王德軍，張利棕，方明筍，周衛(wèi)民，壽旗揚，蔣劍平，蔡月琴，朱科燕，陳民利

（1.浙江中醫(yī)藥大學動物實驗研究中心/比較醫(yī)學研究中心，杭州，310053；2.浙江省中醫(yī)院制劑室，杭州 310053）

高血壓病（essenital hypertension，EH）是一種常見病、多發(fā)病，是引起冠心病、腦卒中、腎功能衰竭的最危險因素。目前，治療高血壓的藥物具有顯效快、療效明確等優(yōu)勢，但同時其也有副作用大、血壓變化過快等缺點。因此積極尋找作用緩和，能通過多途徑、多靶點調節(jié)血壓，且降壓平穩(wěn)，副作用小的降壓藥物具有十分重要的意義。

土茯苓是百合科植物光葉菝葜（Sm ilax glabra Roxb.）的干燥根莖，有實驗證實土茯苓苷具有β-受體阻滯樣作用［1］，我們前期土茯苓藥效篩選試驗也發(fā)現其有增加NO合成的作用［2］，根據高血壓病發(fā)病機理，因此推測其可能對高血壓具有治療和改善作用，但目前未見土茯苓治療高血壓的報道。為此本研究利用兩腎兩夾腎性高血壓大鼠（renovascular hypertensive rats，RHR），來探討土茯苓對RHR血壓及血管活性物質的影響，為土茯苓防治EH的臨床應用提供實驗和理論依據。

1 材料和方法

1.1 藥物和試劑

土茯苓，購自浙江中醫(yī)藥大學附屬第二門診部，批號：20100501，經浙江中醫(yī)藥大學中藥資源室鑒定；卡托普利片（ACEI劑），2004031，12.5 mg/片，中美上海施貴寶制藥有限公司；一氧化氮（Nitric Oxide，NO）試劑盒：批號20100816，南京建成生物工程研究所有限公司；心房利納肽（atrial natriuretie peptide，ANP）、內皮素（endothelin，ET）、降鈣素基因相關肽（clcitonin gene-related peptide，CGRP）和血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）ELISA試劑盒，R＆D，批號分別為E1000087、1000278、1003014、1000734。

1.2 實驗動物

SD大鼠，180～220 g，雄性，數量80只，由中國科學院上海實驗動物中心/上海斯萊克實驗動物有限公司提供［生產許可證：SCXK（滬）2007-0005］。

1.3 儀器

ALC-NIBP（8道）無創(chuàng)血壓測定系統，上海奧爾科特生物科技有限公司；Varioskan Flash多功能酶標儀，美國Thermo；7020型全自動生化儀，日本Hitachi。

1.4 土茯苓制備

將藥材土茯苓飲片4 kg置敞口鍋，加入水適量浸沒藥材，浸泡30 min，加熱煎煮至沸后計時，第1次煎煮1.5 h后濾取藥液，繼續(xù)加水適量煎煮，第2次提取1.0 h，第3次0.5 h，合并3次提取液，過濾網過濾，濃縮至2 000 m L（生藥含量2.0 g/m L），灌注500 m L鹽水瓶，加塞，割口，煮沸消毒30 m in即得，置于4℃保存，用時再用蒸餾水稀釋至所需濃度。

1.5 造模、分組、給藥和指標測定

取70只體重為180～220 g的雄性SD大鼠，用3%戊巴比妥鈉腹腔注射，腹正中縱形切口，依次鈍性分離雙側腎動脈，穿入無菌絲線，把直徑為0.3 mm的針灸針與腎動脈血管長軸緊貼平行放置，用無菌絲線扎緊腎動脈和針灸針然后抽出針灸針，造成雙側腎動脈狹窄［3］，另取10只大鼠經相同手術過程但未進行腎動脈結扎作為假手術組。手術造模2周后測定血壓，以連續(xù)3 d收縮壓超過150 mmHg為造模成功，篩選出血壓接近的50只高血壓大鼠，按收縮壓分層分為五組，即模型對照組、高（6 g/kg土茯苓）、中（3 g/kg土茯苓）、低（1.5 g/kg土茯苓）劑量組和陽性組（5 mg/kg卡托普利）；各組（含模型組、假手術組）每天經口灌胃相應的藥物和生理鹽水，連續(xù)4周，在1、2、3、4周時測定收縮壓（systolic pressure，SBP）、舒張壓（diastolic pressure，DBP）、平均壓（mean pressure，MBP）和心率（heart rate，HR）。末次給藥24 h后，同時禁食不禁水12 h，心臟取血，用硝酸鹽還原酶法測血清NO，用ELASE法測定試驗大鼠血清中ANP、ET、CGRP和AngⅡ水平。

１.6 統計學方法

計量資料以（x—±s）表示，以P＜0.05為差異顯著標志；多組間均數比較用方差分析，以P＜0.05為差異顯著標志。以上數據均以SPSS11.0軟件進行統計處理。

2 結果

2.1 土茯苓對高血壓大鼠收縮壓的影響

由表1可見，與假手術組比較，模型組大鼠的實驗1～4周時SBP均顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，給予高、中、低劑量的土茯苓后，土茯苓三個劑量組大鼠的SBP均有不同程度的降低，其中高劑量組大鼠在給藥1～4周時SBP降低明顯（P＜0.05，P＜0.01），中劑量組大鼠在給藥3、4周時SBP降低明顯（P＜0.05），低劑量組大鼠在給藥1～4周時SBP有一定程度的下降，但無統計學意義（P＞0.05），SBP的下降幅度與土茯苓呈劑量關系。而給陽性藥卡托普利1周后SBP即顯著降低（P＜0.01）。

表1 土茯苓對高血壓大鼠收縮壓（SBP）的影響（mmHg，x—±s，n=10）Tab.1 The effects of Smilax glabra on SBP in the RH rats（mmHg，x—±s，n=10）

表2 土茯苓對高血壓大鼠舒張壓（DBP）的影響（mmHg，x—±s，n=10）Tab.2 The effects of Smilax glabra on DBP in the RH tats（mmHg，x—±s，n=10）

2.2 土茯苓對高血壓大鼠舒張壓的影響

由表2可見，與假手術組比較，模型組大鼠的實驗1～4周時DBP均顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，給予高、中、低劑量的土茯苓后，土茯苓三個劑量組大鼠的DBP均有不同程度的降低，高劑量組大鼠在給藥1～4周時DBP降低明顯（P＜0.05，P＜0.01），中劑量組大鼠在給藥3、4周時DBP降低明顯（P＜0.05），低劑量組大鼠在給藥1～4周時DBP有一定程度的下降，但無統計學意義（P＞0.05），DBP的下降幅度與土茯苓呈劑量關系。而給陽性藥卡托普利1周后DBP即顯著降低（P＜0.01）。

2.3 土茯苓對高血壓大鼠平均壓的影響

由表3可見，與假手術組比較，模型組大鼠的實驗1～4周時MBP均顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，給予高、中、低劑量的土茯苓后，土茯苓三個劑量組大鼠的MBP均有不同程度的降低，高劑量組大鼠在給藥1～4周時MBP降低明顯（P＜0.05，P＜0.01），中劑量組大鼠在給藥3、4周時MBP降低明顯（P＜0.05），低劑量組大鼠在給藥1～4周時MBP有一定程度的下降，但無統計學意義（P＞0.05），MBP的下降幅度與土茯苓呈劑量關系，而給陽性藥卡托普利1周后MBP即顯著降低（P＜0.01）。

表3 土茯苓對高血壓大鼠平均壓（MBP）的影響（mmHg，x—±s，n=10）Tab.3 The Effects of Smilax glabra on MBP in the RH rats（mmHg，x—±s，n=10）

表4 土茯苓對高血壓大鼠心率（HR）的影響（bpm，x—±s，n=10）Tab.4 The Effects of Smilax glabra on HR in the RH Rats（bpm，x—±s，n=10）

2.4 土茯苓對高血壓大鼠心率的影響

由表4可見，與假手術組比較，模型組大鼠的實驗1～4周時HR有升高的趨勢（P＞0.05）。與模型組比較，給予高、中、低劑量的土茯苓及陽性藥后，土茯苓三個劑量組和陽性藥組大鼠的HR均無明顯變化（P＞0.05）。

2.5 土茯苓對RHR血管活性物質的影響

由表5可見，與假手術組比，模型對照組大鼠的ANP、ET、NO均顯著增加（P＜0.05，P＜0.01），CGRP顯著降低（P＜0.01）。連續(xù)4周給予高、中、低劑量的土茯苓及陽性藥卡托普利后，與模型組相比，RHR的ANP、ET均有明顯的降低（P＜0.05，P＜0.01）；NO有不同程度的升高，其中高、中劑量組升高顯著（P＜0.05）；而CGRP、AngII均無統計學意義（P＞0.05）。

3 討論

高血壓是由生活、精神、心理和生物等多因素綜合作用的結果。目前普遍認為，其可能與血管活性物質（ANP、NO、ET、CGRP）、心血管系統組織局部的腎素-血管緊張素-醛固酮系統（reninangiotensin-aldosterone system，RAAS）等作用引起有關［4］。ANP是由心肌細胞分泌的一類重要的循環(huán)激素，通過利尿、利鈉、舒張血管和抑制RAAS的途徑［5］，起到降低血壓作用。一般來說，當血液中ANP含量增高，血壓將下降。NO和CGRP是由內皮細胞分泌的舒血管活性物質，ET是縮血管物質，有強烈的縮血管升高血壓的作用，NO、CGRP與ET相互拮抗，維持血管的舒縮平衡，一旦平衡被打破，引起血壓變化。AngII是RAAS最終的活性物質，其能促進醛固酮的分泌，增加血流量，使小動脈收縮，從而升高血壓［6］。

表5 土茯苓對高血壓大鼠血管活性物質的影響（x—±s，n=10） Tab.5 The effects of Smilax glabra on the levels of vasoactive substances in the RH rats（x—±s，n=10）

本實驗結果顯示，模型大鼠的ANP顯著增加，這與Kohno M的研究結果相符［7］。這可能由于高血壓狀態(tài)時，機體產生了代償反應，其可能為了競爭性抑制AngⅡ，阻斷AngⅡ的促醛固酮分泌，抑制腎臟分泌腎素，從而使血液中ANP含量大量增加［8］。本實驗模型大鼠AngII相對假手術組沒有顯著改變，其是否與ANP競爭性地抑制有關，以及給藥4周后，各給藥劑量組包括陽性對照組的ANP含量、血壓均呈不同程度的下降，其是否有前后的相互關系，是否與藥物減輕機體代償反應、從而避免失代償有關，則有待進一步的研究。同時本實驗結果也顯示，給藥4周后，NO顯著增加，這與我們前期的實驗結果相符［2］。而ET的含量則有不同程度下降，提示土茯苓能不同程度地降低血壓，舒張血管可能是其作用機制之一。

［1］阿布拉海提·阿布都拉，周承明，張克錦.赤土茯苓苷對正常和高鉀除極豚鼠心室乳頭狀肌動作電位的影響［J］.中國藥理學通報，1999，15（2）：178-181.

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