣進(jìn)行酶聯(lián)免疫法測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中大鼠PF4和SPS質(zhì)量濃度。

2 結(jié) 果

2.1 病理學(xué)檢查結(jié)果 PHG模型病理切片 （×40）觀察結(jié)果顯示：胃黏膜下小血管管壁增厚，管腔擴(kuò)張，單位視野下數(shù)目增多（如圖1A），肝組織匯管區(qū)小血管擴(kuò)張，假小葉形成，少數(shù)肝細(xì)胞呈現(xiàn)雙核增生改變（如圖1B）。

圖1 PHG模型大鼠病理組織切片圖

2.2 各組血漿中SPS和PF4水平比較 見表1。白及三七混劑組與云南白藥組大鼠血漿中PF4和SPS的含量與模型組比較明顯升高（P﹤0.01）；但白及三七混劑組和云南白藥組比較，PF4和SPS的含量無(wú)明顯差異（P＜0.05）。

表1 各組血漿中SPS、PF4水平比較 （ng/mL

表1 各組血漿中SPS、PF4水平比較 （ng/mL

與模型組比較，*P＜0.01；與假手術(shù)組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

?

3 討 論

建立穩(wěn)定的肝硬變門脈高壓癥模型是肝硬變門脈高壓癥基礎(chǔ)性研究的前提［7］。本實(shí)驗(yàn)采用門靜脈縮窄加左腎上腺靜脈結(jié)扎法，成功誘導(dǎo)出較理想的大鼠肝硬變門靜脈高壓癥胃病模型。該方法特點(diǎn)在于實(shí)驗(yàn)性肝硬變?cè)谛纬蛇^(guò)程中歷經(jīng)肝細(xì)胞變性壞死、纖維組織增生及假小葉形成等幾個(gè)階段，這與人類肝硬變自然演變過(guò)程基本一致。經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)中證實(shí)，采用PHG腎上腺靜脈結(jié)扎法，造模15d后，大鼠門靜脈壓穩(wěn)定在較高水平（測(cè)定腸系膜前靜脈分支靜脈壓平均大于10mmHg），胃底黏膜及黏膜下動(dòng)靜短路早期出現(xiàn)并異常開放，并且其胃黏膜具有特征性病理變化，類似于臨床上PHG患者的胃腸黏膜變化［8］。該方法造模成功率高，復(fù)制簡(jiǎn)單易行，符合本課題的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本要求。

肝硬化門脈高壓對(duì)血小板功能的影響是一個(gè)復(fù)雜問(wèn)題，涉及到血小板結(jié)構(gòu)、形態(tài)、生理生化性質(zhì)等多方面的改變。血小板在止血過(guò)程中起作用，除依賴于血小板的數(shù)量外，血小板的功能狀態(tài)也極其關(guān)鍵。研究結(jié)果表明，肝硬化患者血小板黏附、活化和聚集能力顯著低于正常，提示血小板功能異常在肝硬化患者的出血傾向中起著非常重要作用［9］。國(guó)內(nèi)曾有報(bào)道，肝硬化門脈高壓時(shí)血小板功能不同程度降低，其中通過(guò)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，血塊收縮異常者占77.8%，血小板黏附率降低者占66.7%，PF4減少者占78%，血小板聚集率降低者占77.8%，血小板第3因子有效性減少者占 65.7%［10］。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，模型組較假手術(shù)組PF4及SPS指標(biāo)均明顯下降，說(shuō)明肝硬化PHG時(shí)血小板凝血功能各項(xiàng)參數(shù)將不同程度上發(fā)生改變，血小板活化能力出現(xiàn)不同程度下降表現(xiàn)，這一結(jié)果極可能是PHG并發(fā)上消化道出血的主要原因之一。如果臨床治療上選用一些能夠有效改善血小板活化能力的藥物，那么PHG并發(fā)上消化道出血機(jī)率將會(huì)顯著降低。

白及三七混劑中諸藥雖然都有止血，活血散瘀的功效，但是由于各成分的相互作用，其綜合作用絕不是單味藥的簡(jiǎn)單疊加，還可能會(huì)出現(xiàn)新的作用。通過(guò)筆者近年臨床應(yīng)用證實(shí)：白及三七混劑在PHG急慢性出血治療上是一種安全、價(jià)廉、有效、無(wú)毒副作用重要藥物，該藥物圍手術(shù)期治療中結(jié)合中醫(yī)辨證加減后，可以使患者得到有效的合理的個(gè)體化治療。

筆者選取云南白藥作為對(duì)照組，白及三七混劑作為治療組，仔細(xì)觀察其對(duì)血小板凝血功能指標(biāo)變化的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：云南白藥及白及三七混劑均能夠升高PF4及SPS指標(biāo)，改善血小板活化能力，提高機(jī)體的凝血功能，有效地促進(jìn)止血過(guò)程進(jìn)行，但兩者彼此之間治療效果接近。藥理研究表明：云南白藥能促進(jìn)血小板聚集，增強(qiáng)血小板活化百分率及血小板表面糖蛋白表達(dá)，能縮短血液凝血時(shí)間，使傷口出血時(shí)間及凝血酶原時(shí)間縮短，對(duì)動(dòng)脈血管有明顯收縮作用。因此，臨床上應(yīng)用白及三七混劑治療PHG出血的作用機(jī)理可能應(yīng)該與血小板活化功能提高有關(guān)。其具體機(jī)制可能是：血小板表面多種受體經(jīng)混劑所產(chǎn)生的膠原物質(zhì)誘導(dǎo)刺激，迅速發(fā)生蛋白磷酸化反應(yīng)，激活了血小板，引起釋放反應(yīng)發(fā)生，形成或釋放出組織因子，進(jìn)一步激活凝血系統(tǒng)中的多種凝血因子，從而實(shí)現(xiàn)體內(nèi)促凝過(guò)程，其表現(xiàn)出迅速有力的止血作用。PHG時(shí)血小板活化能力會(huì)降低，這可能是PHG合并上消化道出血原因之一。白及三七混劑在PHG出血治療中是一種可行的方法，具有一定的臨床實(shí)用價(jià)值，其作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究探討。

［1］楊鎮(zhèn).門靜脈高壓性胃病出血的臨床診治［J］.中國(guó)實(shí)用外科雜志，2001，21（3）：167-169.

［2］周丁華，肖凌云，應(yīng)大君，等.大鼠肝硬變門脈高壓癥模型建立方法改進(jìn)［J］.中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2000，1（7）：118-119.

［3］管洪庚，陳易人，呂光成.門脈高壓性胃病動(dòng)物模型復(fù)制及發(fā)病機(jī)理研究［J］，中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，1999，16（1）：84-85.

［4］ 吳孟超，楊廣順，陳漢，等.大鼠肝硬化模型的復(fù)制研究［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，1984，240（3）：371-378.

［5］段進(jìn)東，管洪庚，陳易人，等.一期門靜脈縮窄法復(fù)制大鼠門靜脈高壓性胃病模型［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2000，17（4）：356-357.

［6］ 張瑞，劉潯陽(yáng).洛沙坦在大鼠門脈高壓性胃病中的作用［J］.中南大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，32（3）：494-497.

［7］呂振棋，楊慧武，金洪泳，等.肝硬化門靜脈高壓癥動(dòng)物模型的制作［J］.中華普通外科雜志，2000，9（1）：89-91.

［8］王昕琛，楊鎮(zhèn)，李洪華，等.門靜脈高壓大鼠胃黏膜及微血管增生程度的初步研究［J］.肝臟雜志，2006，11（1）：21-23.

［9］王修石，袁亞軍.對(duì)620例肝硬化血小參數(shù)與凝血功能相關(guān)指標(biāo)的探討［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，27（9）：791.

［10］霍麗娟，田玲琳.氯沙坦對(duì)肝硬化門脈高壓癥大鼠肝靜脈壓力梯度的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2009，19（3）∶165-167.