江蘇省南通市第四人民醫(yī)院(226005) 丁曉云

抗敏止癢乳膏處方優(yōu)選的正交試驗研究*

江蘇省南通市第四人民醫(yī)院(226005) 丁曉云

目的優(yōu)選抗敏止癢乳膏處方中最佳藥物用量。方法 采用正交試驗設計法進行處方中各成分用量篩選，以鎮(zhèn)痛實驗的小鼠痛閾提高百分率和抗炎實驗的小鼠耳腫脹抑制率為考察指標，確定乳膏的最佳處方并進行驗證試驗。結果 優(yōu)選的抗敏止癢乳膏的最佳處方為1 000 g乳膏中含鹽酸利多卡因20 g，撲爾敏5 g，冰片20 g，氯霉素10 g，驗證試驗中小鼠痛閾提高百分率和耳腫脹抑制率均＞60%，考察指標結果達到要求。結論 優(yōu)選的抗敏止癢乳膏處方合理，可為臨床應用提供實驗依據(jù)。

抗敏止癢乳膏 正交設計 處方優(yōu)選

*：南通市社會發(fā)展科技計劃項目(No：S2007026)

本文根據(jù)瘙癢性皮膚病的發(fā)病機理以及臨床表現(xiàn)并結合多年的臨床治療經(jīng)驗，運用中西藥物進行合理組方，研制了非激素類復方外用制劑抗敏止癢乳膏，用于治療急慢性濕疹、神經(jīng)性皮炎和局限性瘙癢癥。為了選擇一個最佳處方的藥物用量，從而達到臨床療效好，副反應小的治療目的，本文采用正交試驗設計法〔1，2〕并以實驗性動物的抗炎鎮(zhèn)痛作用，對抗敏止癢乳膏的處方進行了優(yōu)選。

材 料

1.試驗藥物

鹽酸利多卡因(江蘇濟川制藥有限公司，純度99.9%，批號：090531);撲爾敏(河南九勢制藥有限公司，純度：99.6%，批號：081013)，冰片(南通薄荷油廠有限公司，純度：99.5%，批號：090125);氯霉素(南京白敬宇制藥有限公司，純度：99.8%，批號：090907);抗敏止癢乳膏(南通市皮膚病性病防治所提供，規(guī)格：20g/盒，批 號：091107，091113，091119，091123，091127)。

2.試驗動物

昆明種小鼠，18～22 g，雌雄兼有(南通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證：SCXK2002-0019)。

實驗方法

1.因素水平的確定

根據(jù)預試驗，抗敏止癢乳膏由鹽酸利多卡因、撲爾敏、冰片、氯霉素4種藥物和乳膏基質組成，前三種藥物對疾病治療起主要作用，試驗時每個因素安排4個水平，氯霉素主要起預防搔抓所致皮膚繼發(fā)性感染的作用，試驗時安排2個水平。各因素具體試驗的水平見表1。

表1 因素水平表(1000g乳膏中加入藥物的克數(shù))

2.各因素水平的選擇

表1是一個43×21的試驗，擬選用L16(43×26)的正交表。因在表1中每個因素的水平都是由小到大按順序排列的，按正交表試驗，所有的1水平要碰在一起，這種極端的組合易增加試驗誤差，因此本文對起主要治療作用的前3個因素的水平進行了隨機化處理，見表2。

表2 隨機化后各因素水平表

3.熱板法鎮(zhèn)痛試驗〔3〕

(1)小鼠分組 將雌性小鼠置于(55±0.5)℃恒溫水浴上的金屬盆低熱板上測定痛閾值。選用痛閾值在20～30 s(疼痛反應不規(guī)則者如過敏、遲鈍或喜跳動的小鼠剔除不用)的小鼠80只，隨機分成16組，每組5只，分籠存放并編號。實驗前1日給各組小鼠腹部剃毛，面積1 cm2。

(2)試驗方法 根據(jù)人體常用推薦劑量0.05 g·cm-2，按體表面積換算出〔4〕小鼠用量為 0.032 mg·cm-2。按表3試驗號對應的處方用量制備的抗敏止癢乳膏給上述相應編號的每只小鼠涂藥，共4次，每次用量0.032 mg·cm-2，前2次涂腹部去毛皮膚，后2次涂四足掌，用藥面積約1 cm2，每次用藥間隔30 min，給藥前測各小鼠2次痛閾值，取其平均值為正常痛閾值。各組小鼠在末次涂藥后90 min時分別測定痛閾值，求出每組動物給藥后的痛閾提高百分率。為便于計算，結果均取5只小鼠的平均值。

4.對小鼠耳腫脹的影響〔4〕

(1)小鼠分組 選取小鼠80只，雌雄各半，隨機分為16組，每組5只，分籠存放并編號。

(2)試驗方法 按表3試驗號中對應的處方量制備的抗敏止癢乳膏給上述相應編號的每只小鼠右耳涂藥，共4 次，每次用量 0.032 mg·cm-2，面積約 2 cm2，每次用藥間隔30 m in，左耳作對照。末次給藥30 min后，各小鼠右耳以溫水洗去殘余藥物并擦凈，再給各小鼠雙耳涂二甲苯，每只0.05 mL，1.5 h后處死小鼠，用8 mm直徑打孔器將雙耳同部位打下圓耳片，稱量重量，求出耳腫脹抑制率。為便于計算，結果均取5只小鼠的平均值。

5.評價標準

為了便于對最佳處方提供評價依據(jù)，本文對鎮(zhèn)痛和抗炎試驗的數(shù)據(jù)分別進行了分級量化評分。

(1)鎮(zhèn)痛試驗量化評分〔5〕以小鼠痛閾提高百分率(%)=［(給藥后平均痛閾-給藥前平均痛閾)/給藥前平均痛閾］×100%為評價指標，評價抗敏止癢乳膏的局部止痛、止癢效果，以y1表示效果。優(yōu)為y1≥60%，良為60% ＞y1≥50%，中為50% ＞y1≥25%，差為y1＜25%。

(2)抗炎試驗量化評分〔6〕以小鼠右耳腫脹抑制率(%)=［(左耳平均質量-右耳平均質量)/左耳平均質量］×100%為評價標準，評價抗敏止癢乳膏的局部抗炎效果，以y2表示效果。優(yōu)為 y2≥60%，良為60% ＞y2≥50%，中為 50% ＞y2≥25%，差為 y2＜25%。

6.正交試驗結果

(1)正交試驗方案與試驗觀察結果 見表3。

(2)直觀分析 由表3看出，以鎮(zhèn)痛作用為評價指標時，各因素對結果的影響大小順序為C＞A＞B＞D，不同因素內各水平對結果的影響強弱為：A1＞A4＞A2＞A3;B4＞B3＞B1＞B2;C3＞C1＞C2＞C4;D2＞D1;其最佳因素水平組合為A1B4C3D2。以抗炎作用為評價指標時，各因素對結果的影響大小順序為C＞B＞A＞D，不同因素內各水平對結果的影響強弱為A2＞A3＞A4＞A1;B4＞B1＞B2＞B3;C3＞C2＞C1＞C4;D1＞D2;其最佳因素水平組合為A2B4C3D1。兩個指標的差異為A因素和D因素，即鹽酸利多卡因和氯霉素的用量。

(3)方差分析 將表3中y1值和y2值進行方差分析，結果見表4。

表3 試驗方案與結果

表4 方差分析

由表4看出，當以鎮(zhèn)痛作用為評價指標時，因素C對結果有差異(P＜0.01)，因素A對結果也有差異(P＜0.05)，影響強度及最佳因素水平組合均與直觀分析結果相符。當以抗炎作用為評價指標時，因素B和因素C對結果都有差異(P＜0.05)，影響強度及最佳因素水平組合也與直觀分析結果相符。由表3的ˉR值可知，在抗炎試驗中，A1為33.2，A2為37.2，兩者無統(tǒng)計學差異，任取一項均能滿足實驗要求，結合鎮(zhèn)痛實驗結果與方差分析取A1較合適。考慮到D因素的2個水平雖對試驗結果有一定的影響，但從直觀分析和方差分析看出，差異都很小，根據(jù)臨床用藥經(jīng)驗，D因素選取第1水平。綜合直觀分析和方差分析，最佳因素水平組合為A1B4C3D1。

6.優(yōu)選處方的驗證

根據(jù)優(yōu)選結果，按最佳處方A1B4C3D1制備5批抗敏止癢乳膏，進行小鼠鎮(zhèn)痛和抗炎作用試驗，結果見表5。

表5 優(yōu)選處方的驗證

由表5看出，最佳處方制備的抗敏止癢乳膏，在鎮(zhèn)痛試驗中鎮(zhèn)痛作用明顯，痛閾提高百分率均＞60%，在抗炎試驗中，耳腫脹抑制率均＞60%，都達到了預定評價指標的要求。

討論與小結

由試驗結果和分析可知，抗敏止癢乳膏的最佳處方為每1000 g乳膏中含鹽酸利多卡因20 g，撲爾敏5 g，冰片20 g，氯霉素10g。各因素選出的最佳水平除氯霉素在實驗中只安排了2個水平，評定時2者選1以外，其余對治療起主要作用的3個因素的最佳水平都處于試驗方案的中間，說明試驗方案中各因素水平的確定是合理的。

處方中所含鹽酸利多卡因為表面麻醉劑，具有止痛止癢效果，冰片局部使用可產(chǎn)生清涼、止癢、消炎作用〔7〕，以上兩藥配伍使用，使鎮(zhèn)痛、止癢作用進一步增強。

處方中的冰片能抑制3α-羥基甾醇脫氫酶，從而可使3β-羥基甾醇脫氫酶發(fā)揮更大的作用，促進生成更多的氫化可的松，發(fā)揮抗炎作用〔7〕。撲爾敏具有拮抗組胺引起血管擴張和通透性增加的作用，并且還具有拮抗5-羥色胺、慢反應物質等炎癥介質作用〔8〕。本制劑的抗炎作用主要與冰片和撲爾敏有關。

氯霉素抗菌譜廣〔9〕，與具有溫和防腐、抑菌作用的冰片配伍使用，對防止搔抓所致繼發(fā)性皮膚細菌感染具有良好的預防作用。

本實驗采用正交試驗設計法優(yōu)選抗敏止癢乳膏的處方，以鎮(zhèn)痛試驗的小鼠痛閾提高百分率和抗炎試驗的耳腫脹抑制率為評價指標，采用統(tǒng)計學方法分析計算，較好地優(yōu)選出抗敏止癢乳膏的處方，方法可行，收效滿意，為臨床應用提高了實驗依據(jù)。

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ExperiMental Study of Formula Optim ization for Anti-allergic and Relieving Itching Cream

DingXiaoyun．4thpeople’shos-pitalofNantong(226006)，Jiangsu

Objective To choose the best formula for anti-allergic and relieving itching cream.MethodsOrthogonal experimentwas used to study the abirritation effect on rats and study the edema inhibition rate ofmouse ear.The best formulawas designed according to the result of these studies and do Validation test.ResultsThe formula was Lidocaine 20g，chlorpheniram inemaleate5g，borneol20g，chlormycetin 10g per1000g cream.ConclusionThe design of the formula was reasonable.

Anti-allergic and relieving itching cream;Formula optimization;Formula optimization