姜國(guó)亮

萃取法測(cè)定人血白蛋白中辛酸鈉含量

姜國(guó)亮

目的總結(jié)萃取法測(cè)定人血白蛋白中辛酸鈉含量經(jīng)驗(yàn)。方法采用萃取法測(cè)定人血白蛋白中辛酸鈉的含量,并對(duì)其線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性和回收率進(jìn)行研究,且與氣相色譜法進(jìn)行比較。結(jié)果萃取法與氣相色譜法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單快捷,結(jié)果可靠,可用于人血白蛋白的半成品中辛酸鈉的含量控制。

辛酸鈉;萃取法;氣相色譜法

《中國(guó)藥典》采用氣相色譜法控制其含量[1],但此方法制品測(cè)定前需做繁瑣的處理,檢測(cè)周期過長(zhǎng),對(duì)于等待分裝的半成品顯然不可取。本作者采用經(jīng)典萃取法,利用辛酸鈉為有機(jī)弱酸強(qiáng)堿鹽的化學(xué)性質(zhì)及在兩種溶劑中分配系數(shù)的不同,分離出辛酸,然后進(jìn)行酸堿滴定,測(cè)其含量。

1 儀器與試劑

0.04mol/L的辛酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(辛酸鈉,北京師化精細(xì)化工),混合溶解液(無水乙醇-吐溫聚山梨醇酯 80-水(5∶0.5∶94.5,v/v),乙醚,正丁純,1mol/L鹽酸溶液,標(biāo)準(zhǔn)0.01mol/L氫氧化鈉滴定液,1%酚酞指示液。本實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 操作

2.1 方法 將 19ml純化水加入到 250m l分液漏斗中,再準(zhǔn)確加入約 20%(C)的白蛋白溶液 1ml(V 1),然后加入 1mol/L鹽酸溶液 0.2ml,搖勻后加入 15ml乙醚及 1m l正丁醇,震振蕩 15s,靜置分層后,棄掉下部水層,然后將醚層用 15m l純化水震振蕩洗滌 2次,分層后將醚層轉(zhuǎn)入到 100ml的錐形瓶中。再用 15m l混合溶解液置前述分液漏斗中,輕輕搖蕩充分洗滌分液漏斗內(nèi)壁后,將混合溶解液合并轉(zhuǎn)入前述錐形瓶中,混勻,加入 1%酚酞指示液 2～3滴,然后用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)(N)滴定至淡粉紅色即終點(diǎn),記錄消耗體積數(shù)(V)。同時(shí)用純化水 1ml同法操作所得的萃取液消耗標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)(N)數(shù)作空白(V)。

Pr為蛋白質(zhì)

3 結(jié)果

3.1 線性關(guān)系 將 20%樣品依次取 0.6,0.8,1.0,1.2,14,1.6m l進(jìn)行操作,消耗 0.01mol/L氫氧化鈉滴定液的體積差分別為 1.9,2.6,3.2,3.9,4.5,5.1m l。將其線性回歸得:Y=3.2X+0.01332,r=0.9995。表明辛酸鈉的含量在 0.095～0.255mmol/g·Pr范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

3.2 精密度 取同一批樣品分成 6份按上述萃取法操作 6次。結(jié)果表1

表1 精密度及重現(xiàn)性穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果[mol/(g·Pr)]

3.3 回收率 取已知樣品按 0.160mol/g·Pr準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)辛酸鈉進(jìn)行 6次實(shí)驗(yàn)取平均值,回收率值為 99.5%,RSD值為 1.41%。

3.4 4批成品辛酸鈉的含量測(cè)定結(jié)果比較,如表2。

表2 含量測(cè)定及中檢所氣相色譜法所測(cè)的結(jié)果比較[mol/(g·Pr)]

4 討論

室溫若高于 30℃,萃取 時(shí)特別容易乳化,影響結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)均在 20℃～30℃室溫進(jìn)行。萃取法測(cè)定人血白蛋白中辛酸鈉的含量簡(jiǎn)便易行快捷其精密度及重現(xiàn)性穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD均小于 2%,且與中檢所氣相色譜法比較,P＞0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,結(jié)果可靠,方法簡(jiǎn)便,值得推廣。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

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